一、间隙连接功能多样性:连接蛋白基因敲除研究（论文文献综述）
李玉婷[1]（2021）在《巨噬细胞在晶状体损伤后修复中的作用机制研究》文中指出目的近年来不断有新的证据对晶状体作为免疫赦免器官的概念提出了挑战,然而其具体机制仍未研究明确。本研究中我们提供一个直接支持巨噬细胞在免疫赦免器官-晶状体中募集的机制,详细阐述巨噬细胞在晶状体后囊破裂修复、坏死晶体纤维细胞清除和后囊部位纤维化过程中的具体作用。方法建立间隙连接蛋白50（Cx50）和水通道蛋白0（AQP0）的双基因敲除（d KO）小鼠模型。通过利用该小鼠晶状体后囊破裂的特殊表型,我们使用光镜下大体观察、组织形态分析、免疫标记、RNA测序（RNA-seq）分析和实时定量RTPCR（q RT-PCR）观察检测野生型（WT）小鼠和d KO小鼠晶状体在不同生长发育过程中,巨噬细胞、透明血管系统、晶状体纤维细胞坏死、上皮间充质转化（EMT）和纤维化的变化过程和相互联系。结果前期研究发现d KO小鼠存在小眼球,小晶状体并伴有重度白内障和后囊破裂等形态学表型。利用该模型观察到晶状体纤维组织自后囊破裂区域涌入玻璃体腔,统计出生后15天（P15）破裂比率达95.24%（n=21）。组织化学分析观察在晶状体后部形成由排列紊乱的晶状体纤维细胞、透明血管、纤维组织和巨噬细胞组成的“尾巴样”结构。P15天后,形态学观察及α-SMA标记显示透明血管系统退化延迟,后囊及玻璃体腔内纤维化增加。采用CD68和Cx46免疫荧光标记证实巨噬细胞内存在吞噬的Cx46阳性晶状体纤维细胞碎片。在P15天时,通过CD68和受体相互作用蛋白激酶-3（receptor interacting protein kinase-3,RIP3）共标观察到晶状体后部及玻璃体腔内纤维细胞RIP3阳性区域存在CD68+巨噬细胞。P30后,CD68+巨噬细胞向晶状体内部RIP3+坏死纤维细胞区域迁移。P90时,后囊区涌出的晶状体纤维组织清除伴后囊破裂修复,后囊闭合率为90%（n=20）。同时,P15天观察到纤维组织增生;并随P30天后纤维化加重,前囊膜厚度增加,上皮细胞发生EMT过程。此外,通过多抗体免疫荧光共染在P15和P30天d KO小鼠晶状体内分别标记M1和M2巨噬细胞,检测到P30晶状体内CD68+和Arg1+（M2）巨噬细胞数量显着增加（p=0.002和p=0.006）。进行集落刺激因子-1（colony stimulating factor-1,CSF-1）和CSF-1抗体（AFS98）玻璃体腔注射进一步验证M2巨噬细胞在修复过程中的特异性作用,显示CSF-1注射组纤维化程度较未注射组（p=0.0012）、生理盐水组（p=0.0013）及AFS98（p<0.0001）组均明显增加。结论晶状体后囊破裂导致坏死纤维细胞外溢,可引起巨噬细胞通过退化延迟的透明血管系统向晶状体募集。同时,CSF-1诱导巨噬细胞向M2亚型极化,加速纤维修复过程。综上所述,CSF-1激活的M2巨噬细胞在晶状体后囊损伤后修复、晶状体坏死纤维清除和纤维增殖过程中起重要作用。
曹琪[2]（2021）在《丝氨酸蛋白酶HTRA/DEGQ在猪呼吸道病原菌突破呼吸道黏膜上皮屏障中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理猪呼吸系统疾病综合征（Porcine Respiratory Disease Complex,PRDC）是一种由多种因素引起的综合症,给世界养猪业带来巨大的经济损失,其中涉及的主要病原因素包括细菌（如猪胸膜肺炎放线杆菌、猪支气管败血性波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪革拉瑟氏杆菌）、病毒（如猪甲型流感病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒和猪圆环病毒2型）和支原体（如猪支原体和猪肺炎支原体）。不同病原因素在PRDC发展中的作用和影响是复杂的,且病变的严重性是不同因素协同作用的结果。通常认为在PRDC发展过程中病毒性因素的致病机理主要是破坏呼吸道黏膜上皮纤毛结构和干扰肺泡巨噬细胞的功能,而细菌性因素的致病机理主要是刺激机体产生炎症反应。然而,目前对PRDC病原突破呼吸道屏障的分子机制尚不清楚。本研究以新生仔猪气管上皮细胞为体外模型,利用免疫印迹、免疫荧光、ECIS（Electric Cell-substrate Impedance Sensing）、Transwell等方法证明PRDC细菌性病原通过破坏气管上皮细胞屏障来促进自身的跨细胞迁移。同时,利用酪蛋白酶谱法和质谱鉴定了副猪革拉瑟氏杆菌（Glaesserella parasuis,GPS）中具有水解活性的蛋白酶。质谱结果结合氨基酸同源性分析表明PRDC细菌性病原中具有丝氨酸蛋白酶HtrA/DegQ,通过体外实验证实了丝氨酸蛋白酶HtrA/DegQ的生物学功能。最后,通过仔猪攻毒实验,揭示了丝氨酸蛋白酶HtrA/DegQ在PRDC细菌性病原突破宿主呼吸道上皮屏障和组织定殖中发挥着重要作用。论文的具体内容如下:1、PRDC病原菌在体内和体外破坏呼吸道上皮细胞屏障HE（Hematoxylin and Eosin）染色显示PRDC病原菌GPS能够破坏仔猪气管气管上皮层,表现为呼吸道纤毛丢失及上皮细胞。在体内,免疫荧光显示其可以破坏气管上皮的紧密连接蛋白ZO-1和黏附连接蛋白E-钙黏蛋白。在体外,通过免疫荧光和免疫印迹发现PRDC病原菌可以破坏NPTr细胞紧密连接和黏附连接蛋白,且能使E-钙黏蛋白胞外域释放到细胞上清中。同时,ECIS显示PRDC病原菌能够降低NPTr单层细胞的跨细胞电阻。2、E-钙黏蛋白维持上皮细胞屏障功能以及影响PRDC病原菌的跨细胞迁移利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在NPTr细胞中构建E-钙黏蛋白的缺失细胞系。PCR、免疫印迹和荧光定量PCR显示E-钙黏蛋白的成功敲除。通过ECIS检测发现E-钙黏蛋白能维持NPTr单层细胞的跨细胞电阻。通过PRDC病原菌对野生型或E-钙黏蛋白敲除型的NPTr细胞的黏附、侵入以及跨细胞迁移实验,我们发现E-钙黏蛋白影响PRDC病原菌的跨细胞迁移。通过核质分离实验和荧光定量PCR证实E-钙黏蛋白的敲除影响β-catenin在细胞核中的分布以及趋化因子的表达。3、E-钙黏蛋白的切割不依赖宿主基质金属蛋白酶为了分析在PRDC病原菌感染过程中E-钙黏蛋白胞外域释放到细胞上清中具体机制,我们用基质金属蛋白酶广谱抑制剂处理NPTr细胞后进行PRDC病原菌感染,免疫印迹检测发现E-钙黏蛋白全长蛋白的减少并未得到恢复。同时,我们用免疫印迹检测PRDC病原菌感染后基质金属蛋白酶MMP7和ADAM10的变化,免疫印迹显示在感染后MMP7蛋白水平下降,而ADAM10无变化。为排除ADAM10在感染中对E-钙黏蛋白的切割作用,我们用siRNA或者特异性抑制剂降低ADAM10蛋白水平后进行PRDC病原菌感染,通过免疫印迹发现ADAM10不参与PRDC病原感染过程中E-钙黏蛋白降低作用。与此同时,我们用明胶酶谱实验证实PRDC病原菌感染NPTr细胞并不能增强细胞的基质金属蛋白酶的活性。4、筛选PRDC病原菌中的潜在具有水解活性的蛋白酶为进一步探索PRDC病原菌参与E-钙黏蛋白的胞外域释放的因素,我们用酪蛋白酶谱结合质谱鉴定技术,筛选到GPS中具有水解活性的丝氨酸蛋白酶HtrA。多序列比对和结构预测表明,所有PRDC病原菌中均具有与HtrA蛋白同源的DegQ丝氨酸蛋白酶。为进一步探索HtrA/DegQ丝氨酸蛋白酶的活性,我们克隆和纯化PRDC病原菌的野生型或者活性中心的丝氨酸位点突变型（丝氨酸突变成丙氨酸）的HtrA/DegQ丝氨酸蛋白酶。酪蛋白酶谱表明野生型的HtrA/DegQ蛋白具有酪蛋白水解活性,而丝氨酸位点突变型却没有活性。免疫印迹显示HtrA/DegQ丝氨酸蛋白酶能够降解重组的猪源的E-钙黏蛋白的胞外域。通过HtrA多克隆抗体的制备,我们用免疫印迹证实GPS的丝氨酸蛋白酶HtrA可以分泌到胞外,并且可以切割NPTr细胞的E-钙黏蛋白。最终,ECIS显示PRDC病原菌的HtrA/DegQ丝氨酸蛋白酶影响NPTr单层细胞的跨细胞电阻。5、htrA基因缺失影响GPS在仔猪体内的定殖首先,通过自然转化的方法,我们在PRDC病原菌GPS中构建了htrA基因缺失菌株。PCR、免疫印迹和荧光定量PCR表明htrA基因成功缺失。在体外,免疫荧光、免疫印迹、黏附实验和Transwell实验证实htrA基因缺失影响GPS对E-钙黏蛋白的切割和跨细胞迁移。在体内,HE染色、组织分菌、免疫组化和免疫荧光显示htrA基因影响GPS对呼吸道组织的病理损伤、气管E-钙黏蛋白的破坏、跨呼吸道上皮细胞屏障的能力及在呼吸道以外的组织中定殖的能力。6、具有ATPase活性的蛋白酶ClpX调控HtrA的蛋白水平酪蛋白酶谱分析和质谱分析结果表明,蛋白酶ClpX直接或间接参与酪蛋白的水解。通过多序列比对和ATP水解实验,发现ClpX是一种具有ATPase活性的蛋白酶。为了更详细地了解ClpX活性,我们克隆并纯化了GPS的野生型（WT）ClpX,并通过在Walker B结构域中将谷氨酸突变为丙氨酸（EA）表达相应的无活性的突变体。ATP和酪蛋白水解实验表明ClpX蛋白不具有酪蛋白水解活性。通过构建clp X基因缺失菌株以及在htrA基因缺失菌株中表达ClpX蛋白,我们发现不是ClpX蛋白直接降解酪蛋白,而是clp X缺失影响总的和分泌的HtrA蛋白。同样地,我们用clp X基因缺失菌株感染NPTr细胞,免疫印迹结果显示clpX缺失后影响E-钙黏蛋白的切割。
