一、rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化（论文文献综述）
邹慧儒,Steven Brookes,Xuebin Yang[1]（2014）在《牙髓细胞成牙本质分化的体外诱导:诱导因子及机制揭示》文中研究指明背景:研究表明牙髓细胞在一定条件下经诱导可以向成牙本质细胞方向分化,该过程由信号网络调控。目的:综述牙髓细胞向成牙本质细胞方向分化的诱导因子及作用机制的研究进展。方法:应用计算机检索1998年1月至2014年7月中国知网（CNKI）和万方数据库相关文献,检索词"牙髓细胞,成牙本质细胞分化"限定文献语言种类为中文。同时计算机检索同期PubMed数据库相关文献,检索词"dental pulp cells,odontoblastic differentiation",限定文献种类为英文。初检所得文献467篇。包括中文214篇,英文253篇。对于初检文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与本研究无关者或内容重复性的研究,最终纳入63篇文章进行综述。结果与结论:不同的诱导因子可以作为调控器,文章系统归纳了牙髓细胞在不同的诱导因子作用下,例如:骨形态发生蛋白、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸及多种生长因子等,通过相关信号通路信号转导在一定程度上参与牙髓细胞向成牙本质细胞分化定向诱导。但成牙本质细胞分化是一个复杂的过程,进一步从细胞及分子水平研究成牙本质分化诱导因子及相关机制对于牙齿再生治疗临床应用具有重要意义。
邓超男[2]（2014）在《Hedgehog信号在慢性氟中毒大鼠骨骼损伤中的作用机制及其与骨髓微环境变化的关系》文中研究指明目的本文通过体内外实验观察氟影响下成骨细胞中刺猬蛋白（Hedgehog, Hh）信号通路分子及其下游成骨相关因子、凋亡相关因子的表达变化，讨论Hh信号特异性阻断剂环巴胺（Cyclopamine, Cycl）的阻断效果；并检测氟中毒大鼠骨组织中与骨髓微环境相关的细胞因子变化情况，深入探讨氟影响大鼠骨骼病变时Hh信号变化与骨形成增强的关系，为氟骨症治疗靶点的研究提供实验依据。方法1、不同浓度的含氟水饲养大鼠6个月，观察氟斑牙发生情况及测定尿氟含量，明确氟中毒大鼠模型建立成功后，检测各组大鼠骨氟含量。光镜观察骨组织病理形态学改变；抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）鉴定破骨细胞并计数。酶联免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunosorbnent Assay, ELISA）检测各组大鼠血清骨碱性磷酸酶（Bone alkalinephosphatase, BALP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistant acidphosphataseform5b, TRACP5b）含量；免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）观察Hh信号分子和成骨、破骨相关因子的定位及表达情况，探讨Hh信号变化与骨形成、骨吸收间的关系。2、实时荧光定量PCR（Real-timefluorescence quantitative PCR, real-time PCR）、IHC和蛋白印迹（Western Blot）检测氟中毒大鼠骨组织Hh信号通路中主要因子的mRNA和蛋白表达情况，观察高低剂量氟对Hh信号变化的影响。3、给予高氟组大鼠Cycl腹腔注射，观察Cycl阻断后大鼠氟斑牙、尿氟和骨氟含量、血清BALP含量变化情况。细胞增殖与活性检测试剂盒（cell counting kit8, CCK8）筛选出体外培养成骨细胞时氟和Cycl的最佳药效浓度，偶氮偶联法（p-nitrophenyl phosphate，pNPP法）测定培养成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phhosphatase, ALP）活性。原位末端转移酶标记法（Transferase-mediated dUTP-bintin, TUNEL）定位并计数骨组织中凋亡成骨细胞个数；流式细胞术检测培养成骨细胞凋亡率。