一、芎归胶囊对小鼠缺血心肌的保护作用（论文文献综述）
宋欣丽[1]（2021）在《龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价》文中研究说明研究目的1.通过建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用;并且探讨其保护作用是否与线粒体功能障碍以及内质网应激有关。2.通过Meta分析方法对中成药治疗心肌缺血再灌注损伤疗效进行系统评价,为临床使用中成药治疗心肌缺血再灌注损伤治疗提供循证医学依据。研究方法1.实验研究:采用随机数字表法将Wistar大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组,通过结扎左前降支30min后复灌,构建大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,假手术组、模型组予生理盐水灌胃,龙牙楤木总皂苷剂量组分别按50、100、200mg/（kg·d）灌胃处理。2,3,5—氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法测定大鼠心肌梗死面积,酶联免疫法检测各组大鼠肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白T（cTnT）的含量,TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）染色法观察心肌组织细胞凋亡指数;使用透射电镜观察心肌组织中线粒体结构和形态变化,提取各组大鼠心肌组织线粒体,活性氧荧光（DCFH-DA）探针法观察线粒体活性氧簇（Reactive Oxygen Species,ROS）的生成变化、JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位变化、比色法观察腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine Triphosphate,ATP）的形成及琥珀酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase,SDH）活性变化情况。免疫组织化学检测法、蛋白质印迹法（Western blot）法检测内质网经典信号通路PERK-eIF2α通路中蛋白激酶R样内质网激酶（proteinkinase R-like ER kinase,PERK）、p-蛋白激酶R 样内质网激酶（p-protein kinase R-like ER kinase,p-PERK）、真核起始因子 2（eukaryotic initiation factor 2,eIF2α）、p-真核起始因子 2（p-eukaryotic initiation factor 2,p-eIF2α）相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测PERK、eIF2α中mRNA的含量。2.临床研究:通过全面搜索并筛选数据库中自建库到2021年1月1日以来发表的关于中成药治疗心肌缺血再灌注损伤患者的随机临床对照试验,对相关结局指标利用RevMan5.3软件进行系统评价。评价指标包括心肌损伤标志物:肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTNI）、肌钙蛋白T（cTNT）、再灌注心律失常发生率、不良事件发生率、左室射血分数（LVEF）、高敏C-反应蛋白（hs-CRP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）等。研究结果实验研究:实验一:TTC染色结果显示,sham组、I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组心肌梗死面积占总心肌面积百分比分别为:0%、72%、56%、52%、31%。其中,与sham组相比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高组心肌梗死面积所占比例明显增加,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;龙牙楤木总皂苷各剂量组和I/R组相比较,从各组心肌梗死面积所占百分比可见,龙牙楤木总皂苷各组梗死面积比值均低于I/R组,并且随着龙牙楤木总皂苷剂量的增加,心肌梗死面积所占比值逐渐降低,统计学分析显示,龙牙楤木总皂苷低剂量组统计结果显示无统计学差异（P>0.05）;龙牙楤木总皂苷中剂量组结果显示具有统计学意义（P<0.05）,而龙牙楤木总皂苷高剂量组结果提示具有显着统计学意义（P<0.01）。TUNEL染色结果显示,从颜色上看,sham组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为蓝色;I/R组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为黄褐色;龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量黄褐色细胞核所占比例介于sham组和I/R组之间,但呈逐渐减少的趋势。sham组细胞凋亡很不明显,可见存在少量散在凋亡细胞;具体的凋亡细胞百分比见下表。与sham组比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组大鼠心肌细胞凋亡百分比则明显增加,阳性凋亡细胞数明显升高,统计学分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异具有统计学意义（P<0.05）,中、高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01）。酶联免疫法结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高CK-MB、cTnT含量,均有所显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异无明显统计学意义（P>0.05;P>0.05）,龙牙楤木总皂苷中剂量组差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.05）,龙牙楤木总皂苷高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）。实验二:透射电镜结果显示:sham组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。I/R组心肌细胞大小及形态有较大差异,可见萎缩及坏死肌细胞,肌原纤维排列紊乱;肌细胞内线粒体分布不均,部分聚集,线粒体大小及形态有较大差异,内脊大多模糊。龙牙楤木总皂苷低剂量组心肌细胞形态有一定差异,肌原纤维排列不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体肿胀,内脊扩张、大多结构模糊;中剂量组心肌细胞大小及形态稍不规则,细胞核呈长梭形,肌原纤维排列稍不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊部分结构清晰、部分模糊;高剂量组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。DCFH-DA探针法检测ROS水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ROS水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ROS水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。比色法观察ATP水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ATP水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ATP水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高线粒体膜电位水平水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,线粒体膜电位水平水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;比色法观察SDH活性水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高SDH活性水平均有所升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,SDH活性水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。实验三:Western blot方法检测心肌组织中PERK、eIF2α的表达。结果显示:与sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显变化,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK的表达也没有明显改变,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。Western blot方法检测心肌组织中p-PERK、p-eIF2α的表达结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK、p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK、p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。qRT-PCR 方法检测心肌组织中PERK、eIF2αmRNA的表达,结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高PERK、eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,PERK、eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化结果显示:与 sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显改变,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达也没有太大差异,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）。免疫组化方法检测心肌组织中p-PERK的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK表达水平均显着升高,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化方法检测心肌组织中p-eIF2α的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有统计学意义（P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷中、高剂量组差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05）。临床研究:最终纳入研究96项,中文文献92篇,英文文献4篇。Meta分析结果显示:CK-MB（SMD:-1.86,95%CI:[-2.33,-1.38],I2=95%,P<0.00001）;CK（SMD:-102.21,95%CI:[-129.34,-75.09],I2=100%,P<0.00001）;cTnI（SMD:-0.80,95%CI:[-0.97,-0.62],I2=99%,P<0.00001）,cTnT（SMD:-1.55,95%CI:[-1.8,-1.3],I2=100%,P<0.00001）;再灌注心律失常发生率（MD:-0.42,95%CI:[-0.34,-0.51],I2=45%,P<0.00001）;不良事件发生率（MD:-0.28,95%CI:[-0.22,-0.36],I2=12%,P<0.00001）;LVEF（SMD:-4.89,95%CI:[-3.9,-5.87],I2=86%,P<0.00001）;HsCRP（SMD:-5.04,95%CI:[-6.92,-3.16],I2=99%,P<0.00001）;MDA（SMD:-4.25,95%CI:[-5.22,-3.28],I2=99%,P<0.00001）;SOD（SMD:-15.26,95%CI:[-10.74,-19.78],I2=99%,P<0.00001）;NO（SMD:-15.26,95%CI:[-5.29,-7.51],I2=97%,P<0.00001）;LDH（MD:-13.83,95%CI:[-20.31,-7.35],I2=0%,P<0.00001）。研究结论1.龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可减少心肌酶漏出,抑制心肌细胞凋亡,改善损伤心肌组织和线粒体结构,抑制SDH活性,同时降低ROS生成,减缓蛋白磷酸化,其机制可能与降低线粒体功能障碍、抑制内质网应激的过度激活有关。龙牙楤木总皂苷的保护作用与剂量呈正相关,发挥大鼠抗心肌缺血再灌注损伤作用的最适有效剂量在200mg/（kg·d）左右。2.中成药联合西医常规治疗心肌缺血再灌注损伤疗效肯定,尤其在降低再灌注性心律失常和不良事件发生率方面效果显着,但鉴于纳入研究数量偏少、样本量较小、方法学质量偏低,未来需要更多高质量的随机对照试验来证实。