马迪[3]（2021）在《细胞间隙连接通道的传输行为研究》文中进行了进一步梳理分子通信是纳米机器之间进行信息交流的重要通信技术,在环境、工业和医疗等领域具有广阔的应用前景。作为纳米机器间的重要通道,间隙连接（Gap Junction,GJ）随着分子通信技术的兴起在传输行为方面也得到了快速发展。然而,GJ传输行为模型仍然存在局限性,且分子通信细节难以描述;此外,外部刺激信号对GJ介导的分子通信过程的影响机制也尚不明确。针对以上问题,论文的主要工作如下:1)在GJ代谢耦联的行为方式下,以钙离子作为传输信号,针对目前建立的GJ模型忽视连接蛋白类型差异而存在局限性的问题,引入渗透率这一连接蛋白多样性参数,优化了GJ传输模型,改善了模型在连接通道方面具有特殊性的问题。实验结果表明,渗透率参数能够正确反映不同连接蛋白的传输差异,优化后的模型更契合实际生物场景。2)在已优化的GJ代谢耦联模型基础上,针对因模型具有特殊性使分子通信过程中的细节难以描述的问题,提出了基于GJ蛋白影响下的信道过滤机制。解释了过滤机制的基本原理,并设计了一种星型传输的过滤方案,利用优化后的模型,对所提出的方案进行了验证。实验结果表明,不同刺激强度和GJ蛋白的渗透率差异影响过滤的实现过程。3)在GJ电耦联的行为方式下,以心肌细胞为例,针对外部消极刺激（高糖）影响GJ介导的分子通信过程不明的问题,建立了外部消极刺激与GJ数量关系的数学模型,利用信息论知识推理分析,得到了连接蛋白个数变化影响信道容量和传输延迟的结论。实验结果表明,外部消极刺激使GJ个数降低,随之信道容量也逐渐降低,且传输延迟不断升高,最后利用已有生物实验佐证了模型的合理性。论文实现了对GJ代谢耦联行为模型的优化,完善了分子通信中过滤这一细节,丰富了现有分子通信理论,有助于提高药物靶向治疗的效率;建立了电耦联下消极刺激强度与GJ数量关系的数学模型,分析得到了外部刺激对信道容量和传输延迟的影响,模型有助于设计GJ通道的纳米器件。
李小英[4]（2021）在《基于睾丸支持细胞研究4.1R蛋白在少精症小鼠模型中的作用机制》文中认为不育症是严重影响哺乳动物繁殖能力的一类生殖系统疾病。营养缺乏、饲养管理不当、季节性原因、遗传原因（如杂交不育）和疾病等均可导致不育。在引起哺乳动物不育的因素中,雄性因素约占一半左右。无精子症、少精子症、弱精子症、精子无力症等是引起雄性不育的主要病因。少精症是以精子数量显着稀少为特征的雄性不育症类型,病因复杂发生机制仍不十分明确。遗传因素和环境因素均可导致精子数量减少,遗传因素对精子数量的影响主要通过精子形成过程中相应基因的表达和调控作用来实现。因此,寻找影响精子形成的特异性靶基因（蛋白）并阐释其作用机制,对于少精症的精准治疗和预后具有重要的理论价值和意义。4.1R蛋白是一种由epb41基因编码的细胞膜骨架蛋白组分,在红细胞和多种非红细胞组织中发挥作用。本文从以下三个方面阐述4.1R蛋白基于睾丸支持细胞在少精症发生中的作用机制:（1）以雷公藤多苷溶液诱导雄性C57BL/6J小鼠（7周龄）构建的少精症模型小鼠为研究对象,利用western blotting、q-PCR和免疫荧光技术检测4.1R蛋白在少精症小鼠睾丸内的表达特点。利用异硫氰酸荧光素（FITC）睾丸活体注射检测少精症模型小鼠血睾屏障完整性,并检测血睾屏障形成相关蛋白的表达,阐述4.1R蛋白表达与睾丸支持细胞（Sertoli）连接功能间的相关性。检测Wnt/β-catenin信号通路组分在少精症模型小鼠睾丸内的表达特点,阐述4.1R蛋白表达与Sertoli细胞增殖间的相关性。少精症小鼠模型研究结果:western blotting检测显示epb41基因在正常C57BL/6J小鼠睾丸内表达135k D和80k D两种亚型。即4.1R-135k D蛋白和4.1R-80k D蛋白。与对照相比较,少精症模型小鼠睾丸内4.1R-135k D蛋白表达显着下降（P<0.05）,4.1R-80k D蛋白表达无显着变化;epb41m RNA表达降低,差异不显着;4.1R蛋白在少精症模型小鼠睾丸Sertoli细胞膜上表达下降,而各级生精细胞细胞膜上的表达则无显着差异。少精症模型小鼠血睾屏障受损,FITC从基底室进入近腔室并分散其中。与对照组相比较,少精症模型小鼠睾丸内β-catenin蛋白表达显着下降,而E-cadherin表达增加。血睾屏障相关蛋白ZO-1表达显着下降（P<0.05）,occludin和claudin-11表达均下降;Wnt/β-catenin信号通路组分Wnt3a、β-catenin表达显着下降（P<0.05）,GSK3β、c-myc和CDK4表达也下降,但差异不显着。（2）以小鼠epb41基因第3外显子为模板,设计2对sg RNAs并构建p GL3-U6-epb41-sg RNAa-puromycin和p Sp Cas9（BB）-epb41-sg RNAb-2A-GFP重组质粒载体。转染N2a细胞,验证第3外显子基因序列与4.1R蛋白亚型表达之间的相关性。以小鼠epb41基因为模板构建LV-Epb41（43286-1）过表达慢病毒载体和LV-Epb41-sg RNA（05765-1）基因敲除慢病毒载体,分别转染TM4细胞（正常小鼠睾丸支持细胞系,即Sertoli细胞）和原代Sertoli细胞。检测细胞中4.1R蛋白、血睾屏障相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路组分表达水平,阐述4.1R蛋白在体外培养Sertoli细胞增殖和连接中的作用机制。研究结果显示:重组质粒载体转染的N2a细胞中4.1R-135k D蛋白不再表达,而4.1R-80k D蛋白正常表达。LV-Epb41-sg RNA（05765-1）慢病毒载体转染TM4细胞和原代Sertoli细胞,4.1R-135k D蛋白被抑制表达,而4.1R-80k D蛋白正常表达。LV-Epb41（43286-1）过表达慢病毒载体转染TM4细胞和原代Sertoli细胞,显着提高4.1R-135k D蛋白（P<0.05）和4.1R-80k D蛋白的表达,证实已成功实现Sertoli细胞内4.1R-135k D蛋白的抑制表达和过表达。4.1R-135k D蛋白基因敲除的TM4细胞中血睾屏障相关蛋白β-catenin、E-cadherin和ZO-1表达均显着下降;Wnt/β-catenin信号通路组分WB检测结果显示:蛋白Wnt3a、β-catenin、c-myc、GSK3β和Cyclin D1均显着下降（P<0.05）,CDK4表达也下降,CDK6表达则上升。4.1R-135k D蛋白过表达TM4细胞中β-catenin、ZO-1和occludin表达均上升,E-cadherin表达下降,差异均不显着;Wnt/β-catenin信号通路组分WB检测结果显示:蛋白Wnt3a,β-catenin,c-myc,GSK3β和Cyclin D1表达均上升,CDK4和CDK6表达则下降,差异均不显着。4.1R-135k D蛋白基因敲除原代Sertoli细胞中,血睾屏障相关蛋白β-catenin、ZO-1和occludin表达均显着下降;Wnt/β-catenin信号通路组分WB检测结果显示:蛋白Wnt3a、β-catenin和CDK4均显着下降（P<0.05）,c-myc和GSK3β表达也下降,Cyclin D1和CDK6表达则上升。4.1R-135k D蛋白过表达原代Sertoli细胞中β-catenin,ZO-1和occludin表达上升,E-cadherin表达下降,差异均不显着;Wnt/β-catenin信号通路组分蛋白Wnt3a,β-catenin,c-myc,GSK3β,CDK4和CDK6表达均上升,Cyclin D1表达则下降,差异均不显着。（3）以7周龄雄性C57BL/6J小鼠为实验对象,将p GL3-U6-epb41-sg RNAa-puromycin和p Sp Cas9（BB）-epb41-sg RNAb-2A-GFP质粒载体及LV-Epb41（43286-1）载体分别通过活体原位电穿孔转染法和慢病毒载体注射法作用于小鼠睾丸,比较两种载体转染方法的蛋白表达效率和靶向性,并利用免疫荧光法检测载体处理后睾丸组织中4.1R蛋白及血睾屏障相关蛋白的表达水平。阐述4.1R蛋白在活体水平对Sertoli细胞连接的调节作用与机制。质粒载体和慢病毒载体睾丸活体转染结果显示:质粒载体电转染法比慢病毒载体注射法更快在活体内表达,即质粒载体转染后3天,即在睾丸组织中高效表达,使Sertoli细胞中4.1R蛋白表达降低。慢病毒载体注射法表达相对较慢,注射后5天才可以在睾丸中表达。过表达慢病毒载体可显着提高4.1R蛋白在Sertoli细胞中的表达。4.1R-135k D蛋白基因敲除载体作用于活体睾丸,BTB相关蛋白表达变化规律与少精症模型小鼠中的变化规律相同。4.1R-135k D蛋白过表达载体作用于睾丸活体,显着提高BTB相关蛋白的表达,E-cadherin表达除外。综上得出结论:（1）小鼠睾丸和Sertoli细胞中均表达4.1R-135k D和4.1R-80k D两种4.1R蛋白亚型,4.1R-135k D蛋白表达下降与精子细胞数量显着减少相关。（2）小鼠Sertoli细胞系中4.1R-135k D蛋白表达下降,引起β-catenin表达下降,从而使Wnt/β-catenin信号通路组分表达异常,抑制睾丸支持细胞增殖。（3）成年小鼠睾丸组织Sertoli细胞中4.1R-135k D蛋白表达下降,引起血睾屏障相关蛋白表达异常,导致细胞连接异常,精子细胞形成的微环境受损。因此,由于Sertoli细胞中4.1R-135k D蛋白表达下降,可引起Sertoli细胞数量减少或血睾屏障受损,导致精子数量显着减少。