Real-timePCR、IHC和Western Blot检测动物模型和培养成骨细胞中Hh信号通路主要分子、其下游成骨相关因子及凋亡相关因子mRNA和蛋白表达，进一步探讨Cycl对氟暴露下培养的大鼠成骨细胞Hh信号的阻断效果及对成骨细胞增生的影响。4、Real-time PCR、原位杂交（in situ hybridization, ISH）和IHC检测氟中毒大鼠骨组织与骨髓微环境相关细胞因子的mRNA和蛋白表达，探讨氟中毒大鼠骨骼损伤时Hh信号与骨髓微环境变化的联系。结果1、慢性氟中毒大鼠氟斑牙发生率、尿氟和骨氟含量、血清BALP含量随染氟剂量的增加而逐渐增加，提示慢性氟中毒大鼠模型建立成功。氟中毒大鼠骨组织呈骨质硬化表现。2、氟中毒组大鼠Hh信号通路因子印度刺猬蛋白（Indian hedgehog,Ihh）和音速刺猬蛋白（Sonic hedgehog, Shh）及骨形成相关因子Runt相关转录因子2（runt-related transcription factor2, Runx2）和成骨特异性转录因子（Osterix, Osx）蛋白表达随染氟程度加重呈逐渐增强。但破骨细胞计数、血清TRACP5b、骨吸收相关因子核因子κB受体活化因子配体（receptor activatorfor nuclear factor-kappa B ligand, RANKL）和细胞核转录因子κB（nuclear factorkappa B, NF-κB）p50蛋白表达则在低氟组升高较高氟组明显。氟影响下，Hh信号因子变化与骨形成间呈正相关性。3、氟中毒组大鼠骨组织中Hh信号通路的配体（Ihh、Shh）、跨膜蛋白（Smoothened，Smo）及核转录因子神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1（Glioma-associated oncogene homolog, Gli1）、Gli2mRNA和蛋白表达也较对照组表达增强，呈剂量依赖性；跨膜蛋白受体（Ptched1，Ptch1）和核转录因子Gli3的mRNA和蛋白表达则在各组间比较无明显差异。4、应用Cycl阻断处理后，大鼠氟斑牙发生率、尿氟和骨氟含量与氟中毒组比较无明显差异。氟+Cycl处理组大鼠血清BALP含量较氟中毒组降低；培养细胞中，经氟和Cycl处理后ALP活性亦降低。Cycl处理后的大鼠骨组织及培养成骨细胞中Ihh、Shh、Smo、Gli1、Gli2mRNA和蛋白表达较氟中毒组表达减弱，Hh信号通路下游的成骨相关因子Runx2和β链蛋白（β-catenin）表达也较氟中毒组减弱，Osx则与氟中毒组无明显差异。5、氟中毒大鼠成骨细胞凋亡阳性率增加，但经Cycl处理后变化不明显；流式细胞术结果显示，2.5mg/L NaF处理组成骨细胞凋亡率较5mg/L NaF处理组升高更明显。经氟处理后再用Cycl阻断，细胞凋亡率较加氟处理组升高。体内外实验证实，氟暴露可致大鼠成骨细胞中B细胞淋巴瘤-2（B-cell Lymphoma-2,Bcl-2）表达降低、Bcl-2基因相关X蛋白（Bcl-2accociated X protein, Bax）表达增强、Bcl-2/Bax比值降低。再经Cycl处理后，Bcl-2、Bax表达和Bcl-2/Bax比值与氟中毒组比较变化不大。体外实验则显示，与氟处理组比较，氟+Cycl处理后Bcl-2表达增强、Bax表达降低、Bcl-2/Bax比值升高。6、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和IL-6可在慢性氟中毒大鼠成骨细胞中呈阳性表达，三者的mRNA和蛋白表达随染氟增加而增强，但IL-1β和IL-6在低氟组和高氟组间比较无明显差异。肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNFα）在成骨细胞中未见阳性表达，在巨核细胞中呈弱阳性表达，各组间比较表达强度无明显变化。骨氟、Ihh表达与TGF-β1、IL-1β和IL-6表达间均呈正相关性，骨氟、Ihh表达与TNFα表达间无明显相关性。结论1、在一定剂量氟暴露下，大鼠骨形成强于骨吸收，骨组织呈骨质硬化表现。BALP可作为一个判断氟致骨质硬化的早期生物学指标。2、氟可刺激大鼠成骨细胞Ihh表达增加，此信号经由Smo介导，激活Gli2后将信号转录入细胞核内，诱导Runx2表达，使成骨细胞增生、BALP活性增强，最终导致大鼠骨组织出现了骨质硬化表现。与此同时，氟致Hh信号活化可经由Bcl-2介导成骨细胞凋亡，凋亡产物又可进一步刺激成骨细胞增殖过程。3、Cycl对氟致Ihh信号活化有一定抑制作用，在体外实验中可抑制成骨细胞增生，为氟骨症治疗药物的研究提供了实验依据。4、Ihh信号影响骨髓微环境的变化，在一定程度上参与到氟骨症骨质硬化的发病机制中。
