一、人类干细胞研究展望（论文文献综述）
袁野[1]（2021）在《荧光聚合物点的细胞内吞定量及活体内细胞追踪研究》文中研究说明随着纳米药物的问世以及人们对各类细胞性能逐步清晰的认知,基于细胞的治疗与药物传递体系逐渐被开发利用,由于其生物相容性高、半衰期长、靶向效果明显、毒副作用低等良好的药代动力学特性被视为是实现未来医学突破的重要手段,在生物医学领域得到了广泛的关注。其中的一些细胞体系甚至已经在某些临床试验中取得了阶段性的成功,比如红细胞能够大幅度延长药物的循环寿命;淋巴细胞能够有效提高药物的靶向安全性;干细胞能够对受损组织进行再生修复等等。虽然这项技术有着美好的未来,但如何对被载药物进行实时地、精准地定量与调控,怎样能明确地获悉细胞在宿主体内完整的代谢过程都是阻碍其在临床上实现系统性应用的关键因素,这些问题都急需我们采用一些分子影像技术进行分析。生物荧光技术以其分辨率高、无电离辐射、操作简易、可多通路复用等优势在分子检测、细胞标记、活体成像等生物应用中优势明显,而这些性能的保证都紧紧依赖于荧光探针的选择和开发。在传统的荧光探针中,有机小分子染料吸收截面小、光稳定性差不利于长期监测,荧光蛋白又存在基因转染带来的潜在风险。而在新型的纳米荧光探针中,无机量子点的重金属毒性、上转换材料的低荧光量子效率以及碳点的弱组织穿透能力等问题都有待解决。聚合物点（Pdots）以其吸收截面大、荧光量子效率高、辐射跃迁速率快、稳定性高、生物相容性好以及表面易功能化等特性在生物传感、活体成像以及光治疗等方面应用广泛,是基于细胞的治疗与传递体系中完美的纳米药物及检测试剂。针对基于细胞的治疗与药物传递体系中被载药物的实时定量以及载体细胞在宿主体内的分布监测这两个问题,本文主要取得了如下研究成果:（1）对细胞内吞的聚合物点实现了荧光定量并将定量结果用于生物成像及光动力治疗应用。我们通过与电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）的量化结果进行对比,发现以荧光光谱、荧光显微镜以及流式细胞术中获取的荧光信号对细胞内的聚合物点进行定量也能得到相同的结果,即按照我们的标记手法,每个乳腺癌细胞（MCF-7）大致可以内吞1.3×106个直径约为20 nm的聚合物点,并通过亮度对比,我们可以清楚地获得任意特定细胞的内吞数量。另外,我们可以通过改变标记时间的长度对细胞内吞聚合物点的数量进行调控,并利用聚合物点的光动力特性,获取了在特定光能量密度下,光敏剂聚合物点PFBT@Pt对肿瘤细胞MCF-7的半抑制浓度(IC50)。（2）利用掺杂型近红外荧光聚合物点实现了对活体内细胞追踪的三维成像。我们通过将深红光激发聚合物和近红外荧光染料进行掺杂,利用二者之间的F（?）rster共振能量传递,制备出在670 nm处有强吸收、在775 nm处有强荧光,量子效率约为20%的适用于活体成像的近红外聚合物点NIR1,并通过细胞穿膜肽Tat的介导使聚合物点对细胞的标记效率提升了两个数量级。在后续的活体实验中,我们从二维成像和三维成像两种模式采集的图像中均观察到被移植细胞的荧光强度有明显地从肺部向肝部的迁移。（3）设计制备了混杂型近红外聚合物点并利用其观察干细胞与癌细胞在体内的分布差异。我们通过将深红光激发聚合物和近红外荧光聚合物进行掺杂,利用二者之间的F（?）rster共振能量传递,制备出在670 nm处有强吸收、在800 nm处有强荧光,量子效率约为22%的适用于活体成像的混杂型近红外聚合物点NIR2,较于聚合物点NIR1,聚合物点NIR2不仅光谱更红、量子效率更高,同时也避免了染料泄露和聚集的风险。在将细胞穿膜肽Tat介导标记的细胞尾静脉移植入小鼠体内后,我们明显观察到干细胞与癌细胞在活体内的分布差异,通过进一步内脏及冰冻切片的荧光检测,可以细致地分析出干细胞与癌细胞在活体内不同的代谢轨迹。
鲁倩云[2]（2021）在《MMTV-PyMT小鼠中静息细胞在放化疗抵抗中的功能及分子特征研究》文中进行了进一步梳理静息状态的肿瘤干细胞亚群对常规的肿瘤治疗手段具有抵抗性,是导致癌症无法被彻底根除的主要原因。它们可以在治疗停止之后的一段时间内仍然维持静息状态,然而一旦它们重新恢复细胞周期,就会引起癌症复发或者转移。在前期研究中,我们课题组探究了细胞静息状态的调控机制,发现SETD4通过催化H4K20三甲基化促进了异染色质的形成,从而调控卤虫的滞育胚胎以及两种人源乳腺癌细胞株的静息状态。然而,卤虫属于较为低等的节肢动物,细胞株又离开了体内内环境的调控作用,两者均不能反映癌症病人的病理状态。为了更好的模拟临床上乳腺癌病人病灶中的复杂情况,同时明确静息肿瘤干细胞的具体特征,本研究以乳腺癌自发模型MMTV-Py MT小鼠为实验材料,建立了静息肿瘤干细胞体外分离方法,并从体外成球、体内致瘤、放化疗抵抗性、染色质结构、转录组特征、细胞生物学变化等多角度探究了静息肿瘤干细胞的具体特征。在本研究中,我们发现体外成球培养条件下激活的静息肿瘤干细胞具有高成球率和强致瘤性。在分子指标上,静息肿瘤干细胞不表达Ki67但高量表达SETD4,并且乳腺癌中SETD4的高量表达是静息肿瘤干细胞特异性的。此外,静息肿瘤干细胞在体内和体外均具有化疗抵抗性,而SETD4过表达使得原代肿瘤细胞具有了同样的放化疗抵抗性。通过对染色质结构进行分析,我们发现,相较于激活后的肿瘤干细胞,静息肿瘤干细胞中H3K9ac的修饰程度降低、H4K20me3的修饰程度增高,并且在静息肿瘤干细胞中形成了高比例的异染色质。接下来,转录组测序分析的结果揭示了静息肿瘤干细胞处于有丝分裂周期阻滞、能量代谢水平低下、对放疗刺激的细胞应答水平降低的状态。随后的分析结果表明,静息肿瘤干细胞下调了细胞周期、细胞增殖过程,并且抑制了β-catenin依赖型Wnt信号通路。综上所述,本研究发现了SETD4可以标记乳腺癌中的静息肿瘤干细胞,弥补了此前无法标记静息肿瘤干细胞的问题。同时,本研究探究了静息肿瘤干细胞在放化疗抵抗中的功能及其具体特征,可以启发人们对静息肿瘤干细胞临床治疗靶点的进一步探索。
高玥[3]（2021）在《我国公民科学研究自由立法限制研究》文中指出科学研究作为一项基本权利,从属于个人创造性。但是,随着人类科学研究领域的日益拓展,科学技术已经深入许多触及维系人类的基本伦理领域,对人的尊严和生命价值提出了巨大挑战,如“黄金大米事件”、“基因编辑婴儿事件”等。科学研究对依靠自然力量生存繁衍的人类生命伦理提出了挑战,同时其也蕴涵着自我贬损和自我毁灭的危险,这就需要对科学研究自由进行立法限制。对科学研究自由进行限制的过程也是在对宪法价值或法益之间进行权衡的过程,这些宪法价值就是人的尊严、生命健康等和人的创造性。保障人的尊严和生命健康居于宪法诸项价值的核心,在价值取舍和评判过程中,以此对科学研究自由进行限制是具有正当性的。这就需要国家以法律形式对科研活动进行合理合度的限制。现阶段我国对于科学研究自由的立法规制在出现了几番严重冲击社会伦理和法律体系的科学研究活动后正逐步地进行完善,但仍面临着许多问题:在立法形式层面,科学研究相关领域的立法多以部门规章和技术规范的形式存在,法律规范分散且位阶低,缺乏系统性;在立法内容层面,法律责任体系不完善,行政监管主体职权交叉且缺乏有效的伦理审查。本文通过分析我国限制科学研究自由的立法现状和不足,借鉴科研发达国家的立法经验,采用规范分析和比较分析的研究方法对我国限制科学研究自由提出立法完善建议。立法完善建议包括强化对科学研究自由限制的立法专门化,制定《科学研究安全管理法》,从立法指导原则和核心内容进行具体设计。同时,要保持立法的谦抑性,在有效规制科学研究活动的同时为技术的发展留有空间。此外还要要发挥行业组织自律建设的功能。最后,针对科学研究自由这一基本权利的限制必然要进行合宪性论证,加强科学研究自由立法限制的合理性。人类已经破解了科学的密码,如何运用法律进行引导和规制是急需考虑的问题。
张飞[4]（2021）在《长白公猪性成熟前后睾丸组织环状RNA、信使RNA N6-腺苷甲基化修饰的发掘鉴定及差异表达分析》文中指出睾丸发育、精子生成过程涉及生殖细胞、间质细胞和支持细胞在内的多种细胞协同作用,该过程受到极其复杂和严格的分子时空调控,人们对其理解仍十分有限。环状RNA作为一类新的长链非编码RNA存在于人和牛等动物的睾丸及精清中,可能参与调控睾丸发育及精子发生过程。然而,公猪睾丸组织发育成熟过程中环状RNA的表达谱及其潜在生物学功能尚不清楚。N6-甲基腺苷（m6A）修饰是存在于RNA内部最常见的一类修饰,参与调控细胞分化、个体发育等多种生理病理进程,但关于m6A与睾丸发育、精子发生之间的关系目前仍知之甚少。因此,本文选取性成熟前后两个不同发育阶段的长白公猪睾丸组织,利用高通量测序技术和生物信息学等手段,揭示不同阶段睾丸中的环状RNA和m6A表达特征并比较分析其表达差异,预测和解析差异表达的环状RNA、m6A修饰在睾丸发育和精子发生事件中的潜在生物学功能,为增进了解环状RNA、m6A修饰参与公猪精子发生、睾丸发育调控等提供新的线索。本论文得到研究结果如下:本研究对未成年（30日龄,D30）和性成熟（210日龄,D210）长白公猪睾丸进行组织形态学观察。H&E染色结果显示,30日龄长白公猪睾丸曲细精管尚未发育完整,睾丸内未见明显管腔,处于性成熟前阶段;210日龄长白公猪睾丸体积显着增大,曲细精管发育完全,内含大量不同类型的生殖细胞并产生大量圆形精子及长形精子,已达到性成熟后阶段。使用去除核糖体RNA及线性RNA的总RNA-Seq来检测D30和D210长白公猪睾丸组织中环状RNA的表达谱。