秦梦瑶,冯永,吴学文[5]（2021）在《GJB2突变相关的迟发性遗传性聋研究进展》文中进行了进一步梳理GJB2基因突变是引发非综合征型遗传性聋最常见的原因之一。GJB2编码缝隙连接蛋白26（Connexin26,Cx26）,其表达在来源于外胚层的皮肤和耳蜗中。不同于以往的共识:GJB2基因突变导致先天性听力损失,近年来的分子遗传学研究发现GJB2基因突变也导致迟发性、渐进性听力损失。且听力损失常开始于高频,然后累及中、低频范围。本文旨在综述GJB2基因突变相关迟发性遗传性聋研究进展,进一步推动探索GJB2基因突变致聋机制研究与治疗措施更新。
白祥慧[6]（2021）在《高原鼠兔PMVECs分离纯化及Cx40信号通路初探》文中指出高原鼠兔（Ochotona cruzonia）世居青藏高原,在长期的进化过程中形成了从表型、生理生化到细胞和分子层面的独特适应策略,故而被视作低氧适应研究的最佳模型动物之一。低氧性肺血管收缩反应钝化（Blunted Hypoxic Pulmonary Vasoconstriction,b HPV）是高原鼠兔低氧适应的典型特征之一,其发生和调控机制一直被研究人员所关注。肺组织内皮细胞可调控血管平滑肌细胞的收缩、舒张及增殖、凋亡,故内皮细胞可能在高原鼠兔的b HPV中发挥重要作用,是重要的研究切入点。因此,开展高原鼠兔肺微血管内皮细胞（PMVECs）分离、培养、纯化鉴定等方面的研究,能够对后续高原鼠兔b HPV分子机制等相关研究奠定基础。本研究取得的主要研究结果如下:1、以高原鼠兔为研究对象,用家兔和小鼠为参照,采用组织块贴壁法和酶消化法分别培养高原鼠兔、家兔和小鼠的PMVECs,结果表明:采用酶消化法培养细胞所需时间短、细胞纯度高。2、分别以差速贴壁法、免疫磁珠分选法和两种方法联用对所获得的高原鼠兔、家兔和小鼠肺微血管内皮细胞进行纯化,结果表明:两种纯化方法联用后所得到的细胞纯度最高。3、利用细胞免疫荧光染色法、细胞免疫化学染色法等方法分别鉴定高原鼠兔、家兔和小鼠的肺微血管内皮细胞,鉴定结果均为阳性,证明培养细胞所得到的细胞为PMVECs。4、用提取的高原鼠兔基因组DNA,验证CD31、v WF和VEGF三对引物,结果表明CD31效果最好,进而用提取的高原鼠兔中RNA,通过q RT-PCR测定细胞中CD31的表达量,结果表明:阳性细胞中CD31表达量明显高于阴性细胞中,以此确定所获得的细胞为PMVECs。5、利用酶标仪测定OD值,绘制高原鼠兔、小鼠和家兔PMVECs的生长曲线,结果表明:高原鼠兔PMVECs生长速度快。6、提取低氧处理的高原鼠兔和未低氧处理的高原鼠兔肺组织总RNA,测得了其肺组织全长转录组数据;并经q RT-PCR测定Cx40表达量,实验结果:低氧处理组中Cx40表达量低于未处理组,表达下调,由此推测高原鼠兔是通过降低Cx40的表达量抑制血管收缩反应,造成肺血管收缩反应钝化,进而适应低氧环境。
王远微[7]（2020）在《辣椒素对肥胖小鼠肠道菌群的影响及其降脂机制研究》文中认为随着人们生活水平的提高,高热量和高脂肪食物的饮食结构、身体锻炼不足和久坐不动的生活方式导致全球肥胖的发病率呈逐年上升的趋势。据世界肥胖联合会统计,到2030年世界上60%的人口将超重或肥胖,其中至少有4100万是5岁以下的儿童。肥胖及其引起的并发症不但威害人们的健康,威胁人们的生命,还给社会、家庭以及个人造成了沉重的医疗投入和经济负担。因此预防和治疗肥胖已经成为世界各国面临的重大公共卫生挑战。辣椒素作为一种从天然食材中提取的活性成分,被研究发现具有很好的抑制肥胖的效果和较少的副作用,受到人们的青睐和科研人员们的广泛关注。在辣椒素的降脂机理研究中,瞬时受体电位感受器阳离子通道（TRPV1）的激活被认为是其发挥降脂作用的关键,在其众多作用机制中都有TRPV1的参与。但是还有很多研究发现,辣椒素除了TRPV1途径还有其他降脂减肥机制,对肠道菌群的影响便是其中之一。越来越多的研究发现肥胖的发生和发展与肠道菌群有着密切的关系,而辣椒素被报道可以影响肠道菌群的组成,使其向更有利于机体降脂的结构变化,所以辣椒素对肠道菌群的调节可能成为其降脂机制之一。但对于这一机制缺乏系统深入的研究,现有研究仅停留在辣椒素对肠道菌群种类和数量的影响,而对于辣椒素引起的菌群变化是怎样调节机体脂类的吸收和代谢的深入而系统的研究不多,其中的机制也不是很明确,亟待更深入的探索。而且这些研究中都没有排除TRPV1在降脂中发挥的作用。因此,本研究以TRPV1基因敲除的小鼠和肠上皮细胞Caco-2(TRPV1-/-)为动物模型,探索辣椒素除了TRPV1阳离子通道途径之外,作用肥胖小鼠肠道菌群发挥降脂作用的机制,以期进一步丰富辣椒素降脂的机制,同时为辣椒素作为降脂减肥药物或者保健产品的应用提供科学依据。研究结果如下:（1）研究辣椒素通过影响肥胖小鼠肠道菌群的结构以及短链脂肪酸浓度发挥降脂作用。以8周龄雌性的TRPV1基因敲除小鼠（KO）以及其对应的野生型小鼠（WT）为试验动物,各自分为3组（每组6只,共6组）,在饲喂标准脂肪含量饲料、高脂肪含量饲料、高脂肪含量饲料+灌胃2 mg/kg的辣椒素12周后,分别用高通量测序和气相色谱分析-质谱法（GC-MS）测定各组小鼠肠道菌群和肠道中短链脂肪酸（SCFAs）的变化,同时测定体重,采食量以及血脂血糖等指标。探索在TRPV1阳离子通道未激活的情况下,辣椒素对肠道菌群组成、SCFAs的产生以及机体能量平衡的影响。结果发现,灌胃辣椒素可以显着抑制高脂饲料诱导的WT和KO小鼠体重、采食量、血脂、血糖等指标的升高,表明即使TRPV1阳离子通道未激活的情况下,辣椒素的降脂作用仍然存在,但辣椒素在KO小鼠上的降脂效果与TRPV1阳离子通道激活情况下（WT小鼠）相比有所减弱;辣椒素通过提高肥胖小鼠肠道菌群的多样性、降低肠道中大肠杆菌属、幽门螺杆菌属、脱硫弧菌属和萨特氏菌属等有害细菌的数量、提高肠道菌群中具有降脂作用的拟杆菌属、粪球菌属、普雷沃氏菌属、艾克曼菌属、Odoribacter属、Allobaculum属和S24-7科细菌的相对丰度以及这些细菌发酵产生的乙酸和丙酸的浓度发挥其降脂作用。（2）研究辣椒素通过微生物-肠-脑轴（MGBA）途径抑制肥胖小鼠食欲,减少采食量,发挥降脂作用。以8周龄雌性KO小鼠为试验动物,分为3组,每组10只,在饲喂标准脂肪含量饲料、高脂肪含量饲料、高脂肪含量饲料+灌胃2 mg/kg辣椒素12周后,检测体重、采食量、血脂血糖、肠激素及其受体和下丘脑神经元等组成的MGBA途径的相关指标。结果发现,辣椒素通过提高可发酵产生乙酸和丙酸的拟杆菌属、普雷沃氏菌属、艾克曼菌属等细菌的数量而提高肠道中乙酸和丙酸的浓度。肠道中浓度升高的乙酸和丙酸使肠道细胞上的SCFAs受体G蛋白偶联受体43（FFAR2）的表达上调,而上调的FFAR2刺激结肠的L细胞分泌的胰高血糖素样肽-1（GLP-1）和肽YY（PYY）增多。增多的GLP-1主要通过旁分泌系统刺激肠道中的周围迷走传入神经元,将信号经迷走传入神经传入下丘脑,引起下丘脑中GLP-1受体（GLP-1R）表达上调。增多的PYY通过血液循环到达下丘脑,引起下丘脑中PYY受体（NPY2R）的表达上调。表达上调的GLP-1R和NPY2R抑制下丘脑弓状核（ARC）中促进采食的神经肽Y神经元（NPY）和刺鼠相关蛋白神经元（AgRP）,激活抑制采食的阿片促黑色素神经元（POMC）和可卡因-苯丙胺调节转录肽神经元（CART）,从而增加饱腹感,降低食欲,导致小鼠采食量的下降。最终证实辣椒素通过MGBA途径达到降脂减肥作用的机制。（3）研究辣椒素通过降低慢性、低程度炎症反应（CLGI）发挥降脂作用。以8周龄雌性KO小鼠为试验动物,分为3组,每组10只,在饲喂标准脂肪含量饲料、高脂肪含量饲料、高脂肪含量饲料+灌胃2 mg/kg辣椒素12周后,测定辣椒素作用后肠道中LPS受体Toll样受体4（TLR4）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）炎性因子的表达、胞质蛋白ZO-1和跨膜蛋白Occludin的表达以及血液中LPS、TNF-α、和IL-6的浓度等CLGI相关指标。结果发现,辣椒素通过降低肠道中变形菌门的大肠杆菌属、幽门螺杆菌属、脱硫弧菌属和萨特氏菌属细菌的相对丰度,从而减少肠道中LPS的浓度,然后降低由TLR4的介导的TNF-α和IL-1β表达量,使肠道局部炎症减弱;局部炎症减弱导致紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达升高,肠道屏障功能得到恢复,使肠道的通透性降低,减少了进入血液循环中的LPS浓度;减轻的内毒素血症,导致血液中TNF-α和IL-6等炎性因子的浓度降低,减弱CLGI,从而最终达成辣椒素降脂减肥的作用,证实辣椒素通过降低CLGI发挥降脂作用的机制。（4）研究辣椒素对肠上皮细胞炎症反应和屏障功能的影响,体外试验验证辣椒素通过降低CLGI发挥降脂作用。运用CRISPR/Cas9技术自行成功构建了TRPV1基因敲除的肠上皮细胞株Caco-2(TRPV1-/-),并以其做为试验模型,分为对照组、1μg/mL LPS组和1μg/mL LPS+75μM辣椒素3个试验组,测定细胞上TLR4、TNF-α、和IL-6的mRNA表达量、细胞上清液中TNF-α、和IL-6炎性因子的浓度、跨膜蛋白ZO-1和胞质蛋白Occludin的mRNA和蛋白表达量以及细胞跨膜电阻值（TEER）。结果发现,因为细胞缺失TRPV1基因,辣椒素没有抑制LPS诱导的TLR4、TNF-α、和IL-6的mRNA表达以及细胞上清中TNF-α、和IL-6炎性因子的浓度升高。这从侧面证实在小鼠体内试验中,辣椒素是通过减少产LPS细菌的相对丰度减少LPS的量而降低局部炎症,而不是辣椒素通过TRPV1受体途径直接降低局部炎症反应;辣椒素可以刺激ZO-1和Occludin的mRNA和蛋白表达,从而提高TEER值,表明辣椒素对肠道的屏障功能具有修复作用。辣椒素对肠道的修复作用降低了肠道通透性,会减少进入血液循环中的LPS浓度,从而减轻内毒素血症和CLGI。通过体外试验进一步验证了辣椒素通过降低CLGI发挥降脂作用的机制。综上所述,辣椒素通过提高肠道菌群的多样性、增多具有降脂作用的细菌和可发酵产生乙酸和丙酸的细菌的相对丰度,减少肠道中属于变形菌门的有害细菌的数量发挥降脂作用;辣椒素增多肠道中乙酸和丙酸的浓度,然后通过MGBA途径将肠道感受神经的信号传入下丘脑ARC内控制食欲的神经元,从而降低食欲,减少采食,发挥降脂作用;辣椒素通过降低属于变形菌门的有害细菌的数量而降低肠道中LPS的浓度,减弱内毒素血症,进而降低CLGI发挥降脂作用;同时辣椒素对于肠道屏障功能的修复作用也有助于其降低CLGI而发挥降脂作用。本研究挖掘了以上辣椒素通过影响肠道菌群发挥降脂作用的机制,是除了TRPV1阳离子通道途径之外对辣椒素降脂机制的补充。
