一、光度法测蒙药铜灰清除超氧负离子自由基机理的探讨（论文文献综述）
董重阳[1]（2019）在《蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin通路防治绝经后骨质疏松症的实验研究》文中指出目的:证实蒙药蓝刺头抗氧化应激防治绝经后骨质疏松症的作用;阐明其调控FoxO/Wnt/β-catenin信号通路介导成骨细胞分化与骨形成的机理;明确蒙药蓝刺头抗氧化应激相关调控机制及效应靶点。为蒙医药基于“补暖补精-清镇赫依-固骨质壮骨”的经典理论、通过抗氧化应激防治绝经后骨质疏松提供实验依据,丰富蒙医药基础理论现代化的内涵。方法:分组:6月龄SD系SPF级健康雌性未孕大鼠84只（体重250±20g）,随机数字表法分为7组:假手术组（Sham）、去卵巢骨质疏松模型组（OVX）、蒙药蓝刺头高剂量组（Echinops-H）、中剂量组（Echinops-M）、低剂量组（Echinops-L）,中药对照组淫羊藿组（HEP）、西药对照组辅酶Q10组（Co-Q10）。造模:采用双侧卵巢切除法（去势）制备绝经后骨质疏松模型[1],阴道上皮角化实验、骨密度检测、子宫病理学检查验证造模成功。给药:术后90d,除模型组和假手术组给予生理盐水灌胃外,其余各组按照方案给予相应药物干预。标本采集:末次灌胃后,腹主动脉穿刺采血离心血清;处死剔除双侧完整股骨、胫骨,右侧股骨、胫骨4%多聚甲醛溶液固定,左侧股骨、胫骨-196℃液氮贮存罐保存。指标检测:ELISA法测定血清标骨钙素、护骨素等骨代谢相关指标及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原型谷胱甘肽的等氧化应激指标。采用RT-PCR测定调节目标基因表达的核内受体转录因子:过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ、成骨细胞分化转录因子蛋白、破骨细胞抑制因子护骨素的基因表达。左侧股骨采用Western blot法检测骨组织中p-p66（S36）、p66、β-catenin、Wnt2、FoxO3a蛋白表达。右侧股骨采用骨密度仪测定离体骨骨密度,Micro-CT进行骨微结构的形态计量学测定。结果:1.大鼠骨密度、骨形态学计量测定结果:与Sham组比较,OVX组大鼠股骨近端BMD和股骨总BMD均明显降低（P<0.05）;骨微结构的形态计量学表达上,OVX组骨微结构骨小梁立体网状结构异常,骨体积分数（BV/TV）、结构模型指数（SMI）、骨小梁体积（TBV,trabecular volume）、骨小梁宽度（Tb.W,trabecular width）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.th）均明显降低（P<0.05）,骨小梁间距（Tb.Sp）增大（P<0.05）。与OVX组比较,蒙药蓝刺头高、中、低剂量组、中药对照组淫羊藿组、西药对照组辅酶Q10组、假手术组的BMD及骨微结构、骨形态计量学明显改善。2.大鼠骨组织学计量测定结果（HE染色）:骨组织学检测结果示:与假手术组比较,模型组大鼠可见脂肪细胞密度与脂肪细胞直径显着增高,具有统计学意义（P<0.05）;与假手术组比较,蒙药蓝刺头高、低剂量组脂肪细胞密度与脂肪细胞直径增高,有统计学差异（P<0.05）;与模型组比较,蒙药蓝刺头中剂量组、淫羊蕾组脂肪细胞密度与脂肪细胞直径有统计学差异（P<0.05）,提示其对抗骨质破坏效果显着。3.血清骨代谢指标变化:与假手术组（Sham）相比较,模型组（OVX）大鼠血清护骨素（OPG）含量明显降低,且骨钙素（BGP）的含量明显升高（P<0.05）,有统计学意义。与OVX组比较,蒙药蓝刺头高（Echinops-H）、中（Echinops-M）、低剂量组（Echinops-H）、中药对照组淫羊藿组（HEP）、西药对照组辅酶Q10组（Co-Q10）、Sham组的血清护骨素（OPG）含量明显降低,且骨钙素（BGP）的含量明显升高（P<0.05）,有统计学意义。4.