高通量测序显示睾丸组织中含有丰富的环状RNA,性成熟前后睾丸中分别鉴定出34521与31803个环状RNA。生物信息学分析发现这些环状RNA广泛分布于常染色体和性染色体上,长度主要位于100～10000 nt之间（58.97%）,主要来源于源头基因的外显子区域,大部分环状RNA由1-7个外显子形成（86.54%）,并且部分源头基因可以产生多个环状RNA。在公猪睾丸成熟过程中共发现来源于1526个源头基因的2326个差异表达的环状RNA,其中1003个D210公猪睾丸组织中上调,1323个下调。此外,差异表达的环状RNA源头基因GO功能分析显示这些环状RNA主要与精子发生、激素生物合成过程的正调控、生殖细胞发育、雄性减数分裂等生物过程有关。KEGG通路富集分析发现他们分别参与了干细胞多能性调节、紧密连接、粘附连接、cAMP等信号通路。因此,以上结果表明性成熟前后公猪睾丸表达大量的环状RNA,这些环状RNA呈现发育阶段特异性的动态表达模式,且主要与睾丸发育、精子发生等生物学过程密切相关。这些结果将有望为鉴定种公猪睾丸发育状态及筛选优秀种公猪提供一种潜在的分子标记物。同时为了研究睾丸发育成熟过程中m6A甲基化修饰的动态变化,本研究绘制了长白猪性成熟前后睾丸转录组范围信使RNA m6A甲基化图谱。本研究描述了m6A甲基化修饰在睾丸发育过程中的广泛分布模式,并分析了基因表达与m6A甲基化修饰的关系,同时广泛地鉴定了性成熟前后m6A甲基化修饰差异基因,这些基因可能与睾丸的生物学功能的密切相关。这些结果为确定睾丸中mRNA m6A甲基化的存在及其图谱提供了依据,并扩展了对m6A在哺乳动物器官发育和生长中作用的认识。
李文杰[5]（2021）在《鸡贫血病毒VP3基因对乳腺癌干细胞的作用研究》文中指出鸡贫血病毒VP3基因表达的凋亡蛋白Apoptin在正常细胞中无细胞毒性,而在肿瘤细胞中能够特异性诱导细胞发生凋亡。表达鸡贫血病毒VP3基因的重组腺病毒Ad-VT与Ad-VP3能够在多种肿瘤细胞中特异性表达Apoptin蛋白并诱导肿瘤细胞凋亡,且Ad-VT可以在肿瘤细胞中特异性复制起到溶瘤作用。癌症是人类死亡的主要原因之一。2020年乳腺癌超越肺癌成为发病率第一的癌症;并且女性中乳腺癌的死亡率居女性癌症死亡率首位。目前针对乳腺癌的治疗方法副作用大,对转移患者疗效欠佳,并且患者经治疗后仍有复发的风险。因此,仍然需要继续寻找更有效地治疗手段。在癌症内部有一部分细胞被称为癌症起始细胞或癌症干细胞,这部分细胞在癌症起始、治疗抵抗、转移和复发中起关键作用。这意味着,以乳腺癌干细胞为靶标可能是根除乳腺癌的有前途的治疗策略。迄今为止,还没有针对癌症干细胞的特定药物。因此,诱导癌症干细胞分化并靶向杀伤癌症干细胞可能有助于开发针对癌症的新的治疗策略,在治疗癌症时可能具有临床优势。本研究目的是富集分选表型为CD44+CD24-的乳腺癌干细胞,对其干细胞特性进行分析。利用本课题组前期构建的表达鸡贫血病毒VP3基因的重组腺病毒Ad-VT与Ad-VP3作用于乳腺癌干细胞,分析重组腺病毒对细胞的杀伤作用、干性抑制及增加乳腺癌干细胞药物敏感性的作用。通过靶向癌症干细胞,诱导其分化,抑制其治疗抗性寻找临床癌症治疗的新策略。首先是采用无血清悬浮培养与磁珠分选方法富集分选乳腺癌干细胞,对其自我更新、分化、耐药性等进行分析;其次是利用重组腺病毒作用于乳腺癌干细胞,对乳腺癌干细胞中干细胞比例、细胞增殖能力、细胞凋亡水平、细胞迁移侵袭能力等进行检测分析;之后检测重组腺病毒对乳腺癌干细胞的体内肿瘤形成能力的影响、体内肿瘤杀伤作用;最后利用Ad-VT与紫杉醇联合应用于乳腺癌干细胞后,检测乳腺癌干细胞中干细胞比例、细胞增殖能力、细胞凋亡水平、细胞迁移侵袭能力等,分析Ad-VT是否能够使乳腺癌干细胞对化疗药的敏感性增强,从而抑制癌症干细胞的治疗抗性。本研究主要取得如下结果:1.对乳腺癌干细胞的干性特征进行检测分析后发现,无血清培养条件下,乳腺癌干细胞能够形成乳腺癌细胞球;血清诱导实验显示乳腺癌干细胞能够分化增殖,自我更新能力强于乳腺癌细胞;干细胞调控因子表达上调,过表达与人类肿瘤干细胞相关的多个基因;对化疗药紫杉醇也具有一定的耐药性。2.通过检测重组腺病毒对乳腺癌干细胞的体外抑制作用后发现,Ad-VT与Ad-VP3作用下,CD44+CD24-细胞群比例降低,干细胞调控因子表达下调,乳腺癌干细胞干性受到抑制;Ad-VT与Ad-VP3能够抑制细胞增殖;对细胞线粒体膜电位及凋亡蛋白表达进行检测,结果显示Ad-VT与Ad-VP3能够诱导乳腺癌干细胞线粒体途径的凋亡;细胞迁移与侵袭实验结果也显示乳腺癌干细胞的迁移侵袭能力受到抑制。3.检测重组腺病毒对乳腺癌干细胞的小鼠体内抑制作用。小鼠体内成瘤结果显示Ad-VT与Ad-VP3作用后的乳腺癌干细胞干性受到抑制,失去了体内肿瘤形成的能力;将状态良好的乳腺癌干细胞进行小鼠皮下注射荷瘤,重组腺病毒对荷瘤成功的小鼠进行注射治疗,结果显示Ad-VT与Ad-VP3对乳腺癌干细胞小鼠荷瘤模型具有体内杀伤作用,能够抑制小鼠体内肿瘤生长。4.Ad-VT与紫杉醇联合作用能够抑制乳腺癌干细胞耐药性,Ad-VT与紫杉醇联合使用后对乳腺癌干细胞的干性抑制、诱导细胞凋亡水平、对细胞的增殖抑制、迁移侵袭抑制均显着强于Ad-VT单独治疗组及紫杉醇单独治疗组,并且联合应用增强了对乳腺癌干细胞的小鼠体内肿瘤形成能力的抑制。综上所述,经富集分选的乳腺癌干细胞具有自我更新、分化、治疗抗性等干细胞特性,表达VP3蛋白的重组腺病毒Ad-VT与Ad-VP3对乳腺癌干细胞具有一定的体内外抑制作用,能够抑制乳腺癌干细胞干性,Ad-VT能够增强乳腺癌干细胞对药物的敏感性,抑制乳腺癌干细胞的治疗抗性,增强化疗药紫杉醇抑制乳腺癌干细胞的作用。
韩笑[6]（2021）在《盐霉素对耐顺铂人胃癌细胞增敏作用及其机制研究》文中认为目的:2020年全球癌症数据显示,胃癌的发病率全球第五,死亡率居于全球第四,且面临严重的预后及耐药困扰。盐霉素（SAL）是一种广谱抗菌药物,亦具有抗肿瘤特性,特别是盐霉素与化疗或放疗联合使用的协同效应是一个值得探讨的问题。目前SAL如何影响耐顺铂胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡,以及如何逆转癌细胞放疗抵抗及多重耐药,其机制尚不清楚,盐霉素能否对耐顺铂胃癌细胞产生较好的增敏作用目前未见报道。基于此,本实验将盐霉素（SAL）和顺铂（DDP）作用于人胃粘膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞SGC-7901、耐顺铂胃癌细胞SGC-7901/DDP,确定盐霉素是否能在体外提高耐顺铂胃癌细胞SGC-7901/DDP对顺铂化疗的敏感性。同时初步探究盐霉素与顺铂联合作用的分子机制及盐霉素对耐顺铂胃癌细胞的增敏机制,从而为改善顺铂耐药和胃癌的治疗新方案的提出提供理论依据,为临床应用提供新的思路。方法:1.CCK-8法检测SAL对SGC-7901、SGC-7901/DDP细胞活力的影响,筛选SAL与DDP单药及联合应用的最佳浓度。2.CCK-8、Transwell及细胞划痕实验检测SAL与DDP单药及联合应用对SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞增殖、侵袭、迁移的影响,CCK-8法同时检测SAL对GES-1细胞增殖的影响。3.流式细胞术检测SAL与DDP单药及联合应用对SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞周期及凋亡的影响。4.免疫印迹实验及免疫组化实验检测SAL与DDP单药及联合应用对SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase 9、Fas-L、NF-κBp65表达的影响,探究SAL诱导凋亡的可能机制。5.免疫印迹实验检测SAL、SAL与Wnt-C59联合处理SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞后Wnt/β-catenin通路效应物p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin与靶基因Axin2和CCND1、EMT标记蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;免疫荧光检测SAL、SAL与Wnt-C59联合处理SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞后β-catenin的核定位;探究SAL作用于SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞的化疗增敏机制。结果:1.CCK-8法筛选出SAL-8μM与DDP-3μg/m L作用24 h为最佳作用浓度和时间。