刘伟[8]（2020）在《鳜皮肤图案形成与Cx39.4、Cx41.8基因表达的初步研究》文中研究指明皮肤图案是鱼类重要的外部形态特征,在生存、繁殖中发挥重要作用。鳜（Siniperca chautsi）是我国特有的淡水名贵经济种类,具有特殊的皮肤图案:头背侧、自吻端穿过眼部至背鳍基部前下方各有一褐色条纹,躯干两侧各有一较宽的与体轴相垂直的褐色纵带,躯干后侧有若干暗褐色斑块等。本论文对鳜早期色素细胞发育与图案形成特征进行了观察,采用光镜与电镜技术对不同皮肤图案区域色素细胞的种类与分布进行了显微与超显微观察,并通过荧光定量PCR检测了不同皮肤图案类型中间隙连接蛋白Cx39.4与Cx41.8基因的表达特征,为鳜皮肤图案的形成机制提供了细胞和分子的基础资料。主要研究结果如下:（1）为了解鳜早期发育过程中皮肤图案形态发生,采用解剖镜对鳜早期（胚胎期-出膜40日龄）体表色素细胞种类与分布、主要图案（条、带、斑）形成过程进行了观察。结果表明,胚胎期,黑色素细胞最先出现,位于卵黄囊表面,出膜前,头部出现黄色素细胞;出膜后,黑色素细胞发育最为显着,红色素细胞出现在眼球后部和躯干前部;仔鱼后期,黄色素细胞发育增加,鱼体各部位均有分布,黑色素细胞继续发育,图案形成开始。鳜早期色彩图案形成过程:（1）头顶条纹:6日龄,黑色斑点增多,18日龄,黑色斑块分别向前、后延伸,23日龄,头顶正上方黑色条带基本形成;（2）头部过眼条纹:10日龄,鳃盖后上方黑色斑点明显增多,12日龄,眼球后部经鳃盖后上缘至背部前端的条带形成,17日龄,吻端至眼球前部的条带形成;（3）躯干纵带:5日龄,背部出现少量黑色斑点,14日龄,背鳍基部黑色素与腹部黑色斑点相连;（4）躯干斑块:8日龄,尾部底端出现一个较小的黑色斑点,15日龄,尾柄前部出现三个不规则黑色斑块,25日龄,躯干中后部五个近圆形的黑色斑块形成。结果表明,鳜早期体表出现黑色素细胞、黄色素细胞和红色素细胞,体色以黑色为主,条纹、纵带、斑块等主要图案在仔鱼后期按不同方式逐渐形成。（2）为了解鳜皮肤图案区域色素细胞的种类、分布与排列特征,采用光镜与电镜技术对皮肤图案区域、非图案区域及其交界区域进行了显微与超显微结构观察。结果显示,鳜皮肤中含有黑色素细胞、黄色素细胞、红色素细胞及虹彩细胞,主要分布于表皮和真皮层。图案区域（头部过眼条纹、躯干纵带、躯干斑块）表皮与真皮层均含有黑色素细胞,非图案区域仅表皮层含有少量黑色素细胞。躯干图案区域（纵带、斑块）真皮层色素细胞排列层次明显,由外到内依次为黄色素细胞、红色素细胞、黑色素细胞和虹彩细胞,虹彩细胞内反射小板较长,规则排列;躯干非图案区域由外到内依次为黄色素细胞、红色素细胞和虹彩细胞,虹彩细胞内反射小板较短,无规则排列。过眼条纹色素层含有4种色素细胞,数量较少,且排列无规则,黑色素细胞内黑色素颗粒较大。交界区域真皮层黑色素细胞数量向非图案区域一侧逐渐减少,虹彩细胞数量逐渐增加。结果表明,鳜图案区域与非图案区域、不同图案区域中的色素细胞种类、分布与排列各不相同。（3）间隙连接蛋白（connexin,Cx）是色素细胞间连接与信息交流的重要通道,也参与鱼类皮肤图案的形成。以鳜不同图案类型（普通型:图案包含明显的条、带和斑块,无规则型:图案为短、碎的无规则条纹）为研究对象,对其躯干皮肤组织进行切片观察和间隙连接蛋白Cx39.4、Cx41.8基因表达水平测定。结果显示,无规则型躯干部真皮层黑色素细胞分布松散无规律。普通型躯干区域（纵带、斑块和非图案）Cx39.4与Cx41.8基因表达水平高于头部区域（过眼条纹）;无规则型躯干皮肤Cx39.4基因表达水平与普通型躯干区域（纵带、斑块和非图案）无明显差异,但Cx41.8基因表达水平极显着低于普通型。推测Cx41.8基因表达水平与黑色素细胞的分布排列有一定的关联,从而影响鳜皮肤图案的形成过程。
田甜[9]（2019）在《雷米普利对自发性高血压大鼠脑动脉Cx43表达影响的研究》文中研究说明目的:探讨脑动脉细胞表型转化及细胞异常增殖诱导的血管重构是否参与自发性高血压大鼠（Spontaneously hypertensive rats,SHR）脑血管损伤过程。论证雷米普利（Ramipril）对脑动脉Cx43（connexin43）表达、脑血管细胞表型转化、细胞增殖的影响,并研究雷米普利（Ramipril）对SHR早期脑血管损伤,脑血管重塑的作用。进而探究Ramipril对SHR早期脑血管损伤的保护机制。方法:选取健康成年WKY（Wistar-Kyoto,Wistar京都大鼠）、SHR大鼠。分为WKY组、SHR组、SHR+Ramipril、SHR+Ramipril+CBX四组。运用无创尾动脉测压法对各组大鼠进行收缩压及舒张压检测;利用HE染色法检测各组脑动脉形态学改变;应用干湿重测量法检测各组脑含水量、伊文思兰染色法测量各组脑部液体外渗量;采用压力肌动图技术对各组大鼠脑动脉收缩功能进行检测;利用免疫荧光以及免疫组化法观察各组大鼠脑动脉Cx43表达及分布变化;运用RT-PCR技术检测各组Cx43 mRNA表达变化;利用Western Blot技术检测Cx43、PCNA、α-SMA、OPN的蛋白表达情况。结果:（1）相比于WKY组大鼠,SHR组大鼠的收缩压和舒张压显着升高,脑血管损伤严重;脑血管细胞间Cx43、脑血管细胞分泌型标志蛋白（OPN,骨桥蛋白）及细胞增殖相关因子（PCNA,增殖细胞核抗原）表达明显增高,脑血管细胞收缩型标志蛋白（α-SMA,α平滑肌肌动蛋白）表达显着降低;脑动脉收缩率异常增高。（2）Ramipril干预后四周后,SHR+Ramipril组大鼠收缩压及舒张压明显下降,血管重构程度明显改善;脑血管细胞Cx43、OPN、PCNA的表达降低,α-SMA表达升高;脑动脉收缩率显着下降。结论:（1）SHR脑动脉重构过程中存在脑动脉细胞表型转化以及脑动脉细胞异常增殖;（2）Ramipril对自发性高血压诱发的脑动脉损伤起到一定的保护作用,其机制可能是减少脑动脉血管Cx43表达以及抑制脑动脉细胞表型转化和细胞异常增殖、改善脑动脉收缩功能等。
王博[10]（2014）在《E-cadherin在急性噪声损伤中的分子机制研究》文中进行了进一步梳理E-cadherin蛋白（CDH1）是一种钙依赖性的上皮细胞间的粘附蛋白，在耳蜗感觉细胞和支持细胞中几乎均有表达。它在Corti器的发育和结构及功能的维持中有重要作用。前期研究表明噪声暴露后E-cadherin在大鼠耳蜗感觉上皮组织中的表达量增加。但目前还不清楚噪声暴露导致E-cadherin的增加是由Corti氏器中的哪种细胞引起的以及其表达量增加的作用是什么。因此，有必要对E-cadherin在噪声损伤中的作用作进一步深入研究。本研究综合运用诱导性条件基因敲除，显微分离，激光共聚焦，免疫透射电镜等细胞分子生物学技术，探索E-cadherin分子在急性噪声损伤中的作用。实验分为以下三个部分：第一部分E-cadherin条件转基因小鼠模型的建立本部分实验的目的是获得仅在内外毛细胞或外毛细胞中将E-cadherin基因敲除的条件转基因敲除小鼠。通过应用Cre/loxP技术，将B6.129-Cdh1tm2Kem/J小鼠与Tg（Atoh1-cre/Esr1*）14Fsh/J小鼠和Prestin-CreERT2小鼠进行杂交配对和筛选。上述两种Cre小鼠为诱导性的Cre系统，只有与Tamoxifen相结合时才能启动Cre重组酶的活性。因此通过药物诱导可以对E-cadherin基因的敲除实现时间和空间两个方面的控制。本实验中首先将配对后所得的两种条件转基因小鼠：Cdh1-loxP/Atoh1-cre小鼠和Cdh1-loxP/Prestin-CreERT2小鼠进行基因分型，初步筛选获得基因型Cdh1-loxP为纯和表达的转基因小鼠。同时进一步通过免疫荧光组织染色法检测所得小鼠在Tamoxifen诱导后Cre重组酶的表达活性，判断小鼠的Cre/loxP重组酶是否工作正常。最后使用脑干诱发电位法对条件转基因小鼠的听力水平进行检测，为下一步噪声暴露实验提供听阈水平的基线。实验筛选得到了符合后续实验要求的条件转基因小鼠Cdh1-loxP （+/+） Prestin-CreERT2（+/-），为后续研究噪声暴露后E-cadherin在耳蜗内的表达变化和结构改变提供了动物模型。第二部分高纯度内耳细胞显微分离技术的建立本部分实验的目的是建立一种样本中RNA保存完好的毛细胞富集组织（Haircell-enriched tissue）的提取方法。