陈瑾[3]（2014）在《地塞米松对成牙骨质细胞粘附和矿化功能的调节作用》文中指出目的：牙根吸收是正畸治疗中的常见并发症，是牙根吸收与修复之间失衡所致。牙骨质是覆盖在牙根表面的一层矿化结缔组织，是牙周膜附着的重要结构。炎症或异常机械力刺激会激活破牙骨质前体细胞的分化、成熟，从而引起牙骨质的破坏，甚至波及牙本质而导致不可逆性牙根吸收，在这一过程中起中心作用的是成牙骨质细胞。成牙骨质细胞是牙周组织中牙骨质形成的重要功能细胞，在牙根形成、牙骨质修复过程中起着关键性作用，其主要功能是分泌新生的牙骨质样组织，形成牙骨质基质，对已经吸收的牙根表面进行修复。地塞米松是一种类固醇类激素，能增强组织的矿化能力，刺激成骨细胞表达矿化相关基因，在成骨过程中有着重要的地位，但国内外对于地塞米松作用于成牙骨质细胞后的分子生物学研究很少。因此，本研究的目的是探讨地塞米松对小鼠成牙骨质细胞株OCCM-30增殖活性、细胞粘附和矿化功能的影响，以初步了解地塞米松在成牙骨质细胞修复过程中所起的作用，从而为牙骨质再生提供理论依据。方法：本研究将地塞米松作用于成牙骨质细胞株OCCM-30，利用CCK-8法、细胞内ALP活性检测、茜素红染色鉴定矿化结节以及Q-PCR检测等方法，对不同浓度地塞米松作用下的，成牙骨质细胞的增殖能力、粘附及矿化能力进行初步研究。结果：1．地塞米松能够抑制成牙骨质细胞的增殖，且高浓度者（1×10-4mol/L）效果强度高于低浓度者。2．成牙骨质细胞具有ALP活性，和对照组相比，实验组ALP活性明显增高。3．茜素红染色结果显示，实验组与对照组相比，矿化结节的数量呈明显增多趋势，其中以1×10-7mol/L浓度组增加最为明显。4．Q-PCR结果显示，细胞粘附功能相关基因Cadherin-11和N-CadherinmRNA的表达随地塞米松浓度的增大而增加。5．Q-PCR结果显示，矿化相关基因ALP、BSP、OCN、Rumx-2mRNA的表达与对照组相比明显增高。结论：地塞米松可以增加成牙骨质细胞的粘附及矿化功能，并可能由此影响牙根吸收和修复的过程。
李丛华[4]（2013）在《重组腺病毒BMP-9对牙囊干细胞成骨向诱导分化的研究》文中提出牙周炎作为人类最普遍、最古老的疾病之一，是一种慢性感染性疾病；牙菌斑中的微生物引起牙齿支持组织形成炎症、产生深牙周袋、附着丧失与牙槽骨的垂直性或水平性吸收，最终导致牙齿松动和脱落；也是成年人牙齿缺失的主要原因[4]。牙周骨缺损修复和正常生理结构与生理功能的重建是牙周炎治疗的最终目的,目前对骨上袋缺损的再生性修复尚缺乏行之有效的治疗手段，不可能实现真正意义上的牙周生物学修复。牙源性干细胞与牙周组织工程技术为新的生物性修复再生牙周组织及其牙齿提供了可能，即用细胞工程和生物工程化的方法实现牙周组织再生，形成新附着。应用牙源性干细胞和组织工程技术，按照牙周组织生长与发育的基本原理和基本方法来模拟再现牙周组织整个发育过程才能真正地实现牙周组织再生。再生组织工程中，种子细胞的选择具有决定性意义；细胞获取方便，移植入机体后细胞生物学活性稳定，分化增殖能力强等是理想种子细胞必备条件。发育形成牙周组织的牙囊是一种疏松结缔组织，起源于外胚间充间充质，包绕着牙胚期的成釉器和牙乳头。一般认为牙周分泌牙骨质的成牙骨质细胞由靠近正在形成中牙根的牙囊最内层细胞发育而成，而牙周组织中分泌骨基质、形成部分牙槽骨的成骨细胞是邻近牙槽骨的外层牙囊细胞发育而成；成纤维细胞由中间层牙囊细胞发育，产生牙周膜纤维。作为牙周组织前体细胞的牙囊细胞具有自我更新能力和多向分化能力的干细胞特性与异质性，如果能将牙囊干细胞（dental follicle stem cells，DFCs）分离出来，这对研究牙周组织的生长发育形成起着至关重要的作用；对牙齿移植、牙再植及牙再生均具有重要的指导意义；DFCs较强的增殖分化能力也使其成为一种值得考虑的组织工程候选种子细胞。骨形成蛋白（Bone Morphogenetic Proteins，BMPs）是一类糖蛋白，在骨的发育和塑建中起着关键性作用，可通过多种途径多种方式促进细胞向成骨部位定向趋化、募集和促进成骨细胞定向分化，促进血管的生成和组织血管化形成，调节多种局部生长因子的活性，影响生长因子的形成，促进骨组织的形成。