2.SAL-8μM作用于GES-1细胞24 h抑制率与对照组（0μM）比较差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组比较,SAL与DDP分别处理SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞24 h均能显着降低两种细胞的的增殖、侵袭和迁移能力,并显着增加细胞凋亡率（P<0.01）;其中在SGC-7901细胞中,与SAL组相比,DDP组、双药组均显着降低SGC-7901细胞的增殖能力（P<0.05）、侵袭能力（P<0.05）、迁移能力（P<0.05）并显着增加细胞凋亡率（P<0.05）;在SGC-7901/DDP细胞中,与DDP组相比,SAL组、双药联合组均显着降低SGC-7901/DDP的增殖能力（P<0.05）、侵袭能力（P<0.05）、迁移能力（P<0.05）并显着增加细胞凋亡率（P<0.05）。3.在SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞中,DDP处理组中G0/G1期细胞比例均显着高于对照组和SAL组（P<0.01）;同时,SAL处理组中S期细胞比例均显着高于对照组和DDP组（P<0.01）。4.与对照组比较,SAL和DDP分别处理24 h后,SGC-7901和SGC-7901/DDP两种细胞中Caspase 3、Caspase 9、Bax的表达量均显着上调（P<0.01）且Bcl-2的表达量均显着下调（P<0.01）;且与单药组相比,双药联合组表达量变化量更明显（P<0.01）;在SGC-7901/DDP细胞中,与DDP组相比,SAL组、双药联合组均显着升高Caspase 3、Caspase 9、Bax表达水平（P<0.01）。5.在SGC-7901细胞中,与对照组比较,SAL及DDP分别处理均增加了Fas-L、细胞质中NF-κBp65的表达,但是DDP组中Fas-L、细胞质中NF-κBp65的表达更明显,双药联合使用未见明显的协同作用;在SGC-7901/DDP细胞中,SAL及DDP分别处理均增加了Fas-L、细胞质中NF-κBp65的表达,双药联合使用表现出协同作用。6.在SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞中,与对照组比较,SAL处理组N-cadherin、Vimentin、p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin、Axin2、CCND1蛋白表达量均降低（P<0.01）,而E-cadherin的表达量增高（P<0.01）,β-catenin的核外移增多;与SAL组相比,SAL与Wnt-C59联合处理组两种胃癌细胞中N-cadherin和Vimentin、p-GSK-3β（Ser9）及β-catenin、Axin2和CCND1的表达量进一步下调（P<0.01）,E-cadherin的含量进一步上调（P<0.01）,β-catenin的细胞核外移进一步增多。7.与SGC-7901比较,SGC-7901/DDP耐药株SAL处理组、SAL与Wnt-C59联合处理组,N-cadherin、Vimentin、p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin、Axin2、CCND1表达的下调和E-cadherin的上调及β-catenin的核外移程度均增强。结论:1.SAL-8μM作用24 h对人胃粘膜上皮细胞GES-1细胞的无明显抑制作用,但可以抑制胃癌细胞SGC-7901及SGC-7901/DDP的增殖。2.SAL与DDP均能抑制SGC-7901及SGC-7901/DDP细胞的增殖、侵袭、迁移和诱导凋亡,SAL可调节并增强DDP对胃癌细胞SGC-7901及顺铂耐药细胞SGC-7901/DDP增殖、侵袭、迁移的抑制作用和诱导凋亡作用,两药联合具有协同作用;与SGC-7901不同,SAL、双药联合均比DDP对SGC-7901/DDP迁移抑制、诱导凋亡作用更强。3.DDP可致胃癌细胞SGC-7901、SGC-7901/DDP周期阻滞于G0/G1期,SAL可阻滞于S期,两药可分别作用于不同周期时间点发挥细胞阻滞作用。4.SAL与DDP通过Fas-L通路,上调凋亡相关因子Caspase 3、Caspase 9、Bax、Fas-L并下调Bcl-2的表达,同时抑制核内NF-κBp65的表达来调节胃癌细胞SGC-7901及SGC-7901/DDP凋亡,且仅在SGC-7901/DDP中,两药具有明显协同作用。5.SAL通过下调Wnt/β-catenin通路效应物p-GSK-3β（Ser9）、β-catenin及靶蛋白Axin2和CCND1等的表达抑制EMT进程,从而抑制肿瘤细胞的侵袭迁移,增加肿瘤细胞对DDP的敏感性,逆转耐药细胞耐药抵抗。
易春阳[7]（2021）在《新型GPR132激动剂的发现及其在急性髓系白血病治疗中的应用》文中进行了进一步梳理急性髓系白血病（AML）是一种血液肿瘤疾病,其侵袭性和异质性相当高。目前的分化诱导治疗仅在小部分AML患者中取得成功,AML患者的五年生存率仍不足30%。新分化机制的探索和新靶向药物的开发依然是AML治疗的迫切需求。G蛋白偶联受体（GPCR）在多种生理和病理过程中发挥关键作用,是最重要的药物靶标家族之一。在本研究中,我们聚焦于孤儿GPCR在AML细胞分化调控中的影响,以期为AML的治疗研究提供新的作用机制,新靶点和新药物。基于癌症基因组学的研究发现,孤儿GPCR在AML中广泛表达,而且参与调控AML发展进程。其中,孤儿GPR132特异性表达于髓系细胞,其高表达与AML的良好预后相关,提示GPR132是AML的潜在治疗靶标。进一步的生物实验表明,激活GPR132在体内和体外均能显着促进AML细胞分化,抑制肿瘤细胞生长,提示GPR132是一个新的AML细胞分化调节蛋白。为进一步探究GPR132信号通路在AML治疗中的作用,通过Tango、Nano Bit等多种基于GPCR激活原理的筛选体系,我们鉴定出一种新型高效GPR132激动剂—8-姜酚。该化合物是传统药用植物生姜中的重要生物活性成分,其EC50为0.30μM。通过流式分析、NBT还原反应、瑞氏-吉姆萨染色等检测方法,我们进一步发现,使用8-姜酚激活GPR132可明显上调AML细胞CD11b表达、提升AML细胞能量代谢水平、促进AML细胞形态成熟,诱导AML细胞分化,并减弱AML细胞的克隆形成能力。值得注意的是,该促分化作用不受遗传背景限制,对多种含不同遗传突变的AML细胞系均有效。深入的机制研究表明,8-姜酚在AML细胞中通过激活GPR132-Gs-PKA通路遏制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,进而发挥分化诱导作用。8-姜酚与mTOR抑制剂联合使用在体外能协同诱导AML细胞分化。更为重要的是,通过皮下荷瘤和尾静脉注射AML小鼠模型,我们确认了8-姜酚单独或联合mTOR抑制剂可显着抑制HL60移植瘤小鼠的肿瘤生长、延缓AML疾病发展、提升AML小鼠的生存期,并增强分化标志物的表达。综上所述,本研究发现了一个新的AML分化诱导受体GPR132,并通过GPR132相关功能实验鉴定出一个新的高效GPR132激动剂8-姜酚,同时探究了8-姜酚通过GPR132-Gs-PKA-mTOR信号轴调控AML细胞分化这一新机制,确认了8-姜酚单独或联合mTOR抑制剂对AML模型小鼠的治疗效果。我们的研究表明,开发孤儿受体GPR132激动剂是一个很有潜力AML分化诱导治疗新策略。
高枫林[8]（2021）在《基于生物信息学方法对体细胞诱导多能干细胞的转录调控分析》文中研究指明传统上干细胞主要以胚胎干细胞（ES）作为医学上干细胞的来源。然而,ES使用中除了可能因生物体不同产生的免疫排斥反应外,还存在伦理方面等问题。因此,另一种与ES特征相似的诱导多能干细胞（i PSc）应运而生。i PSc是向已分化的体细胞导入特定的转录因子（TF）使其转变为具有多能性的细胞。尽管目前i PSc的研究已经取得进展,但人们对i PSc的诱导机制仍需要近一步探索。本文对血液、皮肤和尿液三种体细胞重编程在i PSc过程中发生变化显着的过程进行研究,以对i PSc产生机制进行探究,并对参与调控重编程过程的TF与mi RNA进行预测,为进一步开发出更安全高效的重编程系统提供线索。本文采用生物信息学方法对上述三种体细胞及来自这三种体细胞的i PSc的RNA-Seq数据进行分析,通过上游分析得到基因表达矩阵。然后将三种不同来源的i PSc分为三组:Bi vs B（血细胞来源）、Fi vs F（皮肤成纤维来源）和Ui vs U（尿液细胞来源）,再分别对三组细胞的重编程过程进行差异基因的初步筛选,并用筛选出的候选差异基因构建蛋白质互作网络。基于蛋白质互作网络中候选差异基因相互作用的程度筛选出差异基因。接着,基于分子生物学中TF、m RNA和mi RNA三者之间的调控关系,通过生物信息学数据库,分别预测三种体细胞重编程过程相关的mi RNA及TF,并用三种体细胞相关的差异基因,对预测的mi RNA和TF的可靠性作分析和讨论。最后,本文共筛选到51个与i PSc诱导相关的差异基因,预测到5个与i PSc诱导相关的mi RNA和41个与i PSc诱导相关的TF。其中,has-let-7c-5p和has-let-7a-5p是已经被前人研究所证明过的与i PSc相关的mi RNA,POU5F1、NANOG、SOX2以及MYC是已经被研究所证明过与i PSc相关的4个转录因子。并对三种体细胞重编程过程中差异基因富集的生物过程与通路进行比较,以及这三种体细胞重编程的特异性和共性进行分析与比较。此外发现LIN28A与OPRM1两种蛋白及SPP1与CDH1两种蛋白的抑制剂分别可能会对i PSc的成功诱导起到促进作用,其中LIN28A是已经被前人验证过的蛋白质。本文工作对揭示i PSc的转换机制具有参考价值,并为开发更安全高效的i PSc诱导系统提供了新的线索。