血清中氧化应激相关指标变化:与Sham组比较,OVX组大鼠血清抗氧化应激相关指标含量均明显降低（P<0.05）,有统计学意义。与OVX组比较,蒙药蓝刺头各剂量组、中药西药对照组、假手术组抗氧化应激指标均明显增高（P<0.05）,有统计学意义。5.Western blot法检测骨组织中相关蛋白的表达:与Sham组相比较,OVX大鼠β-catenin、Wnt蛋白的表达均明显降低（P<0.05）,FoxO3a表达明显升高（P<0.05）,有统计学意义。与OVX组比较,Echinops-H、Echinops-M、Echinops-L、HEP、Co-Q10 组、Sham 组β-catenin、Wnt2 蛋白的含量均明显增高（P<0.05）,FoxO3a蛋白的含量明显减低（P<0.05）,有统计学意义。6.RT-PCR测定调节目标基因表达的相关因子表达:与Sham组相比较,OVX组大鼠Runx2、OPG的表达均明显降低（P<0.05）,有统计学意义;OVX 组 PPAR-γ明显升高（P<0.05）。与 OVX 组比较,Echinops-H、Echinops-M、Echinops-L、HEP、Co-Q10 组、Sham 组βRunx2、OPG 的表达均明显增高,PPAR-γ明显降低（P<0.05）,有统计学意义。结论:实验结果显示:蒙药蓝刺头对绝经后骨质疏松症模型大鼠具有显着的抗骨质疏松症作用;蒙药蓝刺头能够显着改善绝经后骨质疏松症模型大鼠的氧化应激状态;蒙药蓝刺头可以交叉调控FoxO/Wnt/β-catenin通路,抑制氧化应激中FoxO的转录,上调Wnt的表达,促进模型大鼠骨组织成骨分化、骨形成;蒙药蓝刺头可以降低骨质疏松症模型大鼠骨代谢高转换相关指标,抑制骨吸收。本研究表明:蒙医药防治绝经后骨质疏松“补暖补精-固骨质壮骨”的生物效应可能通过促进骨组织成骨分化、骨形成的机制实现;蒙医药“清镇赫依-固骨质壮骨”的生物效应可能通过抗氧化应激机制实现。本研究丰富了蒙医“补暖补精-清镇赫依-固骨质壮骨”理论的科学内涵,从现代生物学角度揭示了此理论与治法的效应途径。
赵映兰[2]（2016）在《西青果抗炎活性成分的分离鉴定及体内外抗炎作用研究》文中认为研究背景及目的:西青果为诃子属植物诃子Terminalia chebula Retz未木质化的幼果经水烫、晒干后的干燥幼果,具有清热生津,解毒的作用,临床上用于阴虚白喉。目前,对西青果的化学成分及相应生物学效应研究较少,但对其成熟果实诃子的研究较多,研究文献显示诃子果实所含化学成分主要为酚酸类化学成分,这类成分具有抗氧化、抗菌、抗炎等多种生物活性。有文献研究证实,诃子含水乙醇提取物能对抗巨噬细胞源性促炎症细胞因子的表达,具有抗炎活性。体外细胞试验文献也证实,诃子中主要化学成分之一诃黎勒酸具有同时抑制炎症发生过程中的两种关键性酶:5-脂氧合酶（5-LOX）和2-环氧合酶（COX-2）活性的能力,可起到减轻炎症反应的作用。目前,虽然无文献对西青果抗炎活性进行研究,但按照中国药典的规定,西青果所含水溶性浸出物比其成熟果实诃子高出50%,提示西青果中类似化学成分可能亦具一定抗炎活性,值得进一步探讨。为此,我们进行了本项研究。本文探讨了西青果抗炎活性成分的提取、分离和鉴定,并在细胞水平和整体动物水平对其主要成分柯子宁（Chebulanin）的抗炎作用进行研究,为阐明西青果药效物质及作用机理奠定了基础。实验方法及实验结果:第一部分西青果抗炎活性成分的分离及结构鉴定实验方法1.西青果总酚酸类化合物的提取西青果药材粗粉经70%丙酮浸渍提取3次;提取液减压浓缩（控制温度不高于50℃）至无丙酮味。浓缩液适量,先用苯萃取3次,下层药液用乙酸乙酯多次萃取,合并乙酸乙酯,减压浓缩（控制温度不高于50℃）,得黄褐色固体。2.西青果总酚酸类成分的HPLC检测色谱柱为Ultimate LP-C18（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为甲醇（流动相A）和0.6%磷酸（流动相B）,在流速1.2m L/min,检测波长278nm,柱温40℃的条件下进行梯度洗脱。3.