娄田田[2]（2021）在《暖心胶囊对射血分数保留的心力衰竭患者能量代谢的作用研究》文中认为目的:1.明确暖心胶囊是否改善射血分数保留的心力衰竭患者心肌能量消耗。2.明确暖心胶囊是否改善氧化应激损伤诱导的射血分数保留的心功能障碍。3.明确暖心胶囊是否通过激活AMPK/PGC-1 α信号通路改善氧化应激损伤诱导的心肌能量代谢障碍而抗射血分数保留的心力衰竭。4.明确暖心胶囊是否通过激活AMPK/JNK信号通路抑制氧化应激损伤诱导的线粒体凋亡途径而抗射血分数保留的心力衰竭。方法:第一部分临床观察:暖心胶囊改善射血分数保留的心力衰竭患者心肌能量消耗因处于疫情持续期间,人员流动受限,最初收集符合纳入标准的射血分数保留的心力衰竭患者35例,通过严格的病例筛查流程,最后完成临床观察20例。采用随机号码表法,随机分为治疗组10例和对照组10例。两组均给予规范化的西医治疗。治疗组在对照组基础上加用暖心胶囊（NX,由红参、熟附子、薏苡仁、橘红组成,广东省中医院制剂室制备,粤药制字Z20080138,每粒装0.5g,每次3粒,每天3次,口服）,治疗4周。观察两组患者治疗前后的MEE、cESS、LVM、LVMI、NT-proBNP、LVEF、中医证候积分和安全性指标变化。第二部分实验研究:暖心胶囊改善氧化应激损伤诱导的心功能障碍的研究1.选取雄性8周龄C57BL/6J小鼠,采用TAC建立构建HFpEF模型。术后3天将造模后存活的小鼠随机分为4组:①Sham组,②TAC组,③TAC+NXL组,④TAC+NXH组。TAC+NXL组和TAC+NXH分别给予灌胃NX剂量0.64g/kg/d和1.72g/kg/d,余下2组给予灌胃等体积的生理盐水。连续给药4周后,检测小鼠各项功能指标。2.选取来源于大鼠胚胎的H9c2心肌细胞,通过3%H2O2刺激细胞建立氧化应激损伤模型,细胞先用不同浓度的NX孵育4h,然后让细胞暴露于不同浓度和不同时间的3%H2O2中行氧化应激诱导损伤,根据细胞活力检测筛选出NX和3%H2O2作用于心肌细胞的最佳浓度和时间。3.小鼠行超声心动图评估心脏功能,检测指标包括LVIDd、LVIDs、EF、FS;检测血清BNP水平评估HFpEF的程度。4.采用MTT法检测心肌细胞的活力和LDH法行细胞损伤检测。5.应用DCFH-DA探针法,通过流式细胞术评估心肌细胞内ROS的水平。6.采用Seahorse XFe24分析仪,通过OCR值评估H9c2心肌细胞线粒体呼吸功能。第三部分实验研究:暖心胶囊改善氧化应激损伤诱导的心肌能量代谢障碍的研究1.选取雄性8周龄C57BL/6J小鼠,采用TAC建立构建HFpEF模型。术后3天将造模后存活的小鼠随机分为4组:①Sham组,②TAC组,③TAC+NX组,④TAC+NX+Compound C（Comp C）组。TAC+NX 组给予灌胃 NX剂量 0.64g/kg/d,TAC+NX+Comp C组灌胃暖心胶囊剂量同时给予腹腔注射Compound C（一种选择性ATP竞争性AMPK抑制剂）,余下2组给予灌胃等体积的生理盐水。连续给药4周后,检测小鼠各项功能指标。2.选取来源于大鼠胚胎的H9c2心肌细胞,采用3%H2O2刺激大鼠H9c2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,细胞先用4mg/ml的NX孵育心肌细胞4h,然后再加入5 μ m的Compound C孵育2h,最后让细胞暴露于600 μ m的3%H2O2下1.5h行氧化应激诱导损伤。细胞实验分为4组;①Control（Con）组,②H2O2组,③H2O2+NX组,④H2O2+NX+Comp C组。3.小鼠超声心动图和血清BNP水平检测方法同第二部分基础实验。4.心肌细胞MTT和LDH检测同第二部分基础实验。5.心肌细胞内ROS检测同第二部分基础实验。6.应用化学发光法检测小鼠和心肌细胞内ATP浓度。7.采用Seahorse XFe24分析仪,通过OCR值评估H9c2心肌细胞线粒体呼吸功能;心肌细胞内应用葡萄糖、脂肪酸和谷氨酰胺三大通路抑制剂,测定OCR值评估H9c2心肌细胞能量代谢底物。8.提取小鼠组织心室蛋白、心肌细胞全蛋白,通过Western blot法检测小鼠和心肌细胞内p-AMPK、AMPK和PGC-1 α的蛋白表达水平。第四部分实验研究:暖心胶囊抑制氧化应激损伤诱导的线粒体凋亡的研究1.动物和细胞实验对象和分组情况同第三部分基础实验。2.应用Annexin V-FITC/PI染色法,通过流式细胞术评估心肌细胞凋亡的情况。3.采用JC-1染色法,通过流式细胞术评估心肌细胞线粒体膜电位情况。4.提取小鼠组织心室蛋白、心肌细胞全蛋白及细胞质蛋白,通过Western blot法检测小鼠和心肌细胞内 Bcl-2、BAX、cytochrome c、cleaved caspase-3、p-AMPK、AMPK、p-JNK和JNK的蛋白表达水平。结果:第一部分临床观察:暖心胶囊改善射血分数保留的心力衰竭患者心肌能量消耗1.治疗后治疗组MEE的数值较治疗前下降（P>0.05）,治疗后对照组MEE的数值较治疗前升高（P<0.05）,治疗后治疗组的MEE数值明显低于治疗后对照组的MEE数值（P<0.05）。2.治疗后治疗组cESS的数值较前无明显变化（P>0.05）,治疗后对照组cESS的数值较治疗前升高（P>0.05）,治疗后治疗组的cESS数值明显低于治疗后对照组的 cESS 数值（P<0.05）。3.治疗后治疗组LVM和LVMI的数值较治疗前下降（P<0.05）,治疗后对照组LVM和LVMI的数值较前无变化（P>0.05）,治疗后治疗组的LVM和LVMI数值低于治疗后对照组的LVM数值（P>0.05）。4.治疗后治疗组NT-proBNP的数值较治疗前明显下降（P<0.05）,治疗后对照组NT-proBNP的数值较治疗前明显升高（P>0.05）,治疗后治疗组的NT-proBNP数值低于治疗后对照组的NT-proBNP数值（P>0.05）。5.治疗后治疗组LVEF的数值较治疗前稍升高（P>0.05）,治疗后对照组LVEF的数值较治疗前无变化（P>0.05）,治疗后治疗组的LVEF数值高于治疗后对照组的LVEF 数值（P<0.05）。6.治疗后治疗组中医证候积分的数值较治疗前下降（P<0.05）,治疗后对照组中医证候积分的数值较前无明显变化（P>0.05）,治疗后治疗组的中医证候积分的数值明显低于治疗后对照组的中医证候积分的数值（P<0.05）。7.治疗组和对照组的患者治疗前后的血常规、电解质、肝功能和肾功能指标治疗前后差异均无统计学意义（P>0.05）,且治疗过程中治疗组和对照组患者均未出现过敏反应、与试验药物有关的不良反应及试验过程中的病情恶化。第二部分实验研究:暖心胶囊改善氧化应激损伤诱导的心功能障碍的研究1.小鼠经TAC术后4周后,与Sham组相比,TAC组HFpEF小鼠LVIDd稍增加（P>0.05）,LVIDs明显增加（P<0.05）,心室明显扩张;与TAC组相比,NXL组的LVIDd 明显降低（P<0.05）,NXH 组的 LVIDd 降低（P>0.05）,NXL 和 NXH 组的 LVIDs均明显降低（P<0.05）。与Sham组相比,TAC组HFpEF小鼠的EF和FS值显着降低（P<0.05）;与TAC组相比,NXL和NXH组的EF和FS值明显增加（P<0.05）。2.小鼠经TAC术4周后,与Sham组相比,TAC组的血清BNP水平显着升高（P<0.05）;与TAC相比,NXL组和NXH血清BNP水平均显着降低（P<0.05）。3.MTT法结果显示,与0μM的H2O2相比,随着H2O2浓度的逐渐增加细胞活力逐渐降低（P<0.05）,其中600μMH2O2的心肌细胞活力显着降低0.48±0.04（P<0.05,）;与Oh的H2O2相比,随着H2O2孵育心肌细胞的时间逐渐增加细胞活力逐渐降低（P<0.05）,其中1.5h H2O2的心肌细胞活力显着降低0.40±0.01（P<0.05）;与0mg/ml的NX组相比,NX 4mg/ml和NX 6mg/ml的细胞活力由0.42±0.01明显升高至0.73±0.02和0.68±0.01（P<0.05）,最终选择NX的保护浓度是4mg/ml和6mg/ml,其中4mg/ml的保护作用最强。4.MTT和LDH检测结果显示,与Con组相比,H2O2组的细胞活力显着降低（P<0.05）,细胞损伤明显升高（P<0.05）;与H2O2组相比,NXL和NXH组的细胞活力明显增强（P<0.05）,细胞损伤明显降低（P<0.05）。5.细胞内ROS检测结果显示,与Con组相比,H2O2组的ROS产生量明显升高（P<0.05）;与H2O2组相比,NXL和NXH组的ROS产生量明显降低（P<0.05）。6.Seahorse XFe系统结果显示,与Con组相比,H2O2组的基础呼吸、最大呼吸和ATP产生的OCR值显着降低（P<0.05）;与H2O2组相比,NX组的基础呼吸和ATP产生的OCR值明显升高（P<0.05）,最大呼吸OCR值明显升高（P>0.05）。第三部分实验研究:暖心胶囊改善氧化应激损伤诱导的心肌能量代谢障碍的研究1.小鼠经TAC术后4周后,与Sham组相比,TAC组HFpEF小鼠LVIDd稍增加（P>0.05）,LVIDs明显增加（P<0.05）,心室明显扩张;与TAC组相比,NX组的LVIDd和LVIDs明显降低（P<0.05）。与Sham组相比,TAC组HFpEF小鼠的EF和FS值显着降低（P<0.05）;与TAC组相比,N组的EF和FS值明显增加（P<0.05）。Compound C预处理后,LVIDd和LVIDs均较NX组明显升高（P<0.05）,EF和FS均较NX组明显降低（P<0.05）。2.小鼠经TAC术4周后,与Sham组相比,TAC组的血清BNP水平显着升高（P<0.05）;与TAC相比,NX组血清BNP水平均显着降低（P<0.05）;Compound C预处理后较NX组显着升高血清BNP的水平（P<0.05）。3.小鼠经TAC术后4周后,与Sham组相比,TAC组中的ATP浓度显着降低P<0.05);与TAC组相比,NX组ATP的浓度明显升高（P<0.05）;Compound C预处理后ATP浓度较NX组明显降低（P<0.05）。4.H9c2细胞内,与Con组相比,H2O2组中的ATP浓度显着降低（P<0.05）;与H2O2组相比,NX组的ATP浓度明显升高（P<0.05）;Compound C预处理后ATP浓度较NX组明显降低（P<0.05）。5.H9c2细胞内,与Con组相比,H2O2组的细胞活力显着降低（P<0.05）,细胞损伤显着升高（P<0.05）,ROS的产生量显着升高（P<0.05）;与H2O2组相比,NX组细胞活力明显增强（P<0.05）,细胞损伤明显降低（P<0.05）,ROS的产生量明显降低（P<0.05）;Compound C预处理后,与NX组相比,细胞活力显着降低（P<0.05）,细胞损伤显着升高（P<0.05）,ROS的产生量显着升高（P<0.05）。6.H9c2细胞内,与Con组相比,H2O2组的基础呼吸、最大呼吸、备用呼吸能力和ATP产生的OCR值显着降低（P<0.05）;与H2O2组相比,基础呼吸、最大呼吸、备用呼吸能力和ATP产生的OCR值均明显升高（P<0.05）;Compound C的预处理后,基础呼吸和ATP产生的OCR值降低（P>0.05）,最大呼吸和备用呼吸能力的OCR值降低（P<0.05）。7.H9c2 细胞内,基础呼吸的情况下,Media-Con 组、Etomoxir-Con 组、Media-H202组、Etomoxir-H2O2组、Media-NX组和Etomoxir-NX组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）。