相立峰[9]（2020）在《人胚胎原肠前动态发育研究》文中研究指明伴随工业水平的进步和生活水平的提高,不良的生活环境、不健康的饮食习惯和日益增加的生存压力等导致育龄夫妇的精子与卵子质量急速下降,不孕不育已成为威胁生殖健康的一个重要问题。当胚胎发育至第7天,人胚胎需植入母体的子宫中才能继续存活和发育。这个阶段胚胎在子宫体内发生的变化以及导致这些变化的关键细胞和分子事件,由于材料的无法获得以及缺乏相应技术导致这些问题仍处在黑匣子状态。胚胎植入失败以及在此阶段的发育异常是导致早期流产的主要原因。因此,对人胚胎原肠前发育过程的研究将为我们理解生命起源、探索早期胚胎发育动态变化过程和分子调控机制提供重要的理论依据。2016年的两篇报道在小鼠胚胎体外培养的基础上,建立了着床后人胚胎体外2D培养体系,该体系能够将胚胎在体外培养至13天,并观察到一些谱系分离的现象。然而2D条件下胚胎存在一些重要缺陷,如2D培养的胚胎是扁平的,缺乏体内3D的拓扑结构;虽然2D培养胚胎的滋养外胚层12天后仍在继续存活,但整个胚胎结构发生了坍塌和出现了发育的紊乱,导致很多细胞类型（羊膜上皮）、腔（羊膜腔、卵黄囊）和结构（基底膜、前后轴、原条）无法在2D培养的胚胎中清楚地观测到。因此,这些缺陷限制了2D体系很难真正模拟体内胚胎的发育,无法揭示胚胎在该阶段的发育事件和机制。为了克服以上这些缺陷,我们开展了本论文的研究。我们在获得严格的伦理允许和病人知情同意的条件下,利用临床上捐献的胚胎,通过改善培养基和培养方法,开发了一个三维（3D）人囊胚培养体系,并采用该体系首次将人囊胚在3D条件下培养到原条原基阶段。这些3D胚胎能高度地模拟体内胚胎的发育,经历不同形态的发育并自发组装成2D条件下无法产生的3D结构,包括胚胎双层胚盘、羊膜（amnion）、基底膜（basal membrane）、初级和灵长类独特的次级卵黄囊、前后轴和原条前体。利用这个体系,我们揭示了人原肠前胚胎的关键发育事件:（1）通过单细胞转录表达谱的分析,揭示了上胚层细胞、下胚层细胞和滋养层细胞谱系分化和发育的动态和分子调控网络。（2）羊膜上皮细胞（AME）是上胚层细胞分离出来的第一类细胞系,不同于啮齿类动物,人AME发生于原条形成之前,但其特性和分子机制不清楚。我们发现:与上胚层细胞相比,AME显着地下调多能性基因,其形成与基底膜的缺失显着相关,并有独特的分子表达谱。（3）首次阐明细胞滋养层（cytotrophoblast）、绒毛外细胞滋养层（extravillous cytotrophoblast）和合胞体滋养细胞（syncytiotrophoblast）在胚胎着床后的分化以及引起分化的信号和转录因子,揭示了绒毛外细胞滋养层在早期胚胎中不同于中、后期胎盘的功能。（4）揭示了上胚层细胞（PSCs,多能干细胞）着床后将很快从naive到primed状态的转变。PSCs从着床至第14天期间保持相对的稳定状态,而其发育和转化是由不同的多能因子协调作用所决定的。（5）通过人和非人灵长类胚胎的转录组分析,发现非人灵长类和人上胚层细胞在代谢上具有明显差异,而在维持干细胞多能性以及发育的关键分子和信号通路上具有保守性。本论文利用独创的人胚胎体外3D培养体系详细阐述了胚胎在发育过程中谱系的分离、羊膜腔的形成、羊膜上皮的分离、卵黄囊的形成、胚胎极性的产生和原条的形成等发育学事件。本论文回答了EPI多能性的维持和转化、羊膜上皮的形成机制、滋养层分化发育的机制等科学问题。本研究成果为胚胎的早期发育和干细胞的相关研究提供了新的模型,为组织再生和器官再生提供了研究的理论基础,为研究胚胎因素的着床失败和早期流产提供了理论支持,为不孕症治疗和辅助生殖技术中现存问题的解决提供了研究思路和研究方向。
卢琴[10]（2020）在《孤雌生殖人类胚胎干细胞技术的专利适格性研究》文中认为传统人类胚胎干细胞（HESC）技术不可避免需要破坏人胚胎才能获取HESC。随着干细胞技术的发展,开始出现回避伦理争议的新技术。其中,孤雌生殖HESC技术通过孤雌激活人卵母细胞,无需精子参与就能形成孤雌囊胚,从中获取HESC。大多数国家认为该技术回避了传统技术破坏胚胎的伦理争议,并且具有重大的医学价值。随着科学和伦理的发展变化,2019年11月我国新修正的《专利审查指南》放宽了HESC技术的专利审查标准,但仅仅规定了“利用未经体内发育的受精14天以内的人胚胎”获取HESC的相关发明不违背社会公德,可以授予专利。却未提及孤雌生殖HESC技术在我国能否具备专利适格性的问题。因此,本文将对该新技术的专利适格性问题进行研究。首先,介绍孤雌生殖HESC技术相比其他技术的优势。分析2016年我国知识产权局判定孤雌囊胚属于人胚胎,孤雌生殖HESC技术违背社会公德,因而不具备专利适格性而引发的争议案例。指出2019年《专利审查指南》修正后依然未能解决争议问题。其次,通过分析传统HESC技术与孤雌生殖HESC技术专利适格性审查中具有代表性的司法案例,梳理新旧技术发展的脉络,考察干细胞技术发达的美、欧、中、澳等国家对新旧两类技术的专利适格性认定,同时从传统技术的专利审查中获取对新技术有益的借鉴经验。再次,从我国利益平衡、伦理道德、干细胞产业政策导向和产业发展需要等方面出发,为论证我国应当授予孤雌生殖HESC技术专利权保护的正当性和必要性提供依据。最后,得出孤雌生殖HESC技术在我国具备专利适格性的结论。我国对该新技术的专利审查经验尚不成熟。笔者结合我国的实际情况,以前文作为基础和铺垫,为我国《专利审查指南》提供相应的完善建议。
二、人类干细胞研究展望（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人类干细胞研究展望（论文提纲范文）
（1）荧光聚合物点的细胞内吞定量及活体内细胞追踪研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 荧光探针 |
| 1.2.1 有机小分子染料 |
| 1.2.2 荧光蛋白 |
| 1.2.3 荧光纳米粒子 |
| 1.3 聚合物点 |
| 1.3.1 共轭聚合物 |
| 1.3.2 共轭聚合物的发光机理 |
| 1.3.3 聚合物点的制备方法 |
| 1.3.4 聚合物点的特性表征 |
| 1.3.5 聚合物点的表面功能化 |
| 1.3.6 荧光聚合物点的生物应用 |
| 1.4 论文选题意义及主要内容 |
| 第2章 细胞内吞聚合物点的荧光定量及其生物应用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验试剂及仪器 |
| 2.2.2 聚合物点的制备及纯化 |
| 2.2.3 聚合物点的荧光稳定性与生物相容性测试 |
| 2.2.4 聚合物点的细胞穿膜肽修饰及其细胞标记 |
| 2.2.5 细胞内吞聚合物点的荧光光谱定量 |
| 2.2.6 细胞内吞聚合物点的电感耦合等离子体质谱定量 |
| 2.2.7 细胞内吞聚合物点的共聚焦显微镜定量和流式细胞术定量 |
| 2.2.8 聚合物点光敏剂对肿瘤细胞半抑制浓度的测定 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 聚合物点PFBT与 PFBT@Pt的制备与表征 |
| 2.3.2 细胞内吞聚合物点的荧光光谱定量和电感耦合等离子体质谱定量 |
| 2.3.3 细胞内吞聚合物点的共聚焦显微镜定量与流式细胞术定量 |
| 2.3.4 聚合物点PFBT@Pt对于肿瘤细胞MCF-7 的半抑制浓度测定 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 掺杂型近红外荧光聚合物点应用于活体内细胞追踪三维成像 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂及仪器 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 聚合物点的制备及纯化 |
| 3.2.4 聚合物点生物相容性测试 |
| 3.2.5 聚合物点的细胞穿膜肽修饰及其细胞标记 |
| 3.2.6 细胞体内追踪 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 聚合物点的制备与表征 |
| 3.3.2 细胞穿膜肽介导的聚合物点高效标记 |
| 3.3.3 细胞体内追踪 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 混杂型近红外荧光聚合物点的制备及其活体内多种细胞的追踪应用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验试剂及仪器 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 聚合物点的制备及纯化 |
| 4.2.4 聚合物点生物相容性测试及对肿瘤细胞的标记 |
| 4.2.5 人类脐带间充质干细胞的提取 |
| 4.2.6 聚合物点生物相容性测试及对干细胞的标记 |
| 4.2.7 肿瘤细胞与干细胞体内动态追踪 |
| 4.2.8 组织学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 深红光激发、近红外发射聚合物点的制备与表征 |