耳蜗病变分子生物学研究的成功依赖于高品质耳蜗样本的收集。由于耳蜗结构的复杂性，从哺乳动物耳蜗中分离感觉细胞富集的样本一直是一个挑战。本研究采用显微解剖技术分离感觉细胞富集的耳蜗组织样本，使感觉细胞的纯度显着提高。同已前方法中获得的感觉上皮组织相比，新方法制备的样品中含有了一个相对稳定感觉细胞/支持细胞的比例，并且样品中的RNA保存完好。使用该显微解剖方法，我们能够收集小鼠耳蜗中分离的三种组织类型：感觉细胞富集组织，外毛细胞富集组织和内毛细胞富集组织。所有样本可以用于相关的下游分析，包括qRT-PCR，微阵列和RNA测序等。第三部分E-cadherin在急性噪声损伤中的分子机制本部分实验的目的是研究E-cadherin在急性噪声损伤中围绕外毛细胞（OHC）所发生的变化。分析该分子在外毛细胞富集组织中RNA转录水平的改变及在Corti氏器的位置结构变化，初步理解E-cadherin在急性噪声损伤中的分子机制。实验利用条件转基因小鼠模型研究外毛细胞在cdh1基因被敲除后E-cadherin在网状层中的变化，使用外毛细胞富集组织分离方法开展相关细胞粘附分子qRT-PCR检测，应用3D重建和免疫透射电镜技术观察网状层外毛细胞与Deiters细胞之间E-cadherin连接的位置结构。结论如下：1.急性噪声损伤后，外毛细胞周围E-cadherin的表达增加是由Deiters细胞引起的；2. Deiters细胞中的E-cadherin通过指状突连接网状层；3.急性噪声损伤后，Deiters细胞之间通过过量表达E-cadherin封闭由毛细胞凋亡后的空缺，维持网状层的完整性。
二、间隙连接功能多样性:连接蛋白基因敲除研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、间隙连接功能多样性:连接蛋白基因敲除研究（论文提纲范文）
（1）巨噬细胞在晶状体损伤后修复中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 研究背景 |
| 1.1 晶状体免疫赦免机制 |
| 1.1.1 免疫赦免定义 |
| 1.1.2 损伤后的免疫应答 |
| 1.2 连接蛋白和水通道蛋白在晶状体中的作用 |
| 1.2.1 连接蛋白在晶状体中的作用 |
| 1.2.2 水通道蛋白在晶状体中的作用 |
| 1.3 巨噬细胞在组织损伤中的作用 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 基因敲除小鼠 |
| 2.1.2 实验材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 晶状体大小及质量测量 |
| 2.2.2 眼球组织的特殊石蜡切片制备与苏木素-伊红染色 |
| 2.2.3 免疫组织化学染色 |
| 2.2.4 眼球组织冰冻切片制备 |
| 2.2.5 免疫荧光染色 |
| 2.2.6 多抗体免疫荧光共染 |
| 2.2.7 晶体组织RNA提取与RT-q PCR |
| 2.2.8 玻璃体腔注射 |
| 2.2.9 巨噬细胞增殖分析 |
| 2.2.10 巨噬细胞计数与前囊膜厚度测量 |
| 2.2.11 统计学方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 Cx50/AQP0 d KO小鼠后囊破裂表型与“尾巴样”结构形成 |
| 3.1.1 d KO小鼠晶体发育变化 |
| 3.1.2 后囊破裂表型 |
| 3.1.3 “尾巴样”结构形成 |
| 3.2 d KO小鼠透明动脉系统的延迟退化 |
| 3.2.1 不同时间点对比透明脉管系统退化状态 |
| 3.2.2 巨噬细胞游出 |
| 3.3 巨噬细胞的募集与晶体纤维细胞坏死 |
| 3.3.1 凋亡与巨噬细胞募集 |
| 3.3.2 坏死与巨噬细胞募集 |
| 3.4 纤维化激活与晶体后囊的修复 |
| 3.4.1 后囊的纤维化修复 |
| 3.4.2 EMT的发生 |
| 3.5 M2巨噬细胞在晶体后囊纤维化修复中的重要作用 |
| 3.5.1 巨噬细胞的激活状态 |
| 3.5.2 M1及M2巨噬细胞亚型在修复过程中的作用 |
| 3.5.3 M2巨噬细胞的持续性激活 |
| 3.5.4 与M2巨噬细胞相关的基因表达 |
| 3.6 CSF-1在M2巨噬细胞的极化和晶体后囊纤维化修复中的重要作用 |
| 3.6.1 CSF-1在修复过程中的表达 |
| 3.6.2 加强或抑制CSF-1对后囊修复的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 综述 晶状体内的连接蛋白与水通道蛋白0及其相互联系 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（2）丝氨酸蛋白酶HTRA/DEGQ在猪呼吸道病原菌突破呼吸道黏膜上皮屏障中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表(Abbreviation) |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 猪呼吸系统疾病综合征 |
| 1.1.1 猪呼吸系统疾病综合征概述 |
| 1.1.2 影响猪呼吸系统疾病综合征的因素 |
| 1.1.3 细菌性病原在猪呼吸系统疾病综合征中的作用 |
| 1.2 引起猪呼吸系统疾病综合征的细菌性病原 |
| 1.2.1 副猪革拉瑟氏杆菌 |
| 1.2.2 猪胸膜肺炎放线杆菌 |
| 1.2.3 多杀性巴氏杆菌 |
| 1.2.4 猪支气管败血性波氏杆菌 |
| 1.3 呼吸道黏膜上皮屏障与呼吸道细菌性病原 |
| 1.3.1 呼吸系统屏障概述 |
| 1.3.2 呼吸道黏膜上皮层结构及屏障功能 |
| 1.3.3 细菌性病原跨越黏膜上皮细胞屏障 |
| 1.3.4 细菌性病原将上皮细胞间连接蛋白作为分子靶标 |
| 1.4 丝氨酸蛋白酶/伴侣蛋白 |
| 1.4.1 细菌丝氨酸蛋白酶HtrA/DegQ概述 |
| 1.4.2 丝氨酸蛋白酶HtrA/DegQ的结构及功能 |
| 1.4.3 细菌分泌丝氨酸蛋白酶HtrA/DegP的方式 |
| 1.4.4 致病菌HtrA蛋白与宿主细胞的作用形式 |
| 第2章 研究目的与意义 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 菌株、细胞和质粒 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂盒 |
| 3.1.3 培养基及抗生素溶液的配制 |
| 3.1.4 主要溶液及其配制 |
| 3.1.5 主要实验器材 |
| 3.1.6 实验动物 |
| 3.1.7 引物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 菌株的复苏、传代培养和生长曲线测定 |
| 3.2.2 基因缺失重组质粒以及互补质粒的构建 |
| 3.2.3 基因缺失菌株和互补菌株的构建及PCR鉴定 |
| 3.2.4 htrA缺失菌株的荧光定量PCR的鉴定 |
| 3.2.5 HtrA/DegQ/ClpX蛋白的原核表达及纯化 |
| 3.2.6 GpHtrA和GpClpX蛋白免疫血清的制备 |
| 3.2.7 htrA/clpX/clpP基因缺失菌株及互补菌株的Western Blot鉴定 |
| 3.2.8 HtrA蛋白的分泌实验 |
| 3.2.9 利用CRISPR-Cas9技术在NPTr细胞中构建基因缺失细胞系 |
| 3.2.10 细菌的对NPTr细胞的黏附、侵入和Transwell实验 |
| 3.2.11 E-钙黏蛋白胞外结构域(N-Terminal Fragment,NTF)的真核表达、纯化及体外切割实验 |
| 3.2.12 酪蛋白酶谱和明胶酶谱实验 |
| 3.2.13 GPS菌株酪蛋白酶谱区域的质谱分析实验 |
| 3.2.14 ECIS测定细胞的跨细胞电阻 |
| 3.2.15 siRNA干扰和抑制剂抑制实验 |
| 3.2.16 NPTr细胞核蛋白和细胞浆蛋白分离实验 |
| 3.2.17 序列比对和结构预测 |
| 3.2.18 动物实验 |
| 3.2.19 HE染色、免疫荧光染色、免疫组化和激光共聚焦 |
| 3.2.20 统计学分析 |
| 第4章 结果与分析 |
| 4.1 PRDC病原菌影响气管上皮细胞屏障功能 |
| 4.1.1 PRDC病原菌破坏气管上皮细胞与细胞之间的连接蛋白 |
| 4.1.2 PRDC病原菌降低气管上皮细胞的跨细胞电阻 |
| 4.2 PRDC病原菌黏附和侵入新生仔猪气管上皮细胞 |
| 4.3 利用CRISPR-Cas9技术成功构建E-钙黏蛋白缺失细胞系 |
| 4.4 E-钙黏蛋白维持上皮细胞屏障功能 |
| 4.5 E-钙黏蛋白的缺失能增加β-catenin的入核 |
| 4.6 宿主的基质金属蛋白酶蛋白不参与PRDC病原菌诱导E-钙黏蛋白的降低 |
| 4.6.1 PRDC病原菌对基质金属蛋白酶蛋白量的影响 |
| 4.6.2 E-钙黏蛋白的胞外域切割不依赖宿主MMPs活性和ADAM10 |
| 4.7 PRDC病原菌的酪蛋白酶谱分析 |
| 4.8 PRDC病原菌的HtrA/DegQ蛋白保守性分析 |
| 4.9 HtrA/DegQ蛋白的表达及纯化 |
| 4.9.1 pET28a-HtrA/DegQ质粒的构建 |
| 4.9.2 HtrA/DegQ野生型和突变型蛋白的表达 |