在已知对骨再生有促进作用的生长因子中，BMPs是最强的生长因子，目前已经分离出20余种，其中已报道具有成骨潜能是BMPs2、4、6、7、9；BMP9具有诱导和维持胚胎神经元的类胆碱分化功能，能够调节脂肪酸代谢和葡萄糖代谢，能够调节体内铁离子的动态平衡等多种重要生物学功能，但长期以来人们缺乏研究和了解BMP9在骨形成和骨再生中的作用。TC HE系统研究了在骨形成过程中的BMP2至BMP15共14种BMPs所起的生物学作用，结果表明这14种BMPs中，BMP9具有很强的促进软骨形成与成骨活性，作用强于BMP2和BMP7，也是BMPs家族中促进成骨分化的生长因子之一，极具研究潜力和应用前景[64,65]；但在口腔成骨方面和对DFCs的影响未见相关报道。DFCs具有成脂肪、成骨、成神经等多向分化潜能的干细胞特征，在适当的诱导条件下，可以多向分化。然而，由于细胞因子网络性调控和信号通路的复杂性以及研究手段的限制，DFCs的具体分化调控机制尚不明确。本研究旨在着力探讨重组腺病毒BMP-9基因转染大鼠DFCs的可行性及其转染后的成骨向分化与作用机制，以获得可用于牙周骨组织再生工程的基因修饰的种子细胞，为后续牙周组织工程治疗口腔骨缺损奠定基础。研究内容和研究结果如下：1.在解剖显微镜下，从SD大鼠下颌骨牙胚上剥离牙囊，组织块法和酶消化获取牙囊细胞原代培养、有限稀释法克隆纯化、细胞表型鉴定，成骨、成脂肪多向诱导分化，结果表明：DFCs具有成骨、成脂肪等多向分化潜能的干细胞特征，在定向成骨诱导分化过程中，没有出现成脂肪向分化。2.腺病毒介导的BMP-9转染第三代DFCs，设立空白对照组，绿色荧光病毒组（GFP组）、BMP组，成骨诱导组、联合组。通过观察细胞形态和MTT生长曲线变化、荧光显微镜及RT-PCR检测转染后BMP-9基因mRNA的表达；碱性磷酸酶ALP活性、ALP染色及钙茜素红染色测定转染后DFCs的早晚期成骨活性。结果表明：转染的DFCs稳定表达BMP-9，说明转染后的BMP-9基因能成功被转录并表达于DFCs；与未转染对照组相比较，转染组ALP染色及茜素红钙结节染色为阳性；转染组显着高于未转染组，说明DFCs有良好的骨向分化能力，也提示了BMP-9对DFCs有成骨诱导作用。3.应用抑制剂p38蛋白激酶抑制剂SB203580和ERK1/2激酶抑制剂PD98059干扰BMP-9转染的DFCs，用来阻断p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和细胞外信号调节激酶（ERK1/2）胞内信号传递，通过ALP活性及染色检测；Western blot分析；钙茜素红染色实验分析MAPKs信号通路对BMP-9诱导的DFCs成骨向分化过程中的调控和影响。结果表明：抑制MAPKp38的表达后降低了Ad-BMP-9诱导的DFCs的ALP的活性和ALP染色，且减少了钙盐沉积与骨桥蛋白（osteopontin,OPN）和骨钙素（osteocalin,OCN）的表达；抑制ERK1/2的活性后则相反。同时，Western blot分析显示Smad和MAPK通路激活，表明BMP诱导DFCs成骨向分化涉及到两条或可能更多的信号通路激活。研究结论：1.成功获得了大鼠DFCs克隆，合适诱导条件下能够多向诱导分化。2.在腺病毒BMP-9转染DFCs实验中，通过RT-PCR可检测到转染后BMP-9基因mRNA的表达，碱性磷酸酶和钙茜素红染色测定转染后DFCs的早期和晚期成骨活性，说明BMP-9可以成功地转染大鼠DFCs，转染后DFCs高表达BMP-9，且具有明显的成骨作用。3.应用MAPKp38蛋白激酶抑制剂和ERK1/2激酶抑制剂干涉BMP-9转染的DFCs，通过ALP活性及染色检测、Western blot分析、钙盐沉积实验观察BMP-9转染的DFCs成骨向分化可通过ERK1/2和p38信号通路进行调控，为后续试验奠定了基础。
杜建新,王效英,杨丕山[5]（2012）在《骨形成蛋白2在牙本质再生组织工程中的研究进展》文中提出骨形成蛋白2（BMP2）对牙胚发育、形态发生及细胞外基质的分泌有重要的调控作用,并且能刺激间充质干细胞向成骨细胞、成软骨细胞及成牙本质细胞的分化。近年来国内外就BMP2在牙本质再生组织工程中的作用进行了广泛的研究。本文将BMP2在牙本质再生组织工程中的诱导作用、分子机制及临床应用前景作一综述。