| 4.3.2 聚合物点的细胞标记与生物相容性测试 |
| 4.3.3 体内肿瘤细胞与干细胞的动态追踪 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（2）MMTV-PyMT小鼠中静息细胞在放化疗抵抗中的功能及分子特征研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词和术语表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 乳腺癌的特征及研究模型概述 |
| 1.1.2 肿瘤干细胞的理论及其静息状态概述 |
| 1.1.3 染色质结构及SETD4 研究现况概述 |
| 1.2 研究目的及意义 |
| 第二章 MMTV-PyMT小鼠中静息肿瘤干细胞的分离与鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要抗体 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 MMTV-PyMT小鼠中原代肿瘤细胞的体外分离 |
| 2.3.2 静息肿瘤干细胞的分离与激活 |
| 2.3.3 体外肿瘤球形成试验 |
| 2.3.4 小鼠体内原位移植瘤形成试验 |
| 2.3.5 小鼠乳腺癌组织取样及冰冻切片制备 |
| 2.3.6 免疫荧光分析(细胞样品) |
| 2.3.7 免疫荧光分析(组织样品) |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 静息肿瘤干细胞的体外分离方法建立 |
| 2.4.2 静息肿瘤干细胞在体外成球、在体内致瘤的能力检测 |
| 2.4.3 静息肿瘤干细胞的分子指标检测 |
| 2.4.4 SETD4在MMTV-PyMT小鼠乳腺癌病灶中的表达情况 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 SETD4 在静息肿瘤干细胞放化疗抵抗中的功能分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 主要抗体 |
| 3.2.3 主要仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 MMTV-PyMT小鼠的繁殖及饲养 |
| 3.3.2 MMTV-PyMT子代小鼠的基因型鉴定 |
| 3.3.3 MMTV-PyMT雌性小鼠的化疗 |
| 3.3.4 原代肿瘤细胞中过表达SETD4 |
| 3.3.5 免疫荧光分析 |
| 3.3.6 台盼蓝染色细胞存活率检测 |
| 3.3.7 Western blot分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 静息肿瘤干细胞在小鼠体内具有化疗抵抗性 |
| 3.4.2 静息状态促进肿瘤干细胞在体外的放化疗抵抗性 |
| 3.4.3 SETD4 过表达抑制细胞增殖并增强其放化疗抵抗性 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 静息肿瘤干细胞的染色质结构分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 主要试剂 |
| 4.2.2 主要抗体 |
| 4.2.3 主要仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 Western blot分析 |
| 4.3.2 免疫荧光分析 |
| 4.3.3 透射电镜分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 静息肿瘤干细胞降低H3K9ac修饰水平、增加H4K20me3 修饰水平 |
| 4.4.2 静息肿瘤干细胞的异染色质比例增加 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 静息肿瘤干细胞的转录特征分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 主要试剂 |
| 5.2.2 主要抗体 |
| 5.2.3 主要仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 转录组测序分析 |
| 5.3.2 Western blot分析 |
| 5.3.3 免疫荧光分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 静息肿瘤干细胞的转录组文库构建 |
| 5.4.2 差异表达基因GO富集分析 |
| 5.4.3 静息肿瘤干细胞的GSEA分析 |
| 5.4.4 β-catenin依赖型Wnt信号通路在静息肿瘤干细胞中被抑制 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 Tg(MMTV-PyVT)634Mul基因型鉴定实验方案 |
| 附录二 腺病毒载体图谱 |
| 附录三 常用试剂配方Ⅰ |
| 附录四 常用试剂配方Ⅱ |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（3）我国公民科学研究自由立法限制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 绪论 |
| (一)研究背景及研究意义 |
| (二)国内外研究现状 |
| (三)研究方法与创新之处 |
| 一、科学研究自由的宪法解读 |
| (一)宪法基本权利:科学研究自由 |
| 1.科学研究自由与学术自由 |
| 2.科学研究自由的理论模型 |
| (二)科学研究自由的限制 |
| 1.科学研究自由限制的内涵 |
| 2.科学研究自由立法限制的分类 |
| 二、科学研究自由立法限制的正当性证成 |
| (一)科学研究自由立法限制的宪法基础 |
| (二)科学研究自由的内在限制:基本权利冲突的调和 |
| 1.科学研究自由与维护人格尊严 |
| 2.科学研究自由与相关基本权利的冲突 |
| (三)科学研究自由的外在限制:公共利益 |
| 三、我国科学研究自由立法限制的现状与不足及域外经验 |
| (一)我国科学研究自由限制的立法现状 |
| (二)我国科学研究自由立法限制存在的不足 |
| 1.案例引入:“基因编辑婴儿”事件 |
| 2.科学研究自由立法限制形式层面之不足 |
| 3.科学研究自由立法限制内容层面之缺失 |
| (三)域外科学研究自由限制的经验 |
| 1.国际组织对科学研究自由的法律限制 |
| 2.科研发达国家对科学研究自由的立法限制 |
| 四、我国科学研究自由立法限制的完善 |
| (一)限制科学研究自由的立法应遵循的基本原则 |
| 1.逻辑起点:维护人的尊严原则 |
| 2.形式标准:法律保留原则 |
| 3.实质标准:比例原则 |
| (二)科学研究自由立法限制的具体设计 |
| 1.科学研究自由立法限制的完善路径 |
| 2.立法仍需保持谦抑性 |
| 3.发挥行业组织自律建设功能 |
| (三)科学研究自由立法限制的合宪性审查基准 |
| 1.科学研究自由立法限制合宪性分析的逻辑基础 |
| 2.科学研究自由立法限制合宪审查的基准 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）长白公猪性成熟前后睾丸组织环状RNA、信使RNA N6-腺苷甲基化修饰的发掘鉴定及差异表达分析（论文提纲范文）
| 本项研究受下列基金资助 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写与符号清单 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 猪睾丸发育过程及其表观遗传调控 |
| 1.1.1 公猪的性成熟 |
| 1.1.2 猪睾丸发育过程 |
| 1.1.3 间质细胞在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.1.4 睾丸发育与精子发生的表观遗传调控 |
| 1.2 环状RNA在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.2.1 环状RNA的生物起源、特性及功能 |
| 1.2.2 环状RNA的数据发掘、分析及研究方法 |
| 1.2.3 环状RNA在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.2.4 结论和展望 |
| 1.3 m6A修饰在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.3.1 m6A修饰概述 |
| 1.3.2 m6A修饰的检测 |
| 1.3.3 m6A修饰的生物学功能 |
| 1.3.4 哺乳动物精子发生过程中m6A修饰的动态调节 |
| 1.3.5 结论与展望 |
| 第二章 性成熟前后长白种公猪睾丸组织学观察与分析 |
| 引言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 睾丸大小 |