| 4.10 HtrA/DegQ蛋白的水解活性 |
| 4.10.1 HtrA/DegQ蛋白的酪蛋白水解活性 |
| 4.10.2 HtrA/DegQ蛋白对E-钙黏蛋白的水解作用 |
| 4.11 GpHtrA蛋白的分泌鉴定 |
| 4.11.1 GpHtrA蛋白的多克隆抗体制备 |
| 4.11.2 GpHtrA蛋白分泌到TSB培养基中 |
| 4.11.3 GpHtrA蛋白分泌到细菌与细胞共培养上清中 |
| 4.12 分泌的GpHtrA靶向E-钙黏蛋白的胞外域 |
| 4.12.1 重组的HtrA/DegQ蛋白对细胞E-钙黏蛋白的切割实验 |
| 4.12.2 E-钙黏蛋白胞外域切割不依赖宿主的HtrA1蛋白酶 |
| 4.12.3 GpHtrA蛋白在GPS菌株中的表达 |
| 4.12.4 野生型HtrA/DegQ蛋白降低NPTr细胞的跨细胞阻值 |
| 4.13 htrA基因缺失菌株的构建以及鉴定 |
| 4.13.1 pK18mobsacB-htrA-UKD自杀性质粒的构建 |
| 4.13.2 htrA基因缺失菌株的PCR鉴定 |
| 4.13.3 htrA基因缺失菌株的WB和荧光定量PCR鉴定 |
| 4.13.4 htrA基因缺失对酪蛋白酶活性的影响 |
| 4.14 htrA基因减少菌株的黏附和跨细胞迁移 |
| 4.14.1 htrA基因减少菌株对E-钙黏蛋白的切割 |
| 4.14.2 htrA基因缺失减少菌株对气管上皮细胞的黏附和跨细胞迁移 |
| 4.15 htrA基因缺失减少细菌在仔猪体内的定殖 |
| 4.15.1 htrA基因缺失减缓菌株对仔猪呼吸系统的病理损伤 |
| 4.15.2 htrA基因缺失减缓菌株对气管上皮E-钙黏蛋白的破坏 |
| 4.15.3 htrA基因缺失减少菌株在呼吸道和其它组织中的定殖 |
| 4.15.4 htrA基因缺失减少菌株的跨上皮细胞能力 |
| 4.16 AAA+ATPase ClpX蛋白酶调控 GpHtrA蛋白 |
| 4.16.1 ClpX的结构分析以及clpP-X基因共转录验证 |
| 4.16.2 GpClpX是具有ATPase活性的蛋白酶 |
| 4.16.3 clpP和clpX基因缺失对GPS的酪蛋白酶谱的影响 |
| 4.16.4 ClpX影响HtrA蛋白酶在GPS中的表达及生物学功能 |
| 第5章 讨论与结论 |
| 5.1 讨论 |
| 5.1.1 PRDC细菌性病原与呼吸道黏膜屏障 |
| 5.1.2 PRDC细菌性病原中具有酪蛋白水解活性的蛋白酶 |
| 5.1.3 丝氨酸蛋白酶HtrA/DegQ的自我切割形式 |
| 5.1.4 病原菌的HtrA/DegQ蛋白酶的调控表达 |
| 5.2 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 附表1. GPS 的酪蛋白酶谱条带中蛋白的质谱鉴定 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（3）细胞间隙连接通道的传输行为研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 国外研究现状 |
| 1.2.2 国内研究现状 |
| 1.2.3 总结 |
| 1.3 论文主要研究内容与结构安排 |
| 1.3.1 论文主要研究内容 |
| 1.3.2 论文结构安排 |
| 第2章 分子通信与间隙连接的基础理论 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 分子通信 |
| 2.2.1 分子通信的定义及特征 |
| 2.2.2 分子通信与传统通信的对比 |
| 2.2.3 分子通信的应用 |
| 2.3 间隙连接 |
| 2.3.1 间隙连接蛋白结构及分布 |
| 2.3.2 间隙连接通道属性 |
| 2.3.3 间隙连接通信行为 |
| 2.3.4 间隙连接通信与疾病 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 基于钙信号的间隙连接代谢耦联行为 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 钙信号传导模型 |
| 3.2.1 钙信号发送过程 |
| 3.2.2 钙信号传输过程 |
| 3.2.3 钙信号接收过程 |
| 3.3 间隙连接代谢耦联模型设计 |
| 3.4 仿真结果与分析 |
| 3.4.1 发送结果 |
| 3.4.2 传输结果 |
| 3.4.3 接收结果 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 间隙连接介导的过滤机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 过滤机制的生物过程与物理模型 |
| 4.3 过滤机制设计方案 |
| 4.4 仿真结果与分析 |
| 4.5 过滤机制的应用 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 基于动作电位的间隙连接电耦联行为 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 消极刺激下间隙连接电耦联模型 |
| 5.2.1 动作电位模型 |
| 5.2.2 消极刺激下间隙连接模型设计 |
| 5.2.3 信道容量模型 |
| 5.3 仿真结果与分析 |
| 5.4 实验验证 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（4）基于睾丸支持细胞研究4.1R蛋白在少精症小鼠模型中的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 研究背景 |
| 1 少精症与动物模型 |
| 2 少精症与精子发生 |
| 3 4.1R蛋白与精子发生 |
| 4 血睾屏障与精子发生 |
| 5 Wnt/β-catenin信号通路与精子发生 |
| 6 研究意义与内容 |
| 7 试验方案 |
| 第二章 4.1R蛋白在少精症小鼠模型中的表达与作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料、仪器与试剂 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 仪器 |
| 2.3 试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 少精症小鼠模型的建立 |
| 3.2 睾丸组织中4.1R蛋白表达水平检测 |
| 3.3 睾丸组织中epb41 基因转录水平检测 |
| 3.4 睾丸组织中4.1R蛋白表达分布检测 |
| 3.5 血睾屏障功能分析 |
| 3.6 统计方法 |
| 4 结果 |
| 4.1 少精症模型小鼠精子密度测定 |
| 4.2 少精症模型小鼠附睾和睾丸形态学检测 |
| 4.3 4.1R蛋白在小鼠睾丸组织中的表达 |
| 4.4 少精症小鼠睾丸中epb41 基因转录水平检测 |
| 4.5 少精症小鼠睾丸组织中4.1R蛋白表达分布 |
| 4.6 少精症模型小鼠血睾屏障功能分析 |
| 4.7 少精症模型小鼠睾丸中Wnt/β-catenin信号通路组分转录检测 |
| 4.8 少精症模型小鼠睾丸中Wnt/β-catenin信号通路组分蛋白表达 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第三章 4.1R蛋白表达对睾丸支持细胞增殖和连接的调节作用研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料、仪器与试剂 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 仪器 |
| 2.3 试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 Epb41 基因CRISPR-cas9 质粒载体构建与验证 |
| 3.2 CRISPR-Cas9 慢病毒载体构建 |
| 3.3 过表达慢病毒载体的构建 |
| 3.4 TM4 细胞培养 |
| 3.5 原代睾丸支持细胞培养 |
| 3.6 Lenti-Cas9-sgRNA-EGFP慢病毒载体转染TM4 细胞 |
| 3.7 Lenti-Cas9-sgRNA-EGFP慢病毒载体转染原代睾丸支持细胞 |
| 3.8 过表达慢病毒载体转染TM4 细胞 |
| 3.9 过表达慢病毒载体转染原代睾丸支持细胞 |
| 3.10 慢病毒载体转染后TM4 细胞增殖检测 |
| 4 结果 |
| 4.1 Epb41-sg RNAs与 pGL3-U6-sg RNA-puromycin和 pSpCas9(BB)-2A-GFP载体连接 |
| 4.2 pGL3-U6-epb41-sg RNAa-puromycin和 pSpCas9(BB)-epb41-sg RNAb-2A-GFP共转染N2a细胞 |
| 4.3 Lenti-Cas9-sgRNA-EGFP 慢病毒载体检测 |
| 4.4 过表达慢病毒载体的构建与验证 |
| 4.5 慢病毒载体转染TM4 细胞 |
| 4.6 慢病毒载体转染原代睾丸支持细胞 |