刘晗,孙叶芳,李芳,何文喜[6]（2007）在《Smad8在成牙本质细胞系MDPC-23内BMP-2信号转导中的作用》文中研究指明目的:观察成牙本质细胞系MDPC-23内Smad8蛋白的表达,以及Smad8蛋白在骨形成蛋白-2（bone morphogenetic protein-2,BMP-2）信号转导中的作用。方法:免疫组化法观察MDPC-23细胞内Smad8蛋白的表达,以及BMP-2和转化生长因子β1（TGF-β1）对MDPC-23细胞内Smad8分子定位的改变。结果:MDPC-23细胞的胞浆和胞核均有Smad8表达,在BMP-2刺激1h后,Smad8从胞浆向胞核转位聚集。TGF-β1刺激后无类似现象发生。结论:成牙本质细胞系MDPC-23内存在Smad8的表达,且Smad8可特异性地将BMP-2的信号由胞浆转至胞核,但不能转导TGF-β1信号。
何文喜,牛忠英,赵守亮,李萍,高杰[7]（2006）在《转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用》文中提出目的研究成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白（DSPP）基因转录调控中的作用,探索成牙本质细胞内DSPP基因表达的调控机制。方法细胞免疫组化观察MDPC-23细胞内c-Jun和c-Fos蛋白分子的表达。瞬时转染和报告基因检测c-Jun和c-Fos在DSPP基因转录中的作用。结果MDPC-23细胞表达c-Jun和c-Fos蛋白,c-Jun和c-Fos主要分布在MDPC-23细胞胞核。c-Jun或c-Fos过表达均显着抑制DSPP基因启动子活性。结论证实成牙本质细胞内转录因子c-Jun和c-Fos参与下调DSPP基因表达。
何文喜,赵守亮,陈健,牛忠英[8]（2002）在《rhBMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化》文中指出目的:观察骨形成蛋白（bone morphogenetic protein）特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2（recombinant hu-man bone morphogenetic protein,rhBMP2）刺激培养的细胞,对照组用0.2％FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激。免疫组化观察。结果:TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smadl蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smadl从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用。结论:首次观察到Smadl基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smadl转位至核内引起基因表达实现的。
余擎[9]（2002）在《核心结合因子a1在牙齿发育矿化中作用机制的研究》文中研究表明牙齿的发育矿化是上皮和间充质相互作用的结果，研究表明，众多的基因参与了牙齿的发育矿化过程，包括生长因子及其受体、信号分子、转录因子和细胞外基质蛋白等。转录因子是一类可以通过与下游靶DNA结合，从而调控下游基因转录的分子，它们接受来自生长因子等方面的信号，再将这些指令具体地传递给直接执行功能的蛋白分子。cbfal是一种成骨分化特异性转录因子，可以诱导成骨前体细胞合成和分泌ALP、OC、OPN、BSP等矿化相关蛋白，向成骨细胞分化。最近国外学者发现cbfa1在牙齿发育过程有表达；基因敲出的小鼠不仅全身骨发育异常，还出现牙齿发育障碍，而且牙齿特异的成釉蛋白基因的启动子上也发现了cbfa1结合位点。本课题采用细胞培养、PCR、基因重组、基因转染、免疫组织化学、反义核酸等方法研究cbfa1在牙齿发育矿化中的作用，在牙乳头细胞中探讨几种生长因子对cbfa1的作用以及cbfa1对矿化相关基因转录的调控，从而在转录水平阐明牙齿发育矿化的分子调控机制，为进一步研究奠定基础。 首先我们从小鼠牙胚组织中成功地克隆到了小鼠cbfa1全部编码区，约1.7kb，进一步证实了cbfa1在牙胚组织中的存在；根据cbfa1的基因结构和读框，我们选取了其中一个含有部分runt结构域和核定位信号的约204bp的基因片段，采用基因重组的方法成功地构建了原核表达载体pRSETA-cbfa1（204），并通过对T7启动子有较好效果的大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达，结果获得了预计的约14KD的cbfa1融合蛋白，并用Ni-NTA柱亲和层析进行了初步纯化；纯化的cbfa1融合蛋白免疫新西兰大白兔，获得了滴度为1/28的多克隆抗体，采用免疫组织化学和western blot的方法证明了所制备的抗体是成功的，效价分别为1:400和1:1000，为进一步的研究奠定了物质基础。 