| 2.2.2 性成熟前后长白种公猪睾丸组织学特征 |
| 2.2.3 睾丸组织显微观察结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 石蜡切片及H&E染色 |
| 2.3.2 性成熟前后长白种公猪睾丸发育情况 |
| 2.3.3 性成熟前后长白种公猪睾丸组织结构观察 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 性成熟前后公猪睾丸文库构建及环状RNA的鉴定与基本特征 |
| 引言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 睾丸组织样本RNA提取及质检结果 |
| 3.2.2 RNA文库构建及高通量测序数据质量分析 |
| 3.2.3 环状RNA的鉴定 |
| 3.2.4 性成熟前后长白种公猪睾丸组织中环状RNA的基本特征 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 性成熟前后长白种公猪睾丸环状RNA的差异表达及生物信息学分析 |
| 引言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 性成熟前后公猪睾丸组织中显着差异表达环状RNA的鉴定与分析 |
| 4.2.2 性成熟前后公猪睾丸组织环状RNA测序结果的试验验证 |
| 4.2.3 差异环状RNA的GO分析 |
| 4.2.4 差异环状RNA的 KEGG信号通路富集分析 |
| 4.2.5 环状RNA靶miRNA预测 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 性成熟前后长白种公猪睾丸转录组信使RNA甲基化图谱的建立 |
| 引言 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 数据质控与序列统计 |
| 5.2.2 参考基因组比对 |
| 5.2.3 全基因组m6A Peak扫描分析 |
| 5.2.4 差异Peak分析 |
| 5.2.5 m6A Motif分析 |
| 5.2.6 RNA-seq基因/转录本差异结果分析 |
| 5.2.7 RNA-seq中差异基因GO富集分析 |
| 5.2.8 RNA-seq中差异基因KEGG富集分析 |
| 5.2.9 MeRIP-seq中差异m6A Peak GO富集分析 |
| 5.2.10 MeRIP-seq中差异m6A Peak KEGG富集分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（5）鸡贫血病毒VP3基因对乳腺癌干细胞的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 凋亡素 |
| 1.2 溶瘤腺病毒与肿瘤治疗 |
| 1.3 癌症干细胞研究进展 |
| 1.3.1 癌症干细胞的概念 |
| 1.3.2 CSCs的鉴定 |
| 1.3.3 CSCs的特征 |
| 1.3.4 CSCs转录因子的标志 |
| 1.3.5 CSCs与癌症转移 |
| 1.3.6 CSC与临床治疗 |
| 1.3.7 CSCs与细胞凋亡 |
| 第二章 乳腺癌干细胞干性特征分析 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞 |
| 2.1.2 试剂和材料 |
| 2.1.3 仪器和设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 乳腺癌干细胞MCF7-CSC分选培养与传代 |
| 2.2.2 MCF7-CSC血清诱导分化 |
| 2.2.3 细胞克隆形成能力 |
| 2.2.4 Western Blot检测MCF7-CSC干细胞调控因子表达水平 |
| 2.2.5 PCR Array检测人类肿瘤干细胞相关干性基因表达 |
| 2.2.6 MCF7-CSC的耐药性检测 |
| 2.2.7 数据处理 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 MCF7-CSC分选培养 |
| 2.3.2 MCF7-CSC血清诱导分化能力 |
| 2.3.3 MCF7-CSC细胞克隆形成能力 |
| 2.3.4 MCF7-CSC干细胞调控因子表达 |
| 2.3.5 MCF7-CSC人类肿瘤干细胞相关干性基因表达 |
| 2.3.6 MCF7-CSC的耐药性检测 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 重组腺病毒对MCF7-CSC的抑制作用 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 细胞、毒株 |
| 3.1.2 试剂和材料 |
| 3.1.3 仪器和设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 重组腺病毒制备、纯化与毒价测定 |
| 3.2.2 重组腺病毒对MCF7-CSC干性抑制 |
| 3.2.3 重组腺病毒对MCF7-CSC的增殖抑制 |
| 3.2.4 重组腺病毒对MCF7-CSC的凋亡诱导作用 |
| 3.2.5 重组腺病毒对MCF7-CSC迁移侵袭能力的抑制 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 重组腺病毒对MCF7-CSC的干性抑制 |
| 3.3.2 CFSE检测重组腺病毒对MCF7-CSC的增殖抑制 |
| 3.3.3 重组腺病毒对MCF7-CSC的凋亡诱导作用 |
| 3.3.4 重组腺病毒对MCF7-CSC迁移侵袭能力的抑制 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 重组腺病毒对MCF7-CSC的小鼠体内抑制 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 毒株和动物 |
| 4.1.2 试剂和材料 |
| 4.1.3 仪器和设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 重组腺病毒对MCF 7-CSC小鼠体内成瘤能力的抑制 |
| 4.2.2 重组腺病毒对MCF 7-CSC小鼠体内肿瘤杀伤作用 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 MCF 7-CSC小鼠体内成瘤能力的检测 |
| 4.3.2 重组腺病毒对MCF 7-CSC的小鼠体内杀伤作用 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 Ad-VT与 MCF7-CSC药物敏感性 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 毒株和动物 |
| 5.1.2 试剂和材料 |
| 5.1.3 仪器和设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 Ad-VT与紫杉醇对MCF7-CSC的干性抑制 |
| 5.2.2 Ad-VT与紫杉醇对MCF7-CSC的增殖抑制 |
| 5.2.3 Ad-VT与紫杉醇对MCF7-CSC的凋亡诱导 |
| 5.2.4 Ad-VT与紫杉醇对MCF7-CSC的迁移侵袭能力抑制 |
| 5.2.5 Ad-VT与紫杉醇对MCF7-CSC的小鼠体内肿瘤形成能力抑制 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 Ad-VT促进紫杉醇对MCF7-CSC的干性抑制 |
| 5.3.2 Ad-VT促进紫杉醇对MCF7-CSC的增殖抑制 |
| 5.3.3 Ad-VT促进紫杉醇对MCF7-CSC的凋亡诱导 |
| 5.3.4 Ad-VT促进紫杉醇对MCF7-CSC的迁移侵袭能力抑制 |
| 5.3.5 Ad-VT促进紫杉醇对MCF7-CSC的小鼠体内成瘤能力抑制 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 6.3 主要创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（6）盐霉素对耐顺铂人胃癌细胞增敏作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文对照缩略表 |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 药品及试剂 |
| 1.2 主要溶液的配制 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 细胞来源 |
| 2.方法 |
| 2.1 SGC-7901、GES-1 细胞培养 |
| 2.2 人胃癌顺铂耐药株SGC-7901/DDP细胞培养 |
| 2.3 细胞的冻存 |
| 2.4 CCK-8 实验 |
| 2.5 细胞周期实验 |
| 2.6 细胞凋亡实验 |
| 2.7 细胞侵袭实验 |
| 2.8 细胞划痕实验 |
| 2.9 蛋白免疫印迹实验 |