| 4.7 慢病毒载体转染后TM4 细胞增殖检测 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第四章 4.1R蛋白表达对体内睾丸支持细胞间连接的调节作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料、仪器与试剂 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 仪器 |
| 2.3 试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 质粒载体电转染小鼠活体睾丸组织 |
| 3.2 慢病毒载体睾丸活体转染 |
| 3.3 小鼠活体睾丸转染效果验证 |
| 4 结果 |
| 4.1 质粒载体活体电转染睾丸组织方法验证 |
| 4.2 重组CRISPR-Cas9 基因敲除质粒载体电转染睾丸 |
| 4.3 过表达慢病毒载体转染睾丸 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 1 总结 |
| 2 创新点 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果等 |
| 导师简介 |
| 附件 |
（5）GJB2突变相关的迟发性遗传性聋研究进展（论文提纲范文）
| 1 GJB2基因突变与迟发性聋 |
| 2 GJB2基因致迟发性聋的可能机制 |
| 2.1 Cx26表达缺陷可引起耳蜗主动放大功能障碍并进一步导致迟发性聋 |
| 2.2 GJB2基因突变可能通过改变氧化应激水平加速迟发性聋的进展 |
| 2.3 自噬在GJB2基因突变的迟发性聋中的作用 |
| 3 GJB2基因致迟发性聋的听力变化 |
| 4 GJB2基因相关的迟发性聋的动物模型 |
| 5 治疗与干预 |
| 6 总结与展望 |
（6）高原鼠兔PMVECs分离纯化及Cx40信号通路初探（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 高原鼠兔形态特征及其生境 |
| 1.2 高原鼠兔适应高原低氧环境的生理特征研究 |
| 1.3 高原鼠兔适应高原低氧环境的分子机制研究 |
| 1.4 高原鼠兔适应高原低氧环境的细胞学研究 |
| 1.5 Cx40 信号通路与肺动脉高压相关研究 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 第二章 高原鼠兔PMVECs分离培养 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 研究材料 |
| 2.2.2 仪器及试剂 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 原代培养 |
| 2.3.2 传代培养 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 组织块贴壁法 |
| 2.4.2 酶消化法 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 高原鼠兔PMVECs纯化与鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 研究材料 |
| 3.2.2 仪器及试剂 |
| 3.3 研究方法 |
| 3.3.1 高原鼠兔PMVECs纯化 |
| 3.3.2 高原鼠兔PMVECs鉴定 |
| 3.3.3 高原鼠兔PMVECs生长曲线测定 |
| 3.4 研究结果与分析 |
| 3.4.1 高原鼠兔PMVECs的纯化 |
| 3.4.1.1 差速贴壁法 |
| 3.4.1.2 磁珠分选法 |
| 3.4.2 高原鼠兔 PVMECs 鉴定 |
| 3.4.3 高原鼠兔PMVECs生长曲线测定 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 Cx40 信号通路的初探 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 研究材料 |
| 4.2.2 仪器及试剂 |
| 4.3 研究方法 |
| 4.3.1 高原鼠兔低氧处理 |
| 4.3.2 提取高原鼠兔肺组织RNA |
| 4.3.3 高原鼠兔肺组织RNA转录组测序 |
| 4.3.4 qRT-PCR测定Cx40 基因表达量 |
| 4.3.5 Cx40 信号通路初探 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 高原鼠兔肺组织RNA提取 |
| 4.4.2 高原鼠兔肺组织全长转录组测序结果 |
| 4.4.3 qRT-PCR测定Cx40 基因表达量 |
| 4.4.4 Cx40 信号通路初探 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 结论与展望 |
| 第六章 研究特色与创新之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）辣椒素对肥胖小鼠肠道菌群的影响及其降脂机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 肥胖的严峻现状 |
| 1.2 肠道菌群对肥胖的影响 |
| 1.3 短链脂肪酸对肥胖的影响 |
| 1.4 肠-脑轴对肥胖的影响 |
| 1.4.1 肠道内分泌细胞 |
| 1.4.2 神经体液回路 |
| 1.4.3 肠激素-CCK |
| 1.4.4肠激素-GLP-1 |
| 1.4.5 肠激素-PYY |
| 1.4.6 肠激素-OXM |
| 1.4.7 肠激素-血清素 |
| 1.4.8 肠激素-内源性大麻素 |
| 1.5 慢性低程度炎症对肥胖的影响 |
| 1.6 辣椒素 |
| 1.7 辣椒素降糖降脂的机理 |
| 1.7.1 与受体结合--TRPV1 |
| 1.7.2 调节褐色脂肪组织(BAT) |
| 1.7.3 调节白色脂肪组织(WAT) |
| 1.7.4 作用脂肪细胞因子 |
| 1.7.5 调节食欲 |
| 1.7.6 作用肌肉组织 |
| 1.7.7 改变肠道菌群 |
| 1.8 问题与展望 |
| 第2章 引言 |
| 2.1 研究目的与意义 |
| 2.2 研究的主要内容 |
| 2.3 试验设计路线 |
| 第3章 辣椒素通过影响肠道菌群结构及短链脂肪酸浓度降脂机制的研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 试验材料与设备 |
| 3.2.1 试验材料 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.2.3 主要试验设备 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 配制灌胃辣椒素溶液 |
| 3.3.2 试验动物饲养及分组 |
| 3.3.3 样本的收集 |
| 3.3.4 生化指标测定 |
| 3.3.5 葡萄糖耐量测定 |
| 3.3.6 16SrRNA基因测序分析肠道菌群 |
| 3.3.7 GC-MS定量分析小鼠粪便短链脂肪酸 |
| 3.3.8 数据分析处理 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 辣椒素对小鼠体重和采食量的影响 |
| 3.4.2 辣椒素对小鼠血液生化指标的影响 |
| 3.4.3 辣椒素对小鼠口服糖耐量的影响 |
| 3.4.4 辣椒素对小鼠肠道菌群的影响 |
| 3.4.5 辣椒素对小鼠肠道短链脂肪酸产生的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 辣椒素通过微生物-肠-脑轴降脂机制的研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 试验材料与设备 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 主要试剂 |
| 4.2.3 主要试验设备 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 配制灌胃辣椒素溶液 |
| 4.3.2 试验动物饲养及分组 |
| 4.3.3 样本的收集 |
| 4.3.4 生化指标测定 |
| 4.3.5 葡萄糖耐量测定 |
| 4.3.6 定量PCR方法测定肠道菌群变化 |
| 4.3.7 GC-MS定量分析小鼠粪便短链脂肪酸的变化 |
| 4.3.8 肠激素的检测 |
| 4.3.9 RNA提取和相对表达量分析 |
| 4.3.10 Western blotting检测 |
| 4.3.11 数据分析处理 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 辣椒素对肠道菌群的影响 |
| 4.4.2 辣椒素对小鼠体重和采食量的影响 |
| 4.4.3 辣椒素对小鼠血液生化指标的影响 |
| 4.4.4 辣椒素对小鼠口服糖耐量的影响 |
| 4.4.5 辣椒素对小鼠肠道短链脂肪酸产生的影响 |
| 4.4.6 辣椒素对小鼠肠激素分泌的影响 |
| 4.4.7 辣椒素对小鼠下丘脑神经元的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 辣椒素通过降低慢性低程度炎症反应降脂机制研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 试验材料与设备 |