第四军医大学博士学位论文4 随后我们采用自行制备的抗体对牙胚组织和体外培养的人牙乳头细胞进 行了免疫组织化学研究，发现：cbfal在帽状期牙胚中表达于内釉上皮、外釉 上皮、牙胚间充质和牙囊；在钟状早、中期牙胚，Cbfal表达于内釉细胞、成 釉细胞以及紧靠成牙本质细胞层的牙乳头细胞，在牙槽骨中呈强阳性表达：钟 状晚期，成牙本质细胞和成釉细胞分泌牙本质和牙釉质基质，。bfal在牙乳头 表达为阴性，成牙本质细胞层弱阳性，成釉细胞为阳性或强阳性，牙囊中成骨 细胞强阳性表达，牙囊细胞弱阳性表达。表明。bfal参与了牙胚发育过程，尤 其是在成牙本质细胞和成釉细胞分化中可能起着重要作用。体外研究表明，体 外培养的人牙乳头细胞没有。bfal基因和蛋白的表达，当采用脂质体法瞬时转 染构建的真核重组质粒pGDNA3七 后，细胞中出现了Cbfal基因和蛋白的 表达，为进一步稳定转染作好了准备。 由于体外培养的人牙乳头细胞不表达。bfal，而体内牙乳头细胞的表达出 现在紧邻成牙本质细胞层的下方，于是我们设计了体外稳定转染。bfal基因的 实验。将以构建好的含全部编码区的真核表达重组质粒PCDNA3七，用脂 质体介导转染牙乳头细胞，并用 G4进行多次筛选，获得了 3个抗性克隆， 经过基因水平和蛋白水平多种方法的验证，鉴定出1个抗性克隆能稳定表达 。bfal基因和蛋白，并对其进行了一系列研究。结果表明：转染cbfal基因后 牙乳头细胞的增殖能力减弱，而与矿化相关的有关指标增高，如。AMP：ALP。 OC等。Cbfal不仅可以上调ALP和OC的活性，还能诱导OPN、BSP、ON 和DMPI这些矿化相关蛋白的表达，但对牙本质特异性蛋白DSP的表达和其 编码基因DSPP无明显作用，对1型胶原的表达量也有所增加，但经图像分析 和统计学处理无显着性差异。这些结果表明，牙乳头细胞也是cbfal作用的靶 细胞，Cbfal可以诱导牙乳头细胞表达矿化相关的基因和蛋白，提示Cbfal在 牙乳头细胞分化为成牙本质细胞中起着非常关键的作用。 为了探讨几种生长因子对牙乳头细胞中。bfal的作用，我们采用RT－PCR、 WestCm blot和免疫组织化学的方法观察 BMPZ、TGF p；、FGFZ和 EGF四种生 D叩。tment Of印e。t。e De。t。时and砌咖加n闲J 风WU 第四军医大学博土学位论文5 长因子在牙乳头细胞中对cbfal基因表达、蛋白合成和蛋白表达部位的影响。 结果表明：200ng／llil BMPZ和 50gb的FGFZ刺激正常人牙乳头细胞6h后 cbfal的表达明显升高，而 20ng／llil和 40n归的 TGF p；作用 12 h能抑制稳定 转染Cbfal基因的细胞中cbfal InRNA的表达；EGF则对牙乳头细胞中Cbfal 的表达没有显着影响。
何文喜,牛忠英,赵守亮,陈健[10]（2001）在《BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达的变化》文中指出目的 :观察人牙乳头细胞内Smad1mRNA的表达及在BMP2作用下 ,细胞内Smad1mRNA的表达变化 ,探讨人牙乳头细胞内Smad1信号途径在BMP2调控牙乳头细胞分化中的作用。方法 :原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理后 ,提取总RNA ,采用Northernblot法 ,从mRNA水平观察Smad1基因的表达及含量变化。结果 :从mRNA水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达 ,但在BMP2作用 6、12、2 4h后 ,Smad1mRNA表达量无显着变化。结论 :人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径 ,牙乳头细胞内Smad1mRNA表达量不受BMP2调控。
二、rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化（论文提纲范文）
（1）牙髓细胞成牙本质分化的体外诱导:诱导因子及机制揭示（论文提纲范文）
| 文章亮点: |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 质量评估 |