| 2.10 免疫组化实验 |
| 2.11 免疫荧光实验 |
| 2.12 统计分析 |
| 第二章 实验结果 |
| 1.SGC-7901/DDP耐药株的耐药鉴定 |
| 2.CCK-8 法进行SAL作用浓度及时间点筛选 |
| 3.SAL及 DDP对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响 |
| 4.流式细胞术检测SAL及 DDP对胃癌细胞凋亡的影响 |
| 5.流式细胞术检测SAL及 DDP对胃癌细胞周期的影响 |
| 6.SAL及 DDP诱导胃癌细胞凋亡的机制研究 |
| 7. SAL 对胃癌细胞 Wnt/ β-catenin 通路效应物及 EMT 标记物表达的影响 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 总结与展望 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3 后续研究工作及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 盐霉素的生物作用综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间科研成果 |
（7）新型GPR132激动剂的发现及其在急性髓系白血病治疗中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1 白血病的研究进展 |
| 1.1 造血作用 |
| 1.2 白血病的发生 |
| 1.3 致病因素及症状 |
| 1.4 白血病的发生率和死亡率 |
| 1.5 白血病的分类 |
| 1.6 白血病的治疗 |
| 2 急性髓系白血病 |
| 2.1 AML的发生率和死亡率 |
| 2.2 AML的分类 |
| 2.3 AML中的突变基因 |
| 2.4 AML治疗药物 |
| 2.5 AML研究的发展方向 |
| 3 G蛋白偶联受体 |
| 3.1 GPCR的结构和分类 |
| 3.2 GPCR信号 |
| 3.3 GPCR信号的终止 |
| 3.4 GPCR功能与药物靶点开发 |
| 4 孤儿GPCR与药物开发 |
| 5 GPCR在 AML中的研究进展 |
| 5.1 GPCR与血细胞 |
| 5.2 GPCR与 AML |
| 6 研究目的及意义 |
| 第二章 实验材料和实验方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞及细胞培养 |
| 1.2 实验动物及动物饲养 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 质粒信息 |
| 1.5 实验耗材 |
| 1.6 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞复苏、培养和冻存 |
| 2.2 数据库数据分析 |
| 2.3 质粒构建 |
| 2.4 质粒转化及抽提 |
| 2.5 贴壁细胞质粒转染 |
| 2.6 病毒悬液制备 |
| 2.7 构建悬浮细胞稳转细胞系 |
| 2.8 蛋白免疫印迹分析 |
| 2.9 流式细胞仪分析 |
| 2.10 瑞氏-吉姆萨染色法 |
| 2.11 NBT还原法 |
| 2.12 克隆形成实验 |
| 2.13 MTS增殖检测法 |
| 2.14 联药指数和Bliss协同分数计算 |
| 2.15 Tango配体激动活性检测方法 |
| 2.16 Nano Bit配体激动活性检测方法 |
| 2.17 受体内化检测 |
| 2.18 Glosensor配体激动活性检测方法 |
| 2.19 CRE报告基因检测 |
| 2.20 配体受体结合位点分析 |
| 2.21 Q-PCR分析 |
| 2.22 小鼠皮下荷瘤模型 |
| 2.23 小鼠尾静脉注射模型 |
| 第三章 研究结果 |
| 1 GPR132 是潜在的AML治疗靶点 |
| 1.1 孤儿GPCR与 AML预后相关性分析 |
| 1.2 GPR132 适合作为AML治疗靶点 |
| 1.3 小结 |
| 2 GPR132 能诱导AML细胞分化 |
| 2.1 GPR132 参与髓系细胞分化调控 |
| 2.2 GPR132 在体外可促进AML细胞分化 |
| 2.3 GPR132 在体内可促进AML细胞分化 |
| 2.4 小结 |
| 3 8-姜酚是新型GPR132 的激动剂 |
| 3.1 基于Tango体系的GPR132 激动性配体筛选 |
| 3.2 Nano Bit体系中8-姜酚活性验证 |
| 3.3 受体内化检测法验证8-姜酚活性 |
| 3.4 Glosensor检测法验证8-姜酚活性 |
| 3.5 CRE报告基因检测法验证8-姜酚活性 |
| 3.6 8-姜酚与GR132 的结合位点预测 |
| 3.7 8-姜酚结构类似物活性检测 |
| 3.8 小结 |
| 4 8-姜酚通过激活GPR132 促进AML细胞分化 |
| 4.1 8-姜酚在体外可诱导AML细胞分化 |
| 4.2 GPR132 敲除可限制8-姜酚的分化诱导作用 |
| 4.3 GPR132 过表达可增强8-姜酚的分化诱导作用 |
| 4.4 小结 |
| 5 8-姜酚通过激活GPR132-PKA通路抑制mTORC1 信号 |
| 5.1 8-姜酚可在AML细胞中引起PKA激活和mTORC1 信号抑制 |
| 5.2 8-姜酚通过GPR132 激活PKA并抑制mTORC1 信号 |
| 5.3 8-姜酚通过激活GPR132-PKA抑制mTORC1 信号 |
| 5.4 8-姜酚通过GPR132-PKA-mTORC1 信号轴影响AML细胞分化 |
| 5.5 小结 |
| 6 8-姜酚与mTOR抑制剂依维莫司协同抑制AML |
| 6.1 8-姜酚与依维莫司联合可增强分化诱导效果 |
| 6.2 8-姜酚与依维莫司在体外具协同作用 |
| 6.3 8-姜酚与传统化疗药联合可增强AML抑制效果 |
| 6.4 小结 |
| 7 8-姜酚与依维莫司联合诱导治疗AML |
| 7.1 8-姜酚在体内促进AML细胞分化 |
| 7.2 8-姜酚与依维莫司联合抑制皮下移植瘤AML模型小鼠的疾病发展 |
| 7.3 8-姜酚与依维莫司联合抑制系统性AML模型小鼠疾病发展 |
| 7.4 小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 1 研究总结 |
| 2 研究创新性 |
| 2.1 发现新的AML治疗靶点 |
| 2.2 发现新的GPR132 激动剂 |
| 2.3 发现8-姜酚的抗AML功能 |
| 2.4 发现诱导AML细胞分化的新机制 |
| 3 研究展望 |
| 3.1 评估靶点安全性 |
| 3.2 检测AML细胞中GPR132 的激活 |
| 3.3 应用更多临床前AML疾病模型 |
| 3.4 探究其他可能作用机制 |
| 参考文献 |
| 附录1:孤儿GPCR列表 |
| 附录2:孤儿GPCR风险比率 |
| 附录3:缩略词表 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）基于生物信息学方法对体细胞诱导多能干细胞的转录调控分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究意义 |
| 1.2 研究背景 |
| 1.2.1 体细胞重编程研究背景 |
| 1.2.2 诱导多能干细胞的研究进展 |
| 1.2.3 诱导多能干细胞的应用 |
| 1.2.4 诱导多能干细胞存在的问题 |
| 1.3 本文的章节安排与创新点 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 数据 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 RNA-Seq数据的比对与定量 |
| 2.2.2 差异分析 |
| 2.2.3 蛋白质互作网络的构建及分析 |
| 2.2.4 功能富集分析与通路富集分析 |
| 2.2.5 microRNA与转录因子的预测 |
| 2.3 本章小结 |
| 第三章 血液细胞重编程为诱导多能干细胞的分析结果 |
| 3.1 筛选的差异基因 |
| 3.2 构建的血液体细胞重编程过程蛋白质互作网络及其分析 |
| 3.3 富集分析结果 |
| 3.3.1 上调差异基因的富集分析结果 |
| 3.3.2 下调差异基因的富集分析 |
| 3.4 血液细胞细胞重编程过程相关microRNA与转录因子预测结果 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 皮肤成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞的分析结果 |
| 4.1 筛选的差异基因 |
| 4.2 构建的皮肤成纤维体细胞重编程过程PPI网络及其分析 |
| 4.3 富集分析 |
| 4.3.1 上调差异基因的富集分析结果 |
| 4.3.2 下调差异基因的富集分析结果 |
| 4.4 皮肤成纤维细胞重编程过程相关microRNA与转录因子预测结果 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 尿液细胞重编程为诱导多能干细胞的分析结果 |