| 5.2.1 试验材料 |
| 5.2.2 主要试剂 |
| 5.2.3 主要试验设备 |
| 5.3 试验方法 |
| 5.3.1 样本的收集 |
| 5.3.2 定量PCR方法测定变形菌门细菌变化 |
| 5.3.3 内毒素的检测 |
| 5.3.4 炎性因子的检测 |
| 5.3.5 组织病理学检测 |
| 5.3.6 RNA提取和相对表达量分析 |
| 5.3.7 Western blotting检测 |
| 5.3.8 数据分析处理 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 辣椒素对变形菌门细菌的影响 |
| 5.4.2 肠道中促炎因子脂多糖的浓度变化 |
| 5.4.3 辣椒素对LPS引起的局部炎症反应的影响 |
| 5.4.4 辣椒素对肠道屏障作用的影响 |
| 5.4.5 辣椒素对全身内毒素血症以及炎症反应的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 第6章 辣椒素对肠上皮细胞炎症反应和屏障功能的影响 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 试验材料与设备 |
| 6.2.1 试验材料 |
| 6.2.2 主要试剂 |
| 6.2.3 主要试验设备 |
| 6.3 试验方法 |
| 6.3.1 配制辣椒素溶液 |
| 6.3.2 Caco-2细胞的培养 |
| 6.3.3 Caco-2(TRPV1~(-/-))细胞株构建 |
| 6.3.4 辣椒素对Caco-2(TRPV1~(-/-))的细胞毒性 |
| 6.3.5 辣椒素对Caco-2(TRPV1~(-/-))跨膜蛋白和胞质蛋白的影响 |
| 6.3.6 炎性因子的检测 |
| 6.3.7 辣椒素对Caco-2(TRPV1~(-/-))细胞膜通透性的影响 |
| 6.3.8 RNA提取和相对表达量分析 |
| 6.3.9 Western blotting检测 |
| 6.3.10 数据分析处理 |
| 6.4 结果与分析 |
| 6.4.1 Caco-2(TRPV1~(-/-))稳定细胞株的构建 |
| 6.4.2 辣椒素对Caco-2(TRPV1~(-/-))的细胞毒性 |
| 6.4.3 辣椒素对LPS引起的炎症反应的影响 |
| 6.4.4 辣椒素对细胞屏障作用的影响 |
| 6.4.5 辣椒素对细胞膜通透性的影响 |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（8）鳜皮肤图案形成与Cx39.4、Cx41.8基因表达的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1.1 鱼类皮肤图案 |
| 1.1.1 皮肤图案的作用与意义 |
| 1.1.2 皮肤图案的形成机制 |
| 1.1.3 影响皮肤图案形成的因素 |
| 1.2 鱼类色素细胞 |
| 1.2.1 色素细胞种类和呈色方式 |
| 1.2.2 皮肤中色素细胞的分布与排列 |
| 1.3 间隙连接蛋白 |
| 1.3.1 间隙连接蛋白种类与结构 |
| 1.3.2 间隙连接 |
| 1.3.3 鱼类间隙连接蛋白 |
| 1.4 研究内容与意义 |
| 第二章 鳜早期色素细胞发育和色彩图案形成 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 鳜早期色素细胞发育与分布 |
| 2.2.2 鳜早期皮肤图案形成 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 鳜早期色素发育 |
| 2.3.2 鳜皮肤图案形成 |
| 2.3.3 皮肤图案的生物学意义 |
| 第三章 鳜皮肤图案中色素细胞的分布与排列 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 组织切片 |
| 3.1.3 透射电镜 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 鳜皮肤组织结构 |
| 3.2.2 鳜皮肤色素细胞种类、分布与排列 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 鳜色素细胞形态特征 |
| 3.3.2 鳜皮肤图案中色素细胞种类、分布与排列 |
| 3.3.3 鳜皮肤图案形成 |
| 第四章 鳜不同图案类型皮肤中Cx39.4与Cx41.8基因表达比较 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 组织切片 |
| 4.1.3 基因表达 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 鳜不同图案类型皮肤组织切片观察 |
| 4.2.2 鳜不同皮肤图案中Cx39.4、Cx41.8基因表达 |
| 4.3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表论文 |
| 致谢 |
（9）雷米普利对自发性高血压大鼠脑动脉Cx43表达影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词 |
| 前言 |
| 材料方法 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验试剂耗材 |
| 1.2 主要仪器及材料 |
| 1.3 试剂配制 |
| 1.4 实验动物 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验设计及分组 |
| 2.2 无创尾动脉压测量 |
| 2.3 压力肌动图技术 |
| 2.4 组织固定及处理 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 脑组织湿重检测 |
| 2.7 脑水肿程度检测 |
| 2.8 采用免疫荧光技术观察Cx43的表达及分布 |
| 2.9 免疫组化分析Cx43表达及分布 |
| 2.10 PCR分析Cx43m RNA变化 |
| 2.11 Western Blot检测Cx43、OPN、PCNA和 α-SMA蛋白表达。 |
| 2.12 统计学处理 |
| 实验结果 |
| 1.一般生理状况评估 |
| 2.SHR大鼠模型鉴定 |
| 3.HE染色及死亡率 |
| 4.通过干湿重测量法检测各组脑含水量 |
| 5.伊文染色技术比较各组脑部组织液外渗量 |
| 6.压力肌动图技术检测脑动脉收缩功能 |
| 7.免疫荧光技术分析Cx43分布及表达水平的变化 |
| 8.免疫组化技术分析Cx43分布及表达水平的变化 |
| 9. PCR、Western blot技术分析Cx43表达水平变化 |
| 10. Western blot技术分析PCNA、OPN、α-SMA的表达水平变化 |
| 讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师评阅表 |
（10）E-cadherin在急性噪声损伤中的分子机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 E-cadherin 条件转基因小鼠模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 高纯度内耳细胞显微分离技术的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 E-cadherin 在急性噪声损伤中的分子机制 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 本文创新性 |
| 综述 细胞连接蛋白在耳蜗中的分类和功能 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的文章 |
| 致谢 |
四、间隙连接功能多样性:连接蛋白基因敲除研究（论文参考文献）
- [1]巨噬细胞在晶状体损伤后修复中的作用机制研究[D]. 李玉婷. 兰州大学, 2021
- [2]丝氨酸蛋白酶HTRA/DEGQ在猪呼吸道病原菌突破呼吸道黏膜上皮屏障中的作用及机制研究[D]. 曹琪. 华中农业大学, 2021(02)
- [3]细胞间隙连接通道的传输行为研究[D]. 马迪. 长春理工大学, 2021(02)
- [4]基于睾丸支持细胞研究4.1R蛋白在少精症小鼠模型中的作用机制[D]. 李小英. 甘肃农业大学, 2021(01)
- [5]GJB2突变相关的迟发性遗传性聋研究进展[J]. 秦梦瑶,冯永,吴学文. 中华耳科学杂志, 2021(02)
- [6]高原鼠兔PMVECs分离纯化及Cx40信号通路初探[D]. 白祥慧. 青海师范大学, 2021
- [7]辣椒素对肥胖小鼠肠道菌群的影响及其降脂机制研究[D]. 王远微. 西南大学, 2020(01)
- [8]鳜皮肤图案形成与Cx39.4、Cx41.8基因表达的初步研究[D]. 刘伟. 上海海洋大学, 2020(03)
- [9]雷米普利对自发性高血压大鼠脑动脉Cx43表达影响的研究[D]. 田甜. 石河子大学, 2019(01)
- [10]E-cadherin在急性噪声损伤中的分子机制研究[D]. 王博. 中国人民解放军医学院, 2014(03)