最大呼吸的情况下,Media-Con组和Etomoxir-Con组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）,Media-H2O2组和Etomoxir-H2O2组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）,Media-NX 组和 Etomoxir-NX 组的线粒体 OCR 值无明显变化（P>0.05）,同时与Con组相比,H2O2组的线粒体OCR值较前下降（P<0.05）,NX组的线粒体OCR值较H2O2组升高（P<0.05）。8.H9c2细胞内,基础呼吸的情况下,Media-Con组、BPTES-Con组、Media-H2O2组、BPTES-H2O2组、Media-NX组和BPTES-NX组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）。最大呼吸的情况下,Media-Con组和BPTES-Con组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）,Media-H2O2组和BPTES-H2O2组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）,Media-NX组和BPTES-NX组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）,同时与Con组相比,H2O2组的线粒体OCR值较前下降（P<0.05）,NX组的线粒体OCR值较H2O2组升高（P<0.05）。9.H9c2细胞内,基础呼吸的情况下,Media-Con组、UK5099-Con 组、Media-H2O2组、UK5099-H2O2组、Media-NX组和UK5099-NX组的线粒体OCR值无明显变化（P>0.05）。最大呼吸的情况下,UK5099-Con组的线粒体OCR值较Media-Con组下降（P<0.05）,UK5099-H2O2组的线粒体OCR值较Media-H2O2组下降（P<0.05）,UK5099-NX组的线粒体OCR值较Media-NX组下降（P<0.05）,同时与Con组相比,H2O2组的线粒体OCR值较前下降（P<O.05）,NX组的线粒体OCR值较H2O2组升高（P<O.05）。10.HFpEF小鼠和H9c2细胞内的western blotting检测结果显示,与Sham组和Con组相比,TAC组小鼠心肌组织和H2O2刺激心肌细胞的p-AMPK/AMPK和PGC-1α/GAPDH的比值显着降低（P<0.05）;与TAC组和H2O2组相比,NX组心肌组织和心肌细胞的p-AMPK/AMPK和PGC-1α/GAPDH的比值明显升高（P<0.05）;CompoundC预处理后心肌组织和心肌细胞的p-AMPK/AMPK和PGC-1α/GAPDH的比值较NX组明显降低（P<0.05）。第四部分实验研究:暖心胶囊抑制氧化应激损伤诱导的线粒体凋亡的研究1.HFpEF小鼠和H9c2细胞内的western blotting检测结果显示,与Sham组和Con组相比,TAC组小鼠心肌组织和H2O2刺激心肌细胞的Bcl-2/BAX的比值显着降低和cleaved caspase-3/GAPDH的比值显着升高（P<0.05）;与TAC组相比和H2O2组相比,NX组心肌组织和心肌细胞的Bcl-2/BAX的比值明显升高和cleaved caspase-3/GAPDH的比值明显降低（P<0.05）;Compound C预处理后,与NX组相比,心肌组织和心肌细胞的Bcl-2/BAX比值明显降低和cleaved caspase-3/GAPDH的比值明显升高（P<0.05）。2.HFpEF小鼠和H9c2细胞内的western blotting检测结果显示,与Sham组和Con组相比,TAC组小鼠心肌组织和H2O2刺激心肌细胞的p-AMPK/AMPK的比值显着降低和p-JNK/JNK的比值明显升高（P<0.05）;与TAC组相比和H2O2组相比,NX组心肌组织和心肌细胞的p-AMPK/AMPK的比值明显升高和p-JNK/JNK的比值明显降低（P<0.05）;Compound C预处理后,与NX组相比,心肌组织和心肌细胞的p-AMPK/AMPK比值明显降低和p-JNK/JNK的比值明显升高（P<0.05）。3.H9c2细胞内,流式细胞术结果显示,与Con组相比,H2O2组的早期（Annexin V-FITC+/PI-象限）加上晚期（Annexin V-FITC+/PI+象限）细胞凋亡率显着升高（P<0.05）;与 H2O2组相比,NX 组早期（Annexin V-FITC+/PI-象限）加上晚期（Annexin V-FITC+/PI+象限）细胞凋亡率明显降低（P<0.05）;Compound C的预处理后早期（Annexin V-FITC+/PI-象限）加上晚期（Annexin V-FITC+/PI+象限）细胞凋亡率较NX组明显升高（P<0.05）。4.H9c2细胞内,流式细胞术结果显示,与Con组相比,H2O2组的线粒体高膜电位显着降低（P<0.05）;与H2O2组相比,线粒体高膜电位明显升高（P<0.05）;Compound C的预处理后减线粒体高膜电位较NX组明显降低（P<0.05）。5.H9c2细胞内的western blotting检测结果显示,与Con组相比,H2O2组的cytochrome c/GAPDH 比值显着升高（P<0.05）;与 H2O2组相比,NX 组的 cytochrome c/GAPDH 比值明显降低（P<0.05）;Compound C 的预处理后 cytochrome c/GAPDH比值较NX组明显升高（P<0.05）。结论:1.第一部分临床观察研究显示暖心胶囊可降低HFpEF患者的左室心肌能量消耗,改善左室扩张,降低NT-proBNP,升高LVEF,改善心阳虚型心衰病的临床症状。2.第二部分实验研究以线粒体功能障碍为切入点,发现暖心胶囊直接降低细胞内ROS的产生而改善氧化应激损伤诱导的HFpEF小鼠心功能障碍、心肌细胞损伤和线粒体功能障碍。3.第三部分实验研究以线粒体能量代谢为切入点,发现暖心胶囊可通过激活AMPK/PGC-1 α信号通路提升H9c2心肌细胞线粒体葡萄糖氧化磷酸化能力从而增加ATP生成,改善氧化应激损伤下的HFpEF小鼠心功能障碍、心肌细胞损伤和心肌能量代谢障碍。4.第四部分实验研究以线粒体凋亡为切入点,发现暖心胶囊可通过激活AMPK/JNK信号通路抑制线粒体凋亡。
贾飞凡[3]（2021）在《双参宁心胶囊调控线粒体自噬抗小型猪心肌缺血再灌注损伤机制研究》文中研究指明目的研究双参宁心胶囊（SSNX）对小型猪心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemical reperfusion injury,MIRI）的保护作用,从 PINK1/Parkin 通路揭示其调控心肌细胞线粒体自噬保护MIRI的作用机制。第一部分双参宁心胶囊对小型猪MIRI的保护作用研究1.材料与方法1.1动物分组与给药雄性巴马小型猪随机分为假手术组、模型组、阳性药组,SSNX预防治疗组,SSNX治疗组,每组各6头。SSNX预防治疗组（20mg·kg-1）于MIRI术前7天给药,其余4组常规喂养7天。第7天,除假手术组外,其余各组予介入球囊阻断心脏冠脉左前降支近端血流制备心肌缺血再灌注损伤模型。SSNX治疗组及预防治疗组动物术后予SSNX（20mg·kg-1）拌饲喂养7天,阳性药组予尼可地尔（1.2mg·kg-1）拌饲喂养7天,假手术及模型组予普通饲料常规喂养7天。1.2 MIRI模型评估于术后15分钟行心电图检测,通过心电图变化评估模型构建是否成功。1.3舌象分析及生化指标测定分别于术前、术后7天采血,酶联免疫吸附法检测血清心肌肌钙蛋白（cTnT）含量,IFCC法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）含量,比色法测定血清肌酸激酶同工酶（CK）,免疫抑制法测定肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）。全自动血凝仪监测凝血指标凝血酶原时间（PT）活化部分凝血活酶时间（APTT）,血浆纤维蛋白原（FIB）,硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）,酶联免疫法测定内皮素1（ET-1）,酶联免疫吸附法检测脑钠尿肽（BNP）,微量法检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）。同一时间观察小型猪舌象并进行拍照,图像分析软件分析小型猪舌象色彩分级R、G、B值指标。1.4影像学评估心功能于术后30分钟及术后7天行心脏超声检查,术后7天行心脏核磁共振技术（MRI）观察小型猪心肌梗死情况。1.5心肌梗死面积计算及病理形态学观察术后7天处死所有动物并取其冠脉左前降支近端分布区域心肌;NB-T染色后用MPIAS-500型多媒体彩色病理图文分析系统软件测量心肌梗死面积。HE染色及Masson染色法观察心肌血管及心肌组织的病理变化。2.结果2.1舌象分析正常组小型猪舌质淡红,苔薄白;模型组小型猪舌质较正常组颜色偏暗,苔暗白,舌象R值降低,舌象G、B值均升高;SSNX组小型猪与模型组相比舌质暗红、苔暗白均有改善,舌象R值升高,舌象G、B值均显着降低。2.2各组小型猪生化指标比较模型组小型猪血清CK、CK-MB、LDH活性、cTnT含量较假手术组升高,SSNX组较模型组血清CK、CK-MB、LDH活性、cTnT含量降低。凝血功能相关指标显示,模型组较假手术组PT、APTT时间延长,FIB值减少;与模型组比较,SSNX各组PT、APTT时间缩短,FIB值升高。与假手术组比较,模型组SOD活力降低,MDA值升高;与模型组比较,各给药组SOD活力升高,MDA值降低。内皮功能指标显示,假手术组血清ET-1较模型组升高,NO值降低。各给药组与模型组比较,血清ET-1降低,NO值升高。模型组较假手术组BNP升高,SSNX各组较模型组BNP降低。2.3影像学评估心脏超声结果示,与正常组比较,模型组小型猪多项心脏功能指标发生变化,射血分数、短轴缩短分数降低,收缩末期内径、收缩末期体积、舒张末期内径、舒张末期体积升高;与模型组比较,双参宁心组小型猪射血分数EF、短轴缩短分数FS升高,舒张末期体积明显降低。MRI结果示,假手术组小型猪心脏结构完整,各瓣膜血流及开合无异常。模型组小型猪左心室及心内膜内侧出现大面积高密度影,甚有室间隔断裂现象,提示模型组小型猪心肌缺血程度严重,甚有心肌坏死出现,心肌损伤严重。SSNX给药组也可见部分高密度影,但高密度影面积较小,且心脏形态相对完整,损伤程度较模型组轻。2.4病理形态学观察HE及Masson染色示,正常组心肌纤维排列整齐,无变性坏死与肿胀断裂,无炎细胞浸润;模型组心肌纤维大片坏死、钙化,心肌纤维变性、断裂,纤维组织增生,炎细胞浸润,坏死区充血、出血;阳性药组肌纤维部分排列整齐,心肌细胞形态正常,心肌纤维中斑片状心肌纤维变性坏死及脂肪变性,伴部分组织增生、炎细胞浸润;SSNX各组心肌纤维大部排列整齐,心肌细胞核呈圆形,位于细胞中央,部分心肌纤维中斑片状心肌纤维变性坏死,伴少量增生、炎细胞浸润。2.5心梗面积比较与模型组比较,SSNX预防治疗组及SSNX治疗组心肌梗死面积与心肌总面积的比值明显降低,阳性药组心肌梗死面积与心肌总面积的比值较模型组亦降低。3.小结小型猪MIRI模型构建成功。SSNX可降低MIRI小型猪的血清心肌酶水平,改善血管内皮功能与凝血功能;还可通过升高SOD活性,降低MDA水平以抗氧化应激;可显着减少MIRI小型猪的心肌梗死面积。影像学与病理形态学表明,模型组心肌损伤最为严重,阳性药次之,SSNX治疗组随后,SSNX预防治疗组损伤最轻。上述研究结果证明,SSNX可改善MIRI小型猪的心功能,对MIRI所致的心肌损伤具有明确保护作用。第二部分双参宁心胶囊对小型猪MIRI线粒体自噬作用机制研究1.材料与方法1.1动物分组与给药方法与第一部分相同。1.2 ATP及Δψm检测评价能量代谢及线粒体功能取新鲜心肌组织通过磷钼酸比色法检测缺血心肌三磷酸腺苷（ATP）含量,荧光探针法检测心肌细胞中线粒体膜电位（Δψm）水平的变化。1.3心肌超微结构观察透射电镜下观察心肌细胞线粒体及线粒体自噬超微结构变化。1.4 qRT-PCR检测相关基因表达,Western Blot检测相关自噬蛋白表达水平实时荧光定量PCR法检测心肌组织中自噬相关基因的转录水平,Western Blot法测定心肌 LC3-B、cleaved caspase-3、PINK1、Parkin 蛋白表达情况。2.结果2.1各组小型猪能量代谢及线粒体功能比较与假手术组比较,模型组心肌ATP含量及线粒体膜电位显着降低;与模型组比较,SSNX各组心肌ATP含量及线粒体膜电位显着升高,阳性药组虽有升高趋势,但升高不如SSNX各组明显。2.2心肌超微结构透射电镜下可见假手术组小型猪心肌肌丝形态完整、排列紧密,线粒体膜结构和嵴结构基本正常,整体无明显肿胀,排列较好;模型组小型猪可见心肌肌丝明显断裂或疏松,线粒体肿胀变大或空泡化、内部结构疏松,心肌组织和线粒体内均有自噬体形成;SSNX治疗组,SSNX预防治疗组,阳性药组心肌肌丝虽有断裂或疏松,但较模型组程度显着减轻,线粒体肿胀变大但形态相对完好,嵴突疏松程度降低,整体无显着空泡化,心肌组织和线粒体内有少量自噬体结构。2.3相关蛋白基因表达水平比较qRT-PCR结果示,PINK1、Parkin、Cleaved caspase-3、LC3B的mRNA基因表达水平较模型组均显着升高;给药组各蛋白基因表达水平较模型组均呈显着下降趋势,且SSNX预防治疗组下降最明显,SSNX治疗组次之,其次是阳性药组。2.4相关自噬通路蛋白表达水平比较Western Blot结果示,模型组PINK1/Parkin通路、Cleaved caspase-3自噬凋亡通路、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值表达水平较假手术组均呈升高趋势;给药组各蛋白表达水平较模型组均呈显着下降趋势,且SSNX预防治疗组下降值最明显,SSNX治疗组次之,阳性药组下降值相对较小,该结果与qRT-PCR趋势一致。3.小结小型猪MIRI心肌线粒体自噬增加,SSNX可减少线粒体膜电位及ATP含量,保护缺血再灌损伤后的心肌,其机制可能是通过抑制PINK1/Parkin自噬通路,抑制线粒体自噬的过度激活,减少心肌细胞凋亡和线粒体损伤而实现的。结论双参宁心胶囊对心肌缺血再灌注损伤小型猪心肌组织有保护作用,可减轻心肌组织结构损伤及维持线粒体功能相对完整,其机制可能是通过抑制PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬过度激活,从而保护心肌缺血再灌注损伤后小型猪心脏功能。