| 5.1 筛选的差异基因 |
| 5.2 构建的尿液细胞体细胞重编程过程PPI网络及其分析 |
| 5.3 富集分析结果 |
| 5.3.1 上调差异基因的富集分析结果 |
| 5.3.2 下调差异基因的富集分析结果 |
| 5.4 尿液细胞重编程过程相关microRNA与转录因子预测结果 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 三种体细胞重编程过程比较与分析 |
| 6.1 三种体细胞重编程过程在功能与通路上的变化比较 |
| 6.2 三种体细胞重编程过程中相关基因,microRNA和转录因子的比较 |
| 6.3 基于三种体细胞重编程过程的分析 |
| 6.3.1 基于三种体细胞重编程过程中相同基因的分析 |
| 6.3.2 基于三种体细胞重编程过程中的特异性分析 |
| 6.3.3 基于三种体细胞重编程过程中相同转录因子的分析 |
| 6.3.4 三种体细胞重编程过程中相同的microRNA分析 |
| 6.4 本章小结 |
| 第七章 总结与展望 |
| 7.1 总结 |
| 7.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 |
（9）人胚胎原肠前动态发育研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 环境因素与生殖健康 |
| 1.1.1 环境污染与生殖健康 |
| 1.1.2 生活方式与配子发生 |
| 1.1.3 胚胎体外培养环境压力与表观遗传改变 |
| 1.2 早期胚胎发育概述 |
| 1.2.1 早期胚胎发育 |
| 1.2.2 多能干细胞与胚胎发育 |
| 1.3 着床前胚胎发育 |
| 1.3.1 辅助生殖技术现状 |
| 1.3.2 着床前胚胎发育过程 |
| 1.3.3 着床前胚胎基因调控 |
| 1.4 着床后胚胎发育 |
| 1.4.1 胚胎2D体外培养体系的建立 |
| 1.4.2 着床后胚胎发育过程 |
| 1.4.3 着床后胚胎发育转录因子调控 |
| 1.4.4 人类胚胎干细胞模型 |
| 1.5 信号通路在胚胎发育及干细胞中的研究 |
| 1.5.1 Wnt信号通路与胚胎发育 |
| 1.5.2 TGF-β/Activin/Nodal信号通路对胚胎发育的作用 |
| 1.6 论文的立题依据及主要研究内容 |
| 第二章 实验材料及方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 材料来源 |
| 2.1.2 主要试剂及配制方法 |
| 2.1.3 使用抗体 |
| 2.1.4 仪器设备 |
| 2.1.5 耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 胚胎样品的准备 |
| 2.2.2 胚胎体外培养 |
| 2.2.3 Matrigel浓度的选择 |
| 2.2.4 全胚染色 |
| 2.2.5 胚胎冰冻切片及切片染色 |
| 2.2.6 共聚焦显微镜拍照 |
| 2.2.7 单细胞消化分离 |
| 2.2.8 细胞测序过程 |
| 2.2.9 测序结果分析 |
| 第三章 人胚胎原肠前动态发育研究实验结果 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 人胚胎体外3D培养体系的建立 |
| 3.2.1 人胚胎体外培养体系探索 |
| 3.2.2 着床后胚胎发育过程是谱系动态变化的过程 |
| 3.3 EPI动态发育研究 |
| 3.3.1 EPI发育过程是naive向 primed转变的过程 |
| 3.3.2 EPI发育阶段互相联系又各自表达不同基因 |
| 3.3.3 人类与非人灵长类EPI发育既有差异又有保守性 |
| 3.4 着床后胚胎关键结构的形成 |
| 3.4.1 羊膜上皮是从EPI中迁移出来的一群独特的细胞 |
| 3.4.2 胚胎前后轴及原条前体的形成 |
| 3.5 滋养层细胞发育是分化发育的过程 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 人胚胎体外培养体系的突破 |
| 4.2 本研究填补了着床后人胚胎发育分子机制的空白 |
| 4.3 胚胎发育过程是多能性细胞从naive到 primed态转变过程 |
| 4.4 人类胚胎与其他物种胚胎发育的差异 |
| 4.5 人胚胎发育过程中特殊结构的形成 |
| 4.6 滋养层细胞发育分化 |
| 4.7 小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 论文的创新性 |
| 5.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 A 攻读博士期间取得的科研成果及奖励 |
| 附录 B 医学伦理证明 |
（10）孤雌生殖人类胚胎干细胞技术的专利适格性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 选题背景及意义 |
| 第二节 文献综述 |
| 一、国内研究现状 |
| 二、国外研究现状 |
| 第三节 研究内容及研究方法 |
| 一、研究内容 |
| 二、研究方法 |
| 第四节 创新点 |
| 第二章 我国孤雌生殖HESC技术的专利审查及现存问题 |
| 第一节 孤雌生殖HESC技术与传统技术的比较 |
| 一、孤雌生殖HESC技术的相关概念 |
| 二、HESC的获取来源 |
| 三、孤雌生殖HESC技术的优势 |
| 四、孤雌生殖HESC技术在我国的专利授权情况 |
| 第二节 《专利审查指南》修改前对孤雌生殖HESC技术的专利适格性认定 |
| 一、湖南光琇公司孤雌生殖HESC技术的专利复审案 |
| 二、专利适格性判断的法律依据 |
| 第三节 《专利审查指南》修改后依然存在的问题 |
| 一、新修正条款 |
| 二、最大的亮点 |
| 三、现存的问题 |
| 本章小结 |
| 第三章 传统与孤雌生殖HESC技术的专利适格性争议 |
| 第一节 干细胞领域专利适格性的判断模式 |
| 一、欧洲模式 |
| 二、美国模式 |
| 第二节 传统HESC技术的专利适格性争议 |
| 一、传统HESC技术的伦理争议 |
| 二、WARF案发明在美、欧、中的专利适格性认定 |
| 三、城户常雄案发明在美、欧、中的专利适格性认定 |
| 第三节 孤雌生殖HESC技术的专利适格性争议 |
| 一、孤雌生殖HESC技术的伦理争议 |
| 二、欧洲认定孤雌生殖HESC技术具有专利适格性 |
| 三、澳大利亚认定孤雌生殖HESC技术具有专利适格性 |
| 四、孤雌生殖HESC技术在其他国家的专利授权情况 |
| 本章小结 |
| 第四章 我国授予孤雌生殖HESC技术专利权保护的正当性与必要性 |
| 第一节 授予专利权保护的正当性 |
| 一、符合利益平衡要求 |
| 二、符合中国伦理指南的指导原则 |
| 三、符合不断变化的社会公德内涵 |
| 第二节 授予专利权保护的必要性 |
| 一、干细胞产业的政策导向 |
| 二、干细胞产业发展的需要 |
| 本章小结 |
| 第五章 对我国孤雌生殖HESC技术专利审查制度的完善建议 |
| 第一节 孤雌生殖HESC技术在我国具有专利适格性 |
| 一、不属于科学发现 |
| 二、不属于疾病的诊断和治疗方法 |
| 三、HESC及其制备方法不属于不可专利的主题 |
| 四、不属于人胚胎的工商业目的的运用 |
| 第二节 对《专利审查指南》的完善建议 |
| 一、在专利审查中将14天研究期限适用于孤雌囊胚 |
| 二、允许以现存孤雌干细胞系进行研究的成果可专利 |
| 三、对具体条款的修改建议 |
| 本章小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
四、人类干细胞研究展望（论文参考文献）
- [1]荧光聚合物点的细胞内吞定量及活体内细胞追踪研究[D]. 袁野. 吉林大学, 2021(01)
- [2]MMTV-PyMT小鼠中静息细胞在放化疗抵抗中的功能及分子特征研究[D]. 鲁倩云. 浙江大学, 2021(01)
- [3]我国公民科学研究自由立法限制研究[D]. 高玥. 内蒙古大学, 2021(12)
- [4]长白公猪性成熟前后睾丸组织环状RNA、信使RNA N6-腺苷甲基化修饰的发掘鉴定及差异表达分析[D]. 张飞. 安徽农业大学, 2021
- [5]鸡贫血病毒VP3基因对乳腺癌干细胞的作用研究[D]. 李文杰. 广西大学, 2021(01)
- [6]盐霉素对耐顺铂人胃癌细胞增敏作用及其机制研究[D]. 韩笑. 延安大学, 2021(09)
- [7]新型GPR132激动剂的发现及其在急性髓系白血病治疗中的应用[D]. 易春阳. 华东师范大学, 2021(12)
- [8]基于生物信息学方法对体细胞诱导多能干细胞的转录调控分析[D]. 高枫林. 电子科技大学, 2021(01)
- [9]人胚胎原肠前动态发育研究[D]. 相立峰. 昆明理工大学, 2020(04)
- [10]孤雌生殖人类胚胎干细胞技术的专利适格性研究[D]. 卢琴. 华南理工大学, 2020(07)