西青果酚酸类化合物的分离取西青果总酚酸类粗提物60g,用蒸馏水溶解,固液分离,溶液缓慢加入处理好的大孔吸附树脂柱,控制流速约15ml/min;剩余固体物继续用蒸馏水溶解,固液分离,溶液上样于大孔吸附树脂柱。多次操作,至固体物基本不能溶解在水中,水溶出液全部上样于大孔吸附树脂柱。依次用0%-90%甲醇洗脱,每250m L流出液收集一瓶,与1%酸性Fe Cl3溶液颜色反应,初步判断是否含有酚酸类物质。为了进一步确定成份,将流出液减压浓缩（控制温度不高于50℃）至固体,甲醇溶解后用HPLC检测。根据流出液中酚酸类物质的种类,将种类一致的洗脱液合并,减压浓缩（控制温度不高于50℃）至固体,用50m L甲醇溶解后,置于阴凉处自然析晶。根据HPLC色谱图判断是否需要重结晶。有结晶物析出的层析流出物部分,滤取结晶物,真空干燥器中干燥,备用。4.单体化合物的结构鉴定根据对单体化合物的初步判断,采用熔点测定、UV、IR、MS和NMR等方法,与已知对照品对照,最终完成单体化合物的鉴定。实验结果1.总酚酸类提取物色谱图在西青果总酚酸类提取物色谱图中,用对照品进行对照,确定了部分色谱峰的归属,依次为没食子酸（tR7.45min）、柯里拉京（tR20.59min）、柯子宁（tR21.53min）、诃黎勒酸（tR29.76min）、诃子酸（tR37.25min）。2.大孔吸附树脂柱分离结果西青果总酚酸类提取物经大孔吸附树脂柱分离,合并洗脱液,得到了化合物Ⅰ（白色针状结晶）、化合物Ⅱ（白色粉末状固体）、化合物Ⅲ（类白色无定形粉末）和化合物Ⅳ（白色片状结晶）。3.单体化合物的结构鉴定结果分离得到的四种化合物单体成分,根据HPLC、UV、IR、MS和NMR技术的检测结果,结合对照品色谱及化合物光谱文献数据,确定了单体结构,分别为:没食子酸、柯子宁、诃黎勒酸和诃子酸。第二部分西青果提取物柯子宁抑制LPS对单核/巨噬细胞炎症信号通路及细胞因子的作用研究实验方法1.不同浓度柯子宁对RAW264.7细胞生长的影响配制系列浓度的柯子宁溶液（1000μM,500μM,200μM,100μM,50μM,10μM,1μM）以及阳性对照药地塞米松溶液（10μM,5μM,1μM,0.5μM,0.1μM,0.01μM,0.001μM）。细胞培养24小时后,换成以上含药物培养基于37℃,5%CO2培养箱继续培养24小时。按照CCK8说明书测定450nm处的吸光度,计算抑制率。阴性对照组为PBS,每个浓度设置3个复孔。抑制率（%）=（1-T/C）x 100%,其中T表示实验孔的吸光度,C表示对照孔的吸光度。2.Real-time PCR法测定柯子宁对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子m RNA水平的影响5x105个RAW264.7细胞接种于12孔板,过夜培养12小时后,每孔加入不同浓度的柯子宁（终浓度分别为100μM,50μM,10μM）,0.5μM的地塞米松作为阳性对照,PBS作为阴性对照,于37℃,5%CO2培养箱中孵育2小时。以100ng/m L的LPS刺激细胞20小时后,收集细胞提取m RNA,行RT-PCR检测细胞炎症因子TNF-α、COX-2的m RNA表达情况。每个样本均设三个复孔。3.ELISA法测定柯子宁对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子分泌的影响0.5x105个RAW264.7细胞接种于24孔板,过夜培养12小时后,每孔加入不同浓度的柯子宁（终浓度分别为100μM,50μM,10μM）,0.5μM的地塞米松作为阳性对照,PBS作为阴性对照,于37℃,5%CO2培养箱中孵育2小时。以100ng/m L的LPS刺激细胞24小时后,收集上清液,行ELISA检测细胞炎症因子TNF-α、IL-6的表达情况。每个样本均设三个复孔。4.Western Blot法检测柯子宁对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB信号通路磷酸化水平的影响2x105个RAW264.7细胞接种于6孔板,过夜培养12小时后,每孔加入不同浓度的柯子宁（终浓度分别为100μM、50μM、10μM）,PBS作为阴性对照。