| 1.4 数据的提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 文献检索结果及质量评价 |
| 2.2.1 转化生长因子β与Smad信号通路 |
| 2.2.2 骨形态发生蛋白2与Smad、丝裂原活化蛋白激酶信号通路 |
| 2.2.3 β-catenin与Wnt/β-catenin信号通路 |
| 2.2.4 矿化诱导液 |
| 2.2.5 无机三氧化聚合物、Biodentine、Bioaggregate以及i Root |
| 2.2.6 釉基质蛋白、釉原蛋白以及牙本质基质蛋白 |
| 2.2.7 其他方面 |
| 3 结论Conclusion |
（2）Hedgehog信号在慢性氟中毒大鼠骨骼损伤中的作用机制及其与骨髓微环境变化的关系（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 Ihh、Shh 蛋白在慢性氟中毒大鼠骨组织中的表达及其与骨损害的相关性 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 高低剂量氟对大鼠成骨细胞中 Hh 信号相关因子表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 体内外阻断 Hh 信号通路对氟致成骨细胞增殖、凋亡的影响及机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四部分 氟中毒大鼠成骨细胞中骨髓微环境中细胞因子表达变化及与 Hh 信号的关系 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 本文创新点 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 中英文缩略词表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 博士期间参与科研项目 |
| 博士期间发表文章 |
| 博士期间所获奖励 |
（3）地塞米松对成牙骨质细胞粘附和矿化功能的调节作用（论文提纲范文）
| 主要英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 实验一：地塞米松对成牙骨质细胞增殖和钙粘蛋白-11 及 N-钙粘蛋白 mRNA 表达的调节作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二：地塞米松对成牙骨质细胞矿化功能的调节作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）重组腺病毒BMP-9对牙囊干细胞成骨向诱导分化的研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠 DFCs 的分离培养和纯化鉴定 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 重组腺病毒 BMP-9 转染的 DFCs 成骨向诱导分化研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2. 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 重组腺病毒 BMP-9 转染的 DFCs 成骨向诱导分化调控机制的初步研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 文献综述：骨形成蛋白和干细胞重建颅颌面骨缺损的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 参加会议和学习培训 |
| 攻读博士期间的课题申报 |
（5）骨形成蛋白2在牙本质再生组织工程中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 牙本质再生 |
| 2 骨形成蛋白2 (BMP2) |
| 3 BMP2调控牙胚的发育 |
| 4 BMP2在牙本质再生组织工程中的作用 |
| 5 BMP2调控成牙本质细胞分化的分子机制 |
| 6 结束语 |
（8）rhBMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1人牙乳头细胞原代培养和实验分组 |