孙成成[4]（2021）在《基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制》文中研究表明血管性认知障碍（Vascular cognitive impairment,VCI）是包括一系列因血管因素引起或导致的认知能力下降的综合征,涵盖了与血管疾病相关的所有类型的认知障碍,范围从轻度认知障碍到血管性痴呆（Vascular dementia,VaD）。目前,由于临床表现的异质性和当前诊断标准的局限性,VCI的流行病学较难开展,随着我国人口老龄化加剧及脑血管疾病的发病率上升,VCI的发病率和患病率也不断上升。VCI病因及病理机制复杂,与机体炎症反应、自由基损伤、胆碱能受损、细胞凋亡及遗传等因素密切相关,但VCI仍被认为是可以防治的。目前,VCI的主要治疗方法是通过治疗脑血管疾病和其他VCI危险因素（例如高血压和糖尿病）来预防,目前尚无可改善疾病的有效药物治疗方法。本课题组拟定了防治VCI的中药复方—参麻益智方,已批准为医疗机构应用传统工艺配制中药制剂备案（备案号:Z20200005000）。该方由人参、天麻、鬼箭羽、川芎组成,具有益气增智、活血化瘀的功效。前期动物实验和临床研究表明参麻益智方可以改善VCI大鼠及患者认知和神经功能。由此,本研究以参麻益智方作为干预药物,观察其对VCI模型大鼠的学习记忆和认知能力的影响及其对脑组织线粒体的超微结构和AMPK/PPARα/PGC-1α/UCP2信号通路的影响,探讨其对脑组织能量代谢的作用机制,为其防治VCI提供科学依据。目的确定参麻益智方的提取工艺及主要有效成分;观察参麻益智方对双侧颈总动脉结扎造成慢性脑缺血致血管性认知障碍模型大鼠的学习记忆能力和炎症因子及氧化应激相关指标的影响;探讨慢性脑低灌注大鼠脑能量代谢和线粒体障碍相关蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2的病理机制及参麻益智方的干预效应机制及可能的作用靶点。方法采用液相色谱-质谱联用仪系统（liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS）分析参麻益智方的主要化学成分。SPF级SD大鼠70只,雌雄各半,采用双侧颈总动脉结扎法制备慢性脑缺血模型,手术成功后筛选认知障碍的大鼠按随机数字表分成4组:模型对照组（Model）、盐酸多奈哌齐组（Donepezil）（0.45 mg/kg体质量）、参麻益智方高剂量组（SMYZ-H）（11.88 g生药/kg体质量）和参麻益智方低剂量组（SMYZ-L）（2.97g生药/kg体质量）。另设假手术组（Sham）,每组各10只大鼠。灌胃给药,模型对照组和假手术组给予等体积纯净水灌胃,连续灌胃8周后进行相关指标检测。Morris水迷宫（Morris water maze,MWM）检测大鼠学习记忆能力;HE染色法观察大鼠海马CA1区病理形态学改变;比色法检测血清中乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AchE）含量;酶联免疫法测定大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）含量;比色法检测谷胱甘肽（glutathione,GSH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）含量;非酶促免疫法检测谷胱甘肽过氧化物还原酶（glutathioneperoxidase,GSH-PX）含量。透射电子显微镜观察线粒体的超微结构和形态改变;脑组织中提取线粒体进行逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5AmRNA表达的水平;蛋白质免疫印迹法（Western Blot,WB）检测 AMPK、pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A 蛋白的表达。结果1参麻益智方成分稳定明确课题组采用液相色谱-质谱联用仪系统分析了参麻益智方的主要化学成分,并结合文献报道,确定了参麻益智方中人参皂苷、天麻素、阿魏酸、原儿茶酸、β-谷甾醇等多种主要化学成分。2参麻益智方对VCI大鼠学习记忆能力的影响2.1参麻益智方对VCI大鼠空间学习记忆能力的影响定位航行实验:与第1天相比,所有大鼠在训练第2天的逃避潜伏期（escape latency,EL）均明显缩短（P<0.05,P<0.01）,提示所有大鼠均表现出一定的学习记忆能力。经重复测量方差分析,与对照组比较,模型组大鼠第三天开始EL明显延长,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,提示模型组大鼠的空间学习能力明显下降;与模型组比较,参麻益智方高剂量组和盐酸多奈哌齐组EL均明显缩短,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,提示参麻益智方和盐酸多奈哌齐均可提高VCI大鼠的空间学习能力。空间探索实验:与假手术组比较,模型组穿越原平台次数、目标象限停留时间、目标象限活动路程均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组穿越原平台次数均显着增加,参麻益智方高剂量组目标象限停留时间、目标象限活动路程均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。2.2参麻益智方对VCI大鼠海马CA1区病理形态的影响光学显微镜下海马组织显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元排列整齐,连接紧密,胞内结构完整,胞膜清晰,胞质丰富,核膜、核仁较明显,未见神经元变性或坏死。模型组大鼠的海马CA1区神经元排列散乱、稀疏,细胞数量明显减少,层次减少,部分出现核固缩现象,可见细胞空泡变性,甚至坏死现象。盐酸多奈哌齐组、参麻益智方低、高剂量组海马CA1区神经元排列较模型组有一定的改善,细胞数量较模型组有明显增加,细胞结构较完整,细胞膜较为清晰,偶见细胞空泡变性,少有细胞坏死现象。2.3参麻益智方对VCI大鼠血清Ach、AchE含量的影响与假手术组比较,模型组Ach含量显着减少,AchE含量显着增多,统计学比较有显着差异（P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组Ach含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组AchE含量显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。各给药组之间比较无显着差异（P>0.05）。2.4参麻益智方对VCI大鼠血清炎症因子IL-1β、TNF-α含量的影响与假手术组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方低、高剂量组IL-1β含量均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.01）;盐酸多奈哌齐组和参麻益智方低、高剂量组TNF-α含量均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。2.5参麻益智方对VCI大鼠血清GSH、MDA、SOD、GSH-PX含量的影响与假手术组比较,模型组GSH、GSH-PX含量均显着减少,MDA含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组GSH、GSH-PX含量均显着增加,MDA含量均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;参麻益智方高剂量组SOD含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。各给药组之间比较无显着差异（P>0.05）。3参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体的影响3.1参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体数量的影响参麻益智方干预后荧光显示线粒体数量有一定程度的增加,说明参麻益智方能增加双侧颈总动脉结扎所致的VCI大鼠的线粒体数量。3.2参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体超微结构的影响假手术组大鼠脑组织线粒体结构基本正常,排列整齐,膜形态基本完整,线粒体嵴致密,无明显肿胀和空泡形成。模型组大鼠脑组织线粒体结构明显改变,线粒体膜模糊,部分膜出现破裂,线粒体嵴断裂,疏松溶解,并伴有基质颗粒减少或消失。盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量、低剂量组线粒体结构明显改善,线粒体膜总体清晰,线粒体嵴基本完整,说明参麻益智方可以改善VCI大鼠脑组织线粒体结构。3.3参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体关键蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A mRNA表达水平的影响与假手术组比较,模型组AMPK、PPARα、PGC-1α和ATP5A mRNA表达水平明显低于对照组（P<0.05,P<0.01）。参麻益智方干预后,AMPK、PPARα、PGC-1α和ATP5A mRNA的表达均较模型组显着升高（P<0.05,P<0.01）。模型组UCP2mRNA表达高于假手术组,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、参麻益智方高剂量组（SMYZ-H）和参麻益智方低剂量组（SMYZ-L）UCP2mRNA表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。3.4参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体关键蛋白AMPK、pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达的影响与假手术比较,模型组pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,参麻益智方高剂量组（SMYZ-H）pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达水平均显着升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。而AMPK蛋白表达水平无明显差异,提示AMPK可能通过磷酸化参与此途径。结论1确定了参麻益智方的最佳提取工艺及主要化学成分,为探讨其防治VCI的药理作用和机制研究提供了化学物质基础。2脑组织线粒体结构改变和能量代谢障碍可能是VCI的重要病理基础。3参麻益智方具有提高慢性脑低灌注致VCI大鼠学习记忆能力的作用,并改善海马组织的病理形态,保护神经元,增强胆碱能系统功能,抑制炎症反应,提高机体抗氧化能力。其作用机制和提高线粒体关键蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2的表达,改善脑组织能量代谢相关。