37℃,5%CO2培养箱中孵育1小时后,以100ng/m L的LPS刺激细胞3小时。收集细胞提取总蛋白,行western blot检测磷酸化NF-KB p65蛋白的表达情况。每个样本均设三个复孔。实验结果1.柯子宁对RAW264.7细胞体外增殖的影响柯子宁在100μM以下,地塞米松在0.5μM以下时,抑制率小于10%,在显微镜下观察细胞形态没有明显变化,与空白对照组相比无显着性差异（p<0.05）。因此,最后确定柯子宁使用100μM,地塞米松使用0.5μM,作为后续实验的最大药物浓度。2.柯子宁对RAW264.7细胞炎症因子m RNA表达水平的影响0.5μM地塞米松可以显着性降低TNF-a和COX-2 m RNA的水平,可以作为阳性对照。100μM、50μM以及10μM的柯子宁均能够显着降低LPS诱导的炎症因子TNF-a的m RNA水平（P<0.01）,且呈比较明显的浓度依赖效应。对于COX-2 m RNA水平变化,有着相同的趋势,即100μM、50μM和10μM的柯子宁预处理细胞,能够以一种浓度依赖性的方式显着降低COX-2 m RNA水平（P<0.01）。3.柯子宁对RAW264.7细胞炎症因子表达水平的影响0.5μM地塞米松可以显着性降低TNF-a和IL-6的表达水平,可以作为阳性对照(（p<0.01）;100μM、50μM、10μM的柯子宁均能降低TNF-a的蛋白表达水平（p<0.01）;对于IL-6的表达,100μM和50μM柯子宁具有显着性的抑制效果（p<0.01）。4.柯子宁对RAW264.7细胞NF-κB信号通路磷酸化水平的影响Western blotting结果显示,与阳性组（LPS）相比,10μM,50μM和100μM的柯子宁预处理细胞后,细胞磷酸化的NF-κB p65蛋白含量都呈现降低趋势,并呈现浓度依赖性。第三部分西青果提取物柯子宁治疗关节炎模型小鼠的药效及机制研究实验方法1.胶原蛋白诱导性关节炎（CIA）动物模型的制备DBA/1小鼠按Brand等报道的方法造模,经初次免疫诱导剂初次免疫、加强免疫诱导剂加强免疫,制备CIA动物模型。2.柯子宁对胶原诱导关节炎小鼠的治疗将30只SPF级DBA/1雄性小鼠（6周,18±2g）随机分为五组,分别为对照组,模型组（CIA）,低剂量组（柯子宁,40mg/kg）、中剂量组（柯子宁,80mg/kg）和高剂量组（柯子宁,160mg/kg）;对照组和模型组灌胃给药,模型组给予低、中、高三个剂量的柯子宁溶液（柯子宁溶解于1%羧甲基纤维素）;从初次免疫第39天（全部发病）开始给药,每天一次,持续28天,给药完成后继续观察2周,于初次免疫第80天断颈处死小鼠,取双侧踝关节及足趾关节,用于Micro-CT扫描、病理切片。3.体征观察及关节炎程度评分每天观察各组小鼠饮食、活动及毛发改变,每周两次采用文献标准进行关节炎评分。4.Micro-CT影像学检测选取小鼠右后肢,使用Viva 40 Micro CT仪对小鼠关节进行扫描并3D重建;采用SIPL软件将骨组织与软组织区分;同时,分析骨密度（BS）骨表面积/骨密度（BS/BV）和骨小梁厚度（Tb.Th）。5.关节病理形态学检查取关节标本,经脱钙、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色制片后,用光学显微镜观察足祉关节及裸关节周围炎症,血管鼓形成、滑膜增生及软骨下骨质破坏程度,并进行评分。6.免疫组织化学检测取关节标本,经选片制片、脱蜡、水化、抗原微波修复、阻断内源性过氧化物酶活性、血清封闭、孵育一抗、孵育二抗、辣根过氧化物酶处理、DAB显色、复染、脱水、封片制片,光镜观察,进行免疫组化评分。实验结果1.CIA小鼠临床表现经小鼠关节炎指数评价,初次免疫无任何小鼠发展为关节炎;加强免疫（第21天）后第二天即有小鼠开始出现关节炎症,至初次免疫第35天左右,实验组24只小鼠全部发展为关节炎,造模率100%。2.