| 1.2免疫组化染色 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（9）核心结合因子a1在牙齿发育矿化中作用机制的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 综述一 牙胚发生和形成的分子机制 |
| 综述二 成牙本质细胞分化的分子机制 |
| 综述三 核心结合因子a1的研究进展 |
| 研究内容 |
| 第一部分 核心结合因子a1的cDNA克隆、蛋白表达和多克隆抗体的制备 |
| 实验一 小鼠核心结合因子a1成熟肽编码区的cDNA克隆及序列分析 |
| 实验二 小鼠核心结合因子a1部分编码区在大肠杆菌中的表达和纯化 |
| 实验三 小鼠核心结合因子a1多克隆抗体的制备和鉴定 |
| 第二部分 核心结合因子a1在牙齿组织和细胞中的表达 |
| 实验一 核心结合因子a1在牙胚发育过程中的表达 |
| 实验二 核心结合因子a1在人牙乳头细胞中的免疫组织化学研究 |
| 第三部分 核心结合因子a1对牙乳头细胞作用机制的研究 |
| 实验一 稳定表达核心结合因子a1的人牙乳头细胞模型的建立和鉴定 |
| 实验二 核心结合因子a1对牙乳头细胞增殖和矿化能力的影响 |
| 实验三 核心结合因子a1对牙乳头细胞表达细胞外基质蛋白的影响 |
| 第四部分 几种生长因子对核心结合因子a1的调控机制 |
| 实验一 几种生长因子对体外培养的牙乳头细胞表达核心结合因子a1的研究 |
| 实验二 核心结合因子a1在BMP_2调控细胞外基质蛋白表达中的作用 |
| 全文总结 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 课题完成所在实验室情况 |
| 简历 |
| 参考文献 |
| 附图 |
（10）BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达的变化（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 人牙乳头细胞原代培养 |
| 1.2 实验分组 |
| 1.3 Northern印迹杂交 |
| 1.3.1 总RNA的提取 |
| 1.3.2 探针的制备 |
| 1.3.3 Northern印迹杂交 |
| 2 结果 |
| 2.1 总RNA |
| 2.2 Northern 印迹杂交 |
| 3 讨论 |
四、rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化（论文参考文献）
- [1]牙髓细胞成牙本质分化的体外诱导:诱导因子及机制揭示[J]. 邹慧儒,Steven Brookes,Xuebin Yang. 中国组织工程研究, 2014(37)
- [2]Hedgehog信号在慢性氟中毒大鼠骨骼损伤中的作用机制及其与骨髓微环境变化的关系[D]. 邓超男. 贵阳医学院, 2014(07)
- [3]地塞米松对成牙骨质细胞粘附和矿化功能的调节作用[D]. 陈瑾. 广州医科大学, 2014(02)
- [4]重组腺病毒BMP-9对牙囊干细胞成骨向诱导分化的研究[D]. 李丛华. 重庆医科大学, 2013(03)
- [5]骨形成蛋白2在牙本质再生组织工程中的研究进展[J]. 杜建新,王效英,杨丕山. 临床口腔医学杂志, 2012(03)
- [6]Smad8在成牙本质细胞系MDPC-23内BMP-2信号转导中的作用[J]. 刘晗,孙叶芳,李芳,何文喜. 临床口腔医学杂志, 2007(03)
- [7]转录因子c-Jun和c-Fos在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用[J]. 何文喜,牛忠英,赵守亮,李萍,高杰. 华西口腔医学杂志, 2006(01)
- [8]rhBMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化[J]. 何文喜,赵守亮,陈健,牛忠英. 华西口腔医学杂志, 2002(06)
- [9]核心结合因子a1在牙齿发育矿化中作用机制的研究[D]. 余擎. 第四军医大学, 2002(02)
- [10]BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达的变化[J]. 何文喜,牛忠英,赵守亮,陈健. 牙体牙髓牙周病学杂志, 2001(06)