朱静华[5]（2020）在《芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心室重构的作用及机制研究》文中认为目的:利用血管紧张素Ⅱ灌注方式建立小鼠高血压心室重构模型,探讨芪苈强心胶囊对小鼠高血压心肌肥厚及心肌纤维化的作用及机制。材料与方法:应用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）皮下埋泵方式建立高血压心室重构小鼠模型。将8-10周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,每组10只,分别是空白对照组（蒸馏水灌胃）、模型组（蒸馏水灌胃）、中药组（芪苈强心1g/kg·d灌胃）、西药组（卡托普利10mg/kg·d灌胃）,给予AngⅡ刺激同时给予药物干预。每周检测小鼠血压;于埋泵前、埋泵2周、埋泵4周检测小鼠心功能;HE染色法观察各组小鼠心脏组织形态;Masson和天狼猩红染色观察各组小鼠心肌纤维化情况;免疫组化法检测各组小鼠心脏中CD68、IL-6、collage III表达情况;RT-PCR方法检测各组小鼠心脏中ANP、BNP的m RNA表达;Western blot检测各组小鼠心肌组织中AT1R、ERK1/2、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad3蛋白水平的表达。结果:1.血压及心功能情况AngⅡ干预1周后,模型组小鼠血压较空白对照组显着升高,中药组与西药组小鼠血压较模型组显着降低。AngⅡ干预2周后,模型组小鼠左室射血分数（EF值）较空白对照组显着降低,中药组与西药组小鼠EF值较模型组显着升高,左室短轴缩短指数（FS）值与EF值的趋势一致。2.心脏肥大情况HE染色可见模型组较空白对照组小鼠心脏明显增大,心重、心重与体重比值亦支持上述结果,中药组与西药组小鼠与模型组小鼠比较心脏肥大不明显,心重、心重与体重比值亦支持上述结果。模型组中小鼠心肌中ANP、BNP的m RNA水平较空白对照组显着增加,中药组与西药组小鼠心肌中ANP、BNP的m RNA水平较模型组显着降低。3.心肌纤维化情况Masson及天狼猩红染色可见模型组小鼠心肌纤维化较空白对照组明显增加,中药组与西药组小鼠与模型组小鼠相比心肌纤维化减轻。免疫组化染色可见,与空白对照组相比模型组collage III的表达增加,中药组与西药组与模型组相比较仅见少量collage III的表达。4.心肌组织中的炎症情况免疫组化染色观察各组小鼠心肌中CD68、IL-6表达,与空白对照组相比模型组小鼠心肌中散在较多棕黄色颗粒状物,分布广泛,中药组与西药组仅见少量棕黄色颗粒。5.心肌组织中AT1R、ERK1/2、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad 3蛋白表达情况Western blot显示,与空白对照组相比,模型组小鼠心肌组织AT1R、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad 3蛋白表达升高;与模型组相比,中药组与西药组AT1R、p-ERK1/2、TGF-β1、P-Smad 3蛋白表达下降。结论:1.芪苈强心胶囊能改善小鼠心肌肥厚和心肌纤维化,其作用与卡托普利相当。2.芪苈强心胶囊可能通过下调AT1R,进而降低P-ERK1/2活化改善AngⅡ诱导的小鼠心肌肥大,亦通过下调AT1R,抑制TGF-β1/Smad3通路的激活改善AngⅡ诱导的小鼠心肌纤维化。
王立[6]（2020）在《芎归蠲痹方防治长春碱类药物所致周围神经毒性的临床观察》文中指出目的:通过临床研究,观察芎归蠲痹方对长春碱类药物化疗所致周围神经毒性的防治效果及安全性,探讨其临床价值,为该方的临床应用提供更加科学、充分的依据。方法:本研究共纳入了80例患者,均来源于甘肃省肿瘤医院中西医血液病科,皆采用含长春碱类药物的化疗方案进行化疗,符合周围神经毒性西医诊断标准及中医辨证标准,所有纳入的患者均签署知情同意书。采用随机对照的研究方法,将80例患者随机分为对照组及治疗组,每组各40例。对照组给予口服甲钴胺胶囊（每次0.5mg,每日3次）,治疗组给予芎归蠲痹方水煎液外洗（早晚各一次）,21天为一个治疗周期,4个周期后观察治疗效果。通过观察两组患者治疗前后周围神经毒性分级、总有效率、中医临床症状及体力状况来评价芎归蠲痹方的有效性;同时观察两组治疗过程中是否出现皮肤过敏、色素沉着等不良反应,来评价芎归蠲痹方的安全性。采用SPSS24.0软件进行统计分析,以P<0.05为有统计学意义。结果:纳入的80例患者在治疗过程中,对照组和治疗组各1例患者因不能耐受化疗而退出,按脱落病例处理,治疗组有1例患者依从性差,不能配合用药,故剔除出组。最后实际进入临床研究的共77例患者（对照组39例,治疗组38例）,具体结果如下:（1）两组治疗后的总有效性:治疗组痊愈16例,有效14例,无效8例,总有效率为78.95%;对照组痊愈7例,有效16例,无效16例,总有效率为58.97%。两组治疗前后比较,治疗组疗效优于对照组（P<0.05）。（2）两组治疗后的周围神经毒性分级较治疗前均有所改善（P<0.05）,但治疗组在降低周围神经毒性分级,防止疾病进展方面优于对照组（P<0.05）。（3）两组治疗后的中医临床疗效:治疗组痊愈16例,显效6例,有效9例,总有效率为81.58%,对照组痊愈6例,显效5例,有效10例,总有效率为53.85%。两组中医临床症状较治疗前均有所改善（P<0.05）,且治疗组优于对照组（P<0.05）。（4）两组治疗后的体力状况较治疗前均有所改善（P<0.05）,且治疗组体力状况评分优于对照组（P<0.05）。（5）安全性评价:治疗组患者在治疗过程中未见明显皮肤过敏、色素沉着及烫伤等不良反应。结论:芎归蠲痹方外洗能有效的减轻周围神经毒性的严重程度,降低周围神经毒性分级,防止疾病进展,并能改善患者中医临床症状、体力状况,在防治长春碱类药物所致周围神经毒性方面确有成效,且无明显不良反应,能有效提高患者的生存质量。
徐岩[7]（2020）在《鹿茸多肽介导TGF-β/Smads/ERK信号通路对阿霉素诱导心肌损伤的保护作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:鹿茸为温补心肾之要药,具有生精化气,强心复脉之功效,对多种组织损伤修复有促进作用,其药效学物质为多肽等。本研究通过体内外实验观察鹿茸多肽对阿霉素诱导心肌损伤的保护作用,探讨其与TGF-β/Smads/ERK信号通路的相关性及作用机制。方法:一、鹿茸多肽的提取与纯化:酸性盐缓冲溶液浸提法提取鹿茸多肽,双缩脲法鉴定蛋白、考马斯亮蓝法检测蛋白含量,离子交换层析法与凝胶过滤层析法分离和纯化鹿茸多肽。二、体外细胞试验与相关检测:CCK-8法分别检测阿霉素（Adriamycin,ADR）和鹿茸多肽（Pilose antler peptide,PAP）对H9c2细胞存活率的影响;实验分为空白组（Control group）、阿霉素组（ADR group）、鹿茸多肽组（PAP group）和联合诱导组（ADR+PAP group）。细胞乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase,LDH）活力检测;ELISA法检测各组细胞上清液中肌酸激酶MB（Creatine kinase MB,CK-MB）、心肌肌钙蛋白（Cardiac troponin,cTn）水平;免疫荧光法检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2凋亡因子X（Bcl-2-Associated X,Bax）和半胱天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine containing aspartate3,Caspase3）的水平;流式细胞仪检测各组细胞中细胞凋亡及周期情况。三、阿霉素心肌损伤大鼠模型的复制与检测指标:采用隔天腹腔注射阿霉素的方法复制心肌损伤大鼠模型,实验分为空白对照组（Control group）、模型组（ADR group）、阳性对照组(ADR+CoQ100 group)、鹿茸多肽低剂量组（ADR+PAP 100 mg/kg group）、高剂量组（ADR+PAP 200 mg/kg group）;观察各组大鼠一般状态,每3天检测各组大鼠体质量;各组大鼠心脏质量及心脏脏器指数检测;Powerlab数据采集分析系统检测各组大鼠心电图ST段及心率（Heart Rate,HR）变化;ELISA法检测各组大鼠血清中心肌特异性转录因子Nk2型同源盒转录因子5（Nk2 homeobox transcription factor 5,Nkx2.5）、心肌转录调节因子4（Myocardial transcription regulator 4,GATA4）、激活转录因子-2（Activating transcription factor2,ATF-2）和肌细胞增强因子-2C（Myocyte enhancer factor-2C,MEF-2C）水平,心肌肌钙蛋白cTnT和cTnI水平,心肌组织中Bax、Bcl-2和半胱天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine containing aspartate3,Caspase3）水平;苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）检测各组大鼠心肌组织病理变化;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况。四、相关代谢组学研究:采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）技术对ADR group和PAP group大鼠尿样的尿液代谢物进行分析,利用三重四极杆质谱的多反应监测模式（multiple reaction monitoring,MRM）对代谢物定量分析,采用主成分分析（PCA）等方法对两组代谢物分类寻找潜在生物标记物,进行KEGG通路富集。RT-PCR检测H9c2细胞和心肌组织中转化生长因子-β（Transforming growth factor-β,TGF-β）、Smad7、肌球蛋白重链（Major histocompatibility complex,MHC）及缝隙连接蛋白43（Connexin43,CX43）mRNA水平;Western Blot法检测各组细胞TGF-β/Smads/ERK信号通路相关蛋白表达水平。结果:一、在实验室前期工作基础上,选取鹿茸多肽最佳提取工艺为pH=4.0HAc-NaAc缓冲液,90%乙醇,离心时间20min,采用离子交换层析与凝胶过滤层析等分离技术,得到纯度较高的2个活性部位,酸性盐缓冲溶液浸提工艺提取鹿茸多肽技术能比较完好的保证鹿茸多肽的理化性质。二、体外细胞实验（1）CCK-8检测结果表明,ADR诱导H9c2细胞凋亡的IC50为5μM、24 h,PAP可促进H9c2细胞增殖,最佳条件为16μg/mL、72 h;（2）LDH渗漏率检测结果表明,与Control组比较,ADR组LDH渗漏率明显升高（P<0.01）,PAP组无明显变化（P>0.05）,与ADR组比较,ADR+PAP组LDH渗漏率明显降低（P<0.01）;（3）ELISA检测结果表明,与Control组比较,ADR组CK-MB、cTnT和cTnI水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,PAP组无明显变化（P>0.05）,与ADR组比较,ADR+PAP组CK-MB、cTnT和cTnI水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;（4）流式细胞仪检测结果表明,与Control组比较,ADR组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,G2/M期细胞数量明显增多（P<0.01）,PAP组无明显变化（P>0.05）,与ADR组比较,ADR+PAP组细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,G2/M期细胞数量明显降低（P<0.01）;（5）与Control组比较,ADR组H9c2细胞Bcl-2表达减少,Bax和Caspase3表达水平增加,活细胞数目明显减少,Bax/Bcl-2比值升高（P<0.05）,而PAP组H9c2细胞Bcl-2、Bax和Caspase3表达水平无明显变化（P>0.05）;与ADR组比较,ADR+PAP组H9c2细胞Bcl-2表达增加,Bax和Caspase3表达水平降低,Bax/Bcl-2比值降低（P<0.05）。