高中剂量柯子宁能有效缓解CIA诱导的关节炎症结果显示,给药28天以后,中剂量组和高剂量组与模型组比,能显着降低关节炎指数,差异有统计学意义（p<0.05）。但低剂量组与模型组比,效果不明显。治疗结束后观察两周,结果显示,高剂量和中剂量组小鼠炎症指数维持在5-6分水平,与模型组（11分）比有显着差异（p<0.05）。低剂量组小鼠炎症仍比较严重（9-10分）,症状未得到明显改善。3.Micro-CT影像学检测三维重建图中可以看出,柯子宁中剂量组和高剂量组治疗后小鼠骨表面侵蚀程度得到显着缓解和改善。相关参数值BV,BS/BV以及Tb.Th的结果显示,发病早期即给予柯子宁治疗的小鼠与正常小鼠相比,仍有一定的骨损失,但与模型组相比,体积明显增加,骨小梁厚度也明显增厚。4.病理切片观察病理切片HE染色结果显示,柯子宁低剂量组关节囊组织可见有一定破坏,滑膜及滑膜下组织间有少量炎症细胞的浸润,关节腔变窄。经关节组织病理学评分显示,与模型组相比,柯子宁中剂量组和高剂量组的关节组织病理学评分显着降低。5.柯子宁对炎症因子TNF-α和IL-6表达的影响柯子宁治疗组中,低剂量组TNF-α、IL-6的表达仍比较明显,但高、中剂量组TNF-α、IL-6的表达显着降低,与模型组有显着性差异（p<0.05）。6.柯子宁对COX-2以及MMP-3表达的影响柯子宁治疗组中,低剂量组COX-2及MMP-3的表达仍比较明显,但高、中剂量组COX-2及MMP-3的表达显着降低,与模型组有显着性差异（p<0.05）。结论:1.利用含水丙酮冷浸提取、低温浓缩回收丙酮、乙酸乙酯萃取和低温浓缩的方法得到酚酸提取物。利用大孔吸附树脂等分离方法,对西青果酚酸提取物进行分离、纯化,得到酚酸类化合物单体,并对其进行结构鉴定。最终获得四种单体:没食子酸（Gallic acid）、柯子宁（Chebulanin）、诃黎勒酸（Chebulagic acid）和诃子酸（Chebulinic acid）。2.RAW264.7细胞实验显示,柯子宁可显着抑制LPS诱导的炎症因子TNF-a m RNA水平,和TNF-a和IL-6蛋白表达水平;也可以显着性抑制炎症关键酶COX-2 m RNA水平。同时,柯子宁可以降低LPS诱导的磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平,这提示柯子宁可能通过NF-κB信号通路来抑制由LPS诱导的炎症反应。3.构建胶原蛋白诱导性关节炎动物（CIA）模型,考察柯子宁对类风湿性关节炎的治疗作用及关节组织中炎症因子的表达。结果显示,柯子宁可显着缓解小鼠关节炎症状,降低关节评分;并能显着下调关节组织中TNF-α、IL-6、COX-2和MMP-3等炎性介质的表达。
林璞粤[3]（2005）在《安宫牛黄散中朱砂、雄黄对HSP70、iNOS及细胞因子的影响》文中指出研究背景:安宫牛黄丸出自清代吴鞠通《温病条辨》,具有清热解毒、豁痰开窍的功效,主治热病、邪入心包、神昏谵语。安宫牛黄丸治疗急性脑血管病,疗效显着,后遗症相对较轻,是临床上治疗高热惊厥、脑卒中的要药。 朱砂化学成分主要为硫化汞（HgS）,《药典》规定朱砂中硫化汞含量不得低于96%。朱砂具有镇惊、催眠、抗惊厥作用。雄黄主要成分为二硫化二砷（As2S2）。《药典》规定雄黄中二硫化二砷含量不得低于90%。雄黄具有抗菌、抗肿瘤作用。 目的:研究病理状态下（外伤性脑水肿）,安宫牛黄散中朱砂、雄黄对HSP70、iNOS及细胞因子（TNF-α、IL-1β）的影响,探讨复方中朱砂、雄黄的药理作用机制,为该方的临床应用提供科学依据。 方法:本实验选用外伤性脑水肿动物模型。SD大鼠,雌雄各半,分为8小时组和24小时组,每组又分设6个组:正常组、模型组、模型+朱砂组、模型+雄黄组、模型+安宫牛黄散组（下称整方组）、模型+去朱砂、雄黄的安宫牛黄散组（下称拆方组）。RT-PCR方法测定脑组织中HSP70mRNA含量;化学法测定脑组织中NOS含量;放免法测定血清中细胞因子TNF-α、IL-1β。 结果:造模后8小时,安宫牛黄散整方组与拆方组HSP70mRNA表达均较模型组增高（P<0.05）,且整方组诱导HSP70mRNA表达的作用强于拆方组（P<0.05）。 造模后8小时,朱砂组、雄黄组、安宫牛黄散整方组、安宫牛黄散拆方组iNOS表达均较模型组降低（P<0.05）。整方组抑制作用最为显着,与朱砂组、雄黄组及拆方组比较,差异有显着性意义（P<0.05）。 造模后8小时,雄黄组、整方组、拆方组TNF-α表达较模型组降低（P<0.05）。但整方组与雄黄组、拆方组比较,差异无显着意义（P>0.05）。整方组与拆方组IL-1β表达较模型组降低（P<0.05）,但两者之间的差异无显着意义（P>0.05）。 造模后24小时,各组HSP70mRNA、iNOS、TNF-α及IL-1β表达与正常组比较无显着差异。 结论:正常大鼠脑组织中仅有少量HSP70mRNA表达,造模后8小时,HSP70mRNA显着增高;造模后24小时,恢复正常水平。正常大鼠脑组织中iNOS含量极低,脑外伤后8小时,iNOS含量显着增高;24小时,降至基础水平。正常大鼠血清中细胞因子仅有较低水平表达;脑外伤后,TNF-α、IL-1β表达显着增加,伤后8小时仍维持较高水平的表达,外伤后24小时,恢复基础水平。
刘明洁,贺锋嘎,白洪涛,张冬丽,哈森其木格[4]（2000）在《光度法测蒙药铜灰清除超氧负离子自由基机理的探讨》文中研究表明经过光度法测定蒙药铜灰清除超氧负离子自由基时 0 .0 5mol/ml铜灰溶液加入 0 .10ml时清除自由基最高 ,达到 6 4 %。蒙药铜灰的Cu（Ⅰ ）和Cu（Ⅱ ）都能清除·O 2 自由基形成O2 及H2 O2 。
二、光度法测蒙药铜灰清除超氧负离子自由基机理的探讨（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、光度法测蒙药铜灰清除超氧负离子自由基机理的探讨（论文提纲范文）
（1）蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin通路防治绝经后骨质疏松症的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 研究背景及意义 |
| 1. 研究背景 |
| 2. 研究意义 |
| 第二节 中蒙医药抗氧化应激防治绝经后骨质疏松概述 |
| 1. 氧化应激与雌激素缺乏 |
| 2. PMOP与Fox O/Wnt-β-catenin通路 |
| 3. 中医药与PMOP |
| 4. 蒙医药与PMOP |
| 5. 蒙药蓝刺头与PMOP |
| 第三节 课题研究设想 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 蒙药蓝刺头对经后骨质疏松症模型大鼠骨微结构的影响 |
| 1. 实验材料及设备 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验设备 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 去卵巢大鼠骨质疏松症模型的建立 |
| 2.3 造模是否成功的判定 |
| 2.4 给药方法 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.6 指标检测 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 实验过程中大鼠生命概况 |
| 3.2 假手术组与模型组大鼠去卵巢术前术后体质量变化 |
| 3.3 骨密度(BMD)测定结果 |
| 3.4 骨形态学计量(Micro-CT)骨微结构测定结果 |
| 3.5 各组大鼠骨组织形态学观察(HE染色) |
| 3.6 各组大鼠骨组织学定量检测结果 |
| 3.7 血清骨代谢指标测定结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 实验相关检测指标分析 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 第二节 蒙药蓝刺头调控Fox O/Wnt