三、整体动物实验（1）与Control组比较,ADR组大鼠精神萎靡、活动量明显减少,行动迟缓且活动量减少,体毛蓬松、进食饮水均明显减少,体质量明显降低（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠体质量明显升高（P<0.05或P<0.01）,但仍明显低于Control组;（2）与Control组比较,ADR组大鼠心脏质量明显降低（P<0.05）,但心脏脏器指数明显升高（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠心脏质量无明显变化（P>0.05）,心脏脏器指数明显降低（P<0.05或P<0.01）;（3）心电图检测结果表明,与Control组比较,ADR组大鼠心电图ST段、HR明显升高（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠心电图ST段、HR明显降低（P<0.05或P<0.01）;（4）ELISA检测结果表明:（1）与Control组比较,ADR组大鼠血清中cTnT和cTnI水平明显升高（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠血清中cTnT和cTnI水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;（2）与Control组比较,ADR组大鼠血清中心肌特异性转录因子Nkx 2.5、GATA4和MEF-2C水平显着降低（P<0.05或P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠血清中Nkx 2.5、GATA4和MEF-2C水平显着升高（P<0.05或P<0.01）;各组ATF-2水平无明显变化（P>0.05）;（3）与Control组比较,ADR组大鼠心肌组织中Bax、Caspase3水平明显升高,Bcl-2水平明显降低（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组Bax、Caspase3水平明显明显降低,Bcl-2水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;（5）HE染色结果表明,与Control组比较,ADR组大鼠心肌组织出现典型的心肌损伤现象,肌束排列紊乱、炎性细胞浸润及弥漫性水肿现象明显,病理评分明显升高（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠心肌损伤程度降低,病理评分降低（P<0.01）;（6）TUNEL染色结果表明,与Control组比较,ADR组大鼠心肌组织凋亡明显,出现大小不一的暗褐色区域,且心肌细胞肌束排列紊乱,凋亡面积明显升高（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠肌束排列相对整齐,凋亡面积明显减少（P<0.01）。四、代谢组学及作用机制研究（1）代谢组学研究共筛选出差异代谢物121个,其中主要包括氨基酸及其代谢物、苯及其衍生物、核苷酸及其代谢物及有机酸及其衍生物等,经KEGG通路富集主要与Purine metabolism、Bile secretion及cAMP signaling pathway等通路有关;（2）RT-PCR检测结果表明,与Control组比较,ADR组H9c2细胞TGF-β1、β-MHC mRNA表达水平明显升高,Smad7、α-MHC和Cx43 mRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,PAP组无明显变化（P>0.05）;与ADR组比较,ADR+PAP组H9c2细胞TGF-β1、β-MHC mRNA表达水平明显降低,Smad7、α-MHC和Cx43 mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;与Control组比较,ADR组大鼠心肌组织中TGF-β1和β-MHC mRNA表达水平明显升高,Smad7、α-MHC和Cx43 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠心肌组织中TGF-β1 mRNA表达水平明显降低,Smad7和Cx43 mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;CoQ10组、PAP高剂量组大鼠心肌组织中α-MHC和Cx43 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;PAP高剂量组大鼠心肌组织中β-MHC mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;（3）Western blot检测结果表明,与Control组比较,ADR组H9c2细胞TGF-β1、Smad4、p-Smad2、p-Smad3和p-ERK蛋白表达水平明显升高,Smad7、PKC蛋白水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,PAP组H9c2细胞除Smad7蛋白水平明显降低（P<0.01）外,其余蛋白无明显变化（P>0.05）;与ADR组比较,ADR+PAP组H9c2细胞TGF-β1、Smad4、p-Smad2、p-Smad3和p-ERK蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Smad7蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Smad5和PKC蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）;与Control组比较,ADR组大鼠心肌组织TGF-β1、Smad4、p-Smad2、p-Smad3和p-ERK蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Smad7和PKC蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与ADR组比较,CoQ10组、PAP低、高剂量组大鼠心肌组织TGF-β1、Smad4、p-Smad2、p-Smad3和p-ERK蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Smad7和PKC蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论:PAP可通过抑制TGF-β/Smads/ERK信号通路改善ADR诱导的心肌损伤病理状态,抑制心肌细胞凋亡、减缓心肌细胞周期阻滞,其作用机制可能与调控Purine metabolism、Bile secretion及cAMP signaling pathway等多条能量代谢调控途径有关。
国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室[8]（2013）在《我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）》文中提出
方海燕,方学勤,刘元胜[9]（2011）在《右旋酮洛芬氨丁三醇中细菌内毒素的检测方法学研究》文中进行了进一步梳理细菌内毒素检查是药品一个非常重要的安全指标。特别对注射用原料药和注射用制剂药。《中国药典》2005年版尚未收载该品种。我们对3批样品进行了细菌内毒素检测,以考察该方法的可行性。1药品与试剂右旋酮洛芬氨丁三醇（黄石世星药业有限责任公司,批号:20100301、20100601、20100801）;细菌内毒素标准品（中国药品生物制品检定所,批号:150601-210169）;细菌内毒素检查用水(湛
谷万里,史载祥[10]（2005）在《中药保护心肌缺血损伤的非循环机制研究进展》文中研究指明中药保护心肌缺血损伤的非循环机制主要包括抑制心肌细胞凋亡、心肌缺血预处理、改善心肌超微结构、心肌酶和免疫功能调节。中药可通过非循环机制增强心肌细胞内源性抗损伤能力,内源性调控保护可能是更有效的心肌保护策略,体现了中西医结合治疗心血管疾病能从整体出发多层面、多靶点发挥作用的优势。
二、芎归胶囊对小鼠缺血心肌的保护作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、芎归胶囊对小鼠缺血心肌的保护作用（论文提纲范文）
（1）龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌注损伤与内质网应激 |
| (一) 内质网应激的主要路径 |
| (二) 内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 线粒体功能障碍与心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| (一) 线粒体形态动力学异常 |
| (二) 线粒体能量代谢障碍 |
| (三) 活性氧产生过量 |
| (四) 钙稳态异常 |
| (五) 线粒体膜通透性改变 |
| 参考文献 |
| 综述三 心肌缺血再灌注损伤的中西医结合研究进展 |
| 1.中药复方汤剂 |
| 2.中成药 |
| 3.中药单体及有效成分 |
| 4.结语与展望 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 龙牙楤木总皂苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 实验器材和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 基于线粒体功能障碍探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要仪器和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3.结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 基于内质网应激探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 研究的临床意义 |
| 2 龙牙楤木总皂苷抗MIRI的研究基础 |
| 3 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的选择 |
| 4 研究结果分析 |
| 参考文献 |
| 临床研究 中成药治疗心肌缺血再灌注损伤的系统评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）暖心胶囊对射血分数保留的心力衰竭患者能量代谢的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 射血分数保留的心力衰竭的认识 |
| 1.1.1 射血分数保留的心力衰竭的流行病学特征 |
| 1.1.2 射血分数保留的心力衰竭的病理机制 |
| 1.1.3 射血分数保留的心力衰竭的治疗进展 |
| 1.2 氧化应激损伤的认识 |
| 1.2.1 氧化应激损伤和活性氧 |
| 1.2.2 线粒体中内源性ROS的产生 |
| 1.2.3 氧化应激损伤在心力衰竭中的作用 |
| 1.3 细胞凋亡的认识 |
| 1.3.1 细胞凋亡概览 |
| 1.3.2 细胞凋亡的类型 |
| 1.3.3 线粒体介导凋亡途径在心力衰竭的作用 |
| 1.4 心肌细胞线粒体能量代谢的认识 |
| 1.4.1 成年心肌细胞线粒体能量代谢和心力衰竭 |
| 1.4.2 胚胎期心肌细胞底物能量代谢 |
| 1.4.3 临床上心肌能量代谢的评价 |
| 1.5 细胞凋亡和线粒体能量代谢 |
| 1.6 AMPK和心力衰竭 |
| 1.6.1 AMPK概览 |
| 1.6.2 心力衰竭中的AMPK和细胞凋亡 |
| 1.6.3 心力衰竭中的AMPK/PGC-1 α和能量代谢 |
| 1.7 中医药对防治射血分数保留的心力衰竭的认识 |
| 1.7.1 射血分数保留的心力衰竭的中医证候认识 |
| 1.7.2 中医药在射血分数保留的心力衰竭病理机制中的作用 |
| 1.7.3 射血分数保留的心力衰竭的中医药治疗 |
| 1.8 暖心胶囊防治心力衰竭的研究进展 |
| 1.8.1 暖心胶囊临床研究进展 |
| 1.8.2 暖心胶囊基础研究进展 |
| 1.8.3 暖心胶囊防治舒张性心力衰竭的研究 |
| 第二章 暖心胶囊改善射血分数保留的心力衰竭患者心肌能量消耗 |
| 2.1 临床资料 |
| 2.1.1 病例来源 |
| 2.1.2 诊断标准 |
| 2.1.3 纳入标准 |
| 2.1.4 排除标准 |
| 2.1.5 剔除标准 |
| 2.1.6 脱落规定 |
| 2.1.7 受试者退出试验条件 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 分组方法 |
| 2.2.2 盲法实施 |
| 2.2.3 治疗方案 |
| 2.2.4 超声心动图检测方法及指标 |
| 2.2.5 观测指标 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 一般资料 |
| 2.3.2 疗效评价指标分析 |
| 2.3.3 不良反应及安全性分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 暖心胶囊改善氧化应激损伤诱导的心功能障碍的研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物和细胞 |
| 3.1.2 实验药物和试剂 |
| 3.2.实验方法 |
| 3.2.1 暖心胶囊试剂制备 |
| 3.2.2 小鼠TAC模型制备 |
| 3.2.3 动物分组与处理 |
| 3.2.4 超声心动图指标的检测 |
| 3.2.5 血清BNP水平检测 |
| 3.2.6 细胞培养与处理 |
| 3.2.7 细胞活力检测 |
| 3.2.8 细胞LDH检测 |
| 3.2.9 细胞内ROS检测 |
| 3.2.10 耗氧率(OCR)法测定线粒体呼吸功能 |
| 3.2.11 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 NX改善TAC诱导的HFpEF小鼠心功能障碍 |
| 3.3.2 NX降低TAC诱导的HFpEF小鼠血清BNP水平 |
| 3.3.3 H2O2对H9c2心肌细胞活力的影响 |
| 3.3.4 NX对H2O2处理的H9c2心肌细胞活力影响 |
| 3.3.5 NX通过减少ROS产生改善H9c2细胞氧化应激损伤 |
| 3.3.6 NX改善氧化应激损伤诱导的H9c2细胞线粒体功能障碍 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 暖心胶囊改善氧化应激损伤诱导的心肌能量代谢障碍研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物和细胞 |
| 4.1.2 实验药物和试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 暖心胶囊试剂制备 |
| 4.2.2 小鼠TAC模型制备 |
| 4.2.3 动物分组与处理 |
| 4.2.4 超声心动图指标的检测 |
| 4.2.5 血清BNP水平检测 |
| 4.2.6 细胞培养与处理 |
| 4.2.7 细胞活力检测 |
| 4.2.8 细胞LDH检测 |
| 4.2.9 细胞内ROS检测 |
| 4.2.10 增强型ATP检测 |
| 4.2.11 耗氧率(OCR)法测定线粒体呼吸功能 |
| 4.2.12 耗氧率(OCR)法测定细胞底物氧化压力 |
| 4.2.13 Western blot法检测目的蛋白表达 |
| 4.2.14 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 NX通过激活AMPK改善TAC诱导的HFpEF小鼠心功能障碍 |
| 4.3.2 NX通过激活AMPK降低TAC诱导的HFpEF小鼠血清BNP水平 |
| 4.3.3 NX通过激活AMPK增加HFpEF小鼠线粒体ATP的生成 |
| 4.3.4 NX在HFpEF小鼠内激活AMPK/PGC-1α信号通路 |
| 4.3.5 NX通过激活AMPK增加H9c2细胞线粒体ATP的生成 |
| 4.3.6 NX通过激活AMPK改善H9c2细胞氧化应激损伤 |
| 4.3.7 NX通过激活AMPK改善氧化应激损伤诱导的H9c2细胞线粒体功能障碍 |
| 4.3.8 H9c2细胞不依赖脂肪酸底物氧化 |
| 4.3.9 H9c2细胞不依赖谷氨酰胺底物氧化 |
| 4.3.10 H9c2细胞依赖葡萄糖底物氧化 |
| 4.3.11 NX在H9c2细胞内激活AMPK/PGC-1α信号通路 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 暖心胶囊抑制氧化应激损伤诱导的线粒体凋亡的研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物和细胞 |
| 5.1.2 实验药物和试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 暖心胶囊试剂制备 |
| 5.2.2 小鼠TAC模型制备 |
| 5.2.3 动物分组与处理 |
| 5.2.4 细胞培养与处理 |
| 5.2.5 细胞凋亡检测 |
| 5.2.6 细胞线粒体膜电位(△ψm)检测 |
| 5.2.7 Cytochrome c检测 |
| 5.2.8 Western blot法检测目的蛋白表达 |
| 5.2.9 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 NX通过激活AMPK抑制TAC诱导的HFpEF小鼠线粒体凋亡途径 |
| 5.3.2 NX在HFpEF小鼠内激活AMPK/JNK信号通路 |
| 5.3.3 NX通过激活AMPK抑制H9c2细胞凋亡 |
| 5.3.4 NX通过激活AMPK增强H9c2细胞线粒体膜电位 |
| 5.3.5 NX通过激活AMPK抑制H9c2细胞线粒体凋亡途径 |
| 5.3.6 NX在H9c2细胞内激活AMPK/JNK信号通路 |
| 5.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（3）双参宁心胶囊调控线粒体自噬抗小型猪心肌缺血再灌注损伤机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 文献研究 |
| 综述一 基于线粒体自噬探讨益气活血法防治缺血性心脏病的研究进展 |
| 1. 缺血性心脏病概述 |
| 2. 线粒体自噬 |
| 3. 线粒体自噬的分子机制 |
| 4. 线粒体自噬与缺血性心脏病 |
| 5. 益气活血类中药对自噬的干预 |
| 6. 展望与结论 |
| 参考文献 |
| 综述二 Pink1/Parkin通路相关研究进展 |
| 1. PINK1/Parkin的分子机制 |
| 2. PINK1/Parkin介导的线粒体自噬 |
| 3. PINK1/Parkin介导的线粒体自噬与相关性疾病 |
| 4. 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 附件 |
| 第二部分 双参宁心胶囊对小型猪心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第三部分 双参宁心胶囊对小型猪心肌缺血再灌注损伤线粒体自噬作用机制研究 |
| 1. 村料 |
| 2. 方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 线粒体能量代谢关键蛋白在认知障碍中的作用机制 |
| 1 能量代谢相关通路在认知障碍中的作用 |
| 2 线粒体能量代谢相关的关键蛋白在认知障碍中的作用 |
| 参考文献 |
| 综述二 基于中医“虚、瘀、毒”病机探讨能量代谢异常和血管性认知障碍的相互关系 |
| 1 中医“虚、瘀、毒”与血管性认知障碍的关系 |
| 2 中医“虚、瘀、毒”与能量代谢障碍的关系 |
| 3 脑的能量代谢与血管性认知障碍的关系 |
| 4 改善线粒体能量代谢治疗血管性认知障碍的中药复方研究 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 参麻益智方的提取方法和主要化学成分分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 参麻益智方对慢性脑缺血致血管性认知障碍大鼠学习记忆能力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 参麻益智方对慢性脑缺血致认知障碍模型大鼠脑组织线粒体障碍相关蛋白的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 参麻益智方的组方特点和前期研究成果 |
| 2 慢性脑低灌注致血管性认知功能障碍大鼠模型 |
| 3 参麻益智方改善血管性认知障碍大鼠学习记忆功能 |
| 4 参麻益智方对血管性认知障碍大鼠线粒体数量和结构的影响 |
| 5 参麻益智方对线粒体关键蛋白能量代谢的影响 |
| 6 线粒体能量代谢的中医认识 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附件 |
（5）芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心室重构的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠心肌肥厚及心肌纤维化的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 芪苈强心胶囊对高血压小鼠ERK1/2及TGF-β1/Smad3 信号通路的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 芪苈强心胶囊成分药理学研究 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（6）芎归蠲痹方防治长春碱类药物所致周围神经毒性的临床观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 一、资料与方法 |
| 1 病例选择 |
| 2 研究方法 |
| 3 有效性及安全性评价 |
| 4 临床疗效判定 |
| 5 安全性评价标准 |
| 6 临床研究记录 |
| 7 统计学处理 |
| 二、结果与分析 |
| 1 入组情况 |
| 2 一般资料分析 |
| 3 有效性指标比较 |
| 4 安全性评价 |
| 5 不良事件记录 |
| 三、总结讨论 |
| 1 夏小军主任医师治疗经验总结 |
| 2 芎归蠲痹方方论 |
| 3 临床结果分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 第二部分 文献综述 |
| 一、现代医学对长春碱类药物所致周围神经毒性(CIPN)的概述 |
| 1 化疗所致周围神经毒性(CIPN)的流行病学调查 |
| 2 长春碱类药物的概述 |
| 3 长春碱类药物化疗所致周围神经毒性(CIPN) |
| 二、祖国医学对化疗所致周围神经毒性(CIPN)的认识 |
| 1 中医病名 |
| 2 病因病机认识 |
| 3 治法治则 |
| 4 中医治疗 |
| 三、总结与展望 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间主要研究成果 |
（7）鹿茸多肽介导TGF-β/Smads/ERK信号通路对阿霉素诱导心肌损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1 中药防治心肌损伤概述 |
| 1.1 心肌炎 |
| 1.2 心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF) |
| 1.3 心肌梗死 |
| 1.4 心力衰竭(heart failure,HF) |
| 2 中药防治ADR诱导心肌损伤的研究概况 |
| 2.1 ADR的心脏毒性及作用机制 |
| 2.1.1 氧化应激反应 |
| 2.1.2 细胞钙超载 |
| 2.1.3 细胞自噬 |
| 2.1.4 其他 |
| 2.2 中药防治阿霉素心脏毒性的应用 |
| 2.2.1 中药复方 |
| 2.2.2 单味中药 |
| 2.2.3 中药提取物 |
| 3 TGF-β/Smads/ERK信号通路 |
| 4 鹿茸防治心肌损伤的研究 |
| 实验研究 |
| 第一章 鹿茸多肽的提取分离及纯化 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药材 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 鹿茸多肽的提取分离 |
| 2.1 鹿茸的前加工处理及粗蛋白提取 |
| 2.2 离子交换层析分离 |
| 2.3 透析 |
| 2.4 凝胶过滤层析实验方法 |
| 3 鹿茸多肽的检测与鉴定 |
| 3.1 双缩脲法鉴定 |
| 3.1.1 试剂的配置 |
| 3.1.2 蛋白质的检测 |
| 3.1.3 考马斯亮蓝法检测蛋白质含量 |
| 3.2 SDS-PAGE凝胶电泳 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 双缩脲试剂鉴定结果 |
| 4.2 离子交换层析结果 |
| 4.3 凝胶过滤层析结果 |
| 4.4 考马斯亮蓝法检测蛋白含量 |
| 4.5 凝胶分子量检测 |
| 5 结论 |
| 6 讨论 |
| 第二章 鹿茸多肽对阿霉素诱导H9c2 细胞损伤的保护作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 CCK-8 检测 |
| 2.1.1 CCK-8 测定ADR对 H9c2 细胞的IC_50 |
| 2.1.2 CCK-8 测定PAP对 H9c2 细胞的影响 |
| 2.1.3 CCK-8 测定PAP对 ADR诱导H9c2 细胞凋亡的影响 |
| 2.1.4 实验分组 |
| 2.2 H9c2 细胞形态观察 |
| 2.3 LDH渗漏率检测 |
| 2.4 ELISA检测H9c2 细胞上清液中CK-MB、c TnT和 c TnI的水平 |
| 2.5 免疫荧光法检测Bax、Bcl-2和Caspase9 表达 |
| 2.6 流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况 |
| 2.6.1 细胞周期检测 |
| 2.6.2 细胞凋亡检测 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 CCK-8 检测H9c2 细胞活力 |
| 4.1.1 CCK-8 测定ADR及 PAP对 H9c2 细胞的影响 |
| 4.1.2 CCK-8 测定PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞损伤的影响 |
| 4.2 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞形态的影响 |
| 4.3 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞LDH活力及CK-MB含量的影响 |
| 4.4 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞上清液中c TnT和 c TnI的含量的影响 |
| 4.5 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞凋亡率及细胞周期的影响 |
| 4.5.1 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞凋亡的影响 |
| 4.5.2 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞周期的影响 |
| 4.6 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞中Bax、Bcl-2及Caspase-9 表达的影响 |
| 4.6.1 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞中Bax和 Bcl-2 表达的影响 |
| 4.6.2 PAP对 ADR诱导的H9c2 细胞中Caspase3 表达的影响 |
| 5 小结 |
| 6 讨论 |
| 第三章 鹿茸多肽对阿霉素诱导大鼠心肌损伤的保护作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组及模型制备 |
| 2.2 大鼠一般状态观察及体质量检测 |
| 2.3 大鼠心脏脏器指数检测 |
| 2.4 心电图检测 |
| 2.5 ELISA法检测各组大鼠心肌特异性转录因子、心肌肌钙蛋白、Bax、Bcl-2和Caspase3水平 |
| 2.5.1 ELISA法检测各组大鼠血清中心肌肌钙蛋白(c Tn T和c Tn I)水平 |
| 2.5.2 ELISA法检测各组大鼠血清中心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA4、ATF-2 和MEF-2C水平 |
| 2.5.3 ELISA法检测各组大鼠心肌组织中Bax、Bcl-2和Caspase3 水平 |
| 2.6 HE染色观察大鼠心肌组织病理变化 |
| 2.7 TUNEL染色观察大鼠心肌组织凋亡情况 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 各组大鼠一般状态观察及体质量变化 |
| 4.2 各组大鼠心脏脏器指数变化 |
| 4.3 PAP对各组大鼠心电图ST段及心率(Heart rate,HR)的影响 |
| 4.4 各组大鼠心肌肌钙蛋白、心肌特异性转录因子、Bax、Bcl-2和Caspase3 水平 |
| 4.4.1 各组大鼠血清中心肌肌钙蛋白(c Tn)水平 |
| 4.4.2 各组大鼠血清中心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA4、ATF-2和MEF-2C水平 |
| 4.4.3 各组大鼠心肌组织中Bax、Bcl-2和Caspase3 水平 |
| 4.5 各组大鼠心肌组织病理变化 |
| 4.6 各组大鼠心肌细胞凋亡情况 |
| 5 小结 |
| 6 讨论 |
| 第四章 鹿茸多肽对阿霉素诱导心肌损伤保护作用的机制研究 |
| 一、代谢组学研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 代谢组学实验流程 |
| 2.2 样本处理 |
| 2.2.1 尿液样本处理 |
| 2.2.2 色谱质谱采集条件 |
| 2.2.3 代谢物定性与定量原理 |
| 3 数据结果评估 |
| 3.1 代谢物定性定量分析 |
| 3.2 样本质控分析 |
| 4 数据结果分析 |
| 4.1 主成分分析(PCA) |
| 4.2 正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA) |
| 4.3 OPLS-DA得分图及模型验证 |
| 4.4 OPLS-DA S-plot |
| 4.5 差异代谢物筛选 |
| 4.6 差异代谢物条形图 |
| 4.7 差异代谢物VIP值图 |
| 4.8 差异代谢物火山图 |
| 4.9 差异代谢物聚类热图 |
| 4.10 差异代谢物相关性热图 |
| 4.11 差异代谢物KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)功能注释及富集分析 |
| 4.12 差异代谢物KEGG富集 |
| 5 小结 |
| 6 讨论 |
| 6.1 嘌呤代谢途径 |
| 6.2 环磷酸腺苷能量循环代谢途径 |
| 6.3 胆汁分泌代谢途径 |
| 6.4 TGF-β/Smads/ERK信号通路与心肌能量代谢的关系 |
| 二、鹿茸多肽对阿霉素诱导心肌损伤模型TGF-β/Smads/ERK信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 RT-PCR检测TGF-β_1、Smad7、α-MHC、β-MHC和 Cx43 mRNA表达水平 |
| 2.2 Western blot检测TGF-β/Smads/ERK信号通路相关蛋白表达水平 |
| 2.2.1 样品处理 |
| 2.2.2 样品及试剂配制 |
| 2.2.3 上样电泳及显色 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 H9c2 细胞TGF-β_1、Smad7、α-MHC、β-MHC和 Cx43 mRNA表达水平 |
| 4.2 各组大鼠心肌组织中TGF-β_1、Smad7、α-MHC、β-MHC和Cx43 m RNA表达水平 |
| 4.3 H9c2 细胞TGF-β/Smads/ERK信号通路相关蛋白表达水平 |
| 4.3.1 H9c2 细胞中TGF-β_1、Smads和 PKC蛋白表达水平的影响 |
| 4.3.2 H9c2 细胞中Smad2、Smad3和ERK蛋白表达及磷酸化水平的影响 |
| 4.4 各组大鼠心肌组织中TGF-β/Smads/ERK信号通路相关蛋白表达水平 |
| 4.4.1 各组大鼠心肌组织中TGF-β_1、Smad4、Smad7和PKC蛋白表达水平 |
| 4.4.2 各组大鼠心肌组织中ERK蛋白及其磷酸化水平的影响 |
| 4.4.3 各组大鼠心肌组织中Smad2、Smad3 蛋白及其磷酸化表达水平 |
| 5 小结 |
| 6 讨论 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（9）右旋酮洛芬氨丁三醇中细菌内毒素的检测方法学研究（论文提纲范文）
| 1 药品与试剂 |
| 2 方法与结果 |
| 2.1 鲎试剂灵敏度的复核 |
| 2.2 样品细菌内毒素限值的确定 |
| 2.3 样品的干扰实验 |
| 2.4 样品中细菌内毒素的常规检查 |
| 3 讨论 |
（10）中药保护心肌缺血损伤的非循环机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 心肌细胞凋亡 |
| 1.1 中药单体和单味药 |
| 1.1.1 人参和人参总皂甙 |
| 1.1.2 川芎嗪 |
| 1.1.3 葛根素 |
| 1.1.4 丹参注射液 |
| 1.2 中药复方 |
| 1.2.1 加味真武汤 |
| 1.2.2 活血注射液 |
| 1.2.3 益气通络丹 |
| 1.2.4 通心络胶囊 |
| 1.2.5 颐心宁 |
| 1.2.6 益心胶囊 |
| 2 心肌缺血预处理 |
| 2.1 中药有效成分或单味药预处理 |
| 2.1.1 川芎嗪预处理 |
| 2.1.2 三七总皂甙预处理 |
| 2.1.3 大蒜素预处理 |
| 2.1.4 黄芪预处理 |
| 2.1.5 葛根素预处理 |
| 2.2 中药复方药物预处理 |
| 3 心肌超微结构 |
| 3.1 中药单体和单味药 |
| 3.1.1 丹参 |
| 3.1.2 人参 |
| 3.2 中药复方 |
| 3.2.1 参附注射液 |
| 3.2.2 黄芪和川芎嗪 |
| 3.2.3 心痛灵滴丸 |
| 4 心肌酶 |
| 4.1 丹参 |
| 4.2 益气活血贴剂 |
| 4.3 复方血栓通胶囊 |
| 4.4 血府逐瘀汤 |
| 4.5 芎归胶囊 |
| 5 免疫功能调节 |
| 6 结 论 |
四、芎归胶囊对小鼠缺血心肌的保护作用（论文参考文献）
- [1]龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价[D]. 宋欣丽. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]暖心胶囊对射血分数保留的心力衰竭患者能量代谢的作用研究[D]. 娄田田. 广州中医药大学, 2021(02)
- [3]双参宁心胶囊调控线粒体自噬抗小型猪心肌缺血再灌注损伤机制研究[D]. 贾飞凡. 中国中医科学院, 2021(02)
- [4]基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制[D]. 孙成成. 中国中医科学院, 2021(02)
- [5]芪苈强心胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠心室重构的作用及机制研究[D]. 朱静华. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [6]芎归蠲痹方防治长春碱类药物所致周围神经毒性的临床观察[D]. 王立. 甘肃中医药大学, 2020(12)
- [7]鹿茸多肽介导TGF-β/Smads/ERK信号通路对阿霉素诱导心肌损伤的保护作用及机制研究[D]. 徐岩. 长春中医药大学, 2020(08)
- [8]我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）[J]. 国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室. 世界科学技术-中医药现代化, 2013(05)
- [9]右旋酮洛芬氨丁三醇中细菌内毒素的检测方法学研究[J]. 方海燕,方学勤,刘元胜. 时珍国医国药, 2011(12)
- [10]中药保护心肌缺血损伤的非循环机制研究进展[J]. 谷万里,史载祥. 中西医结合心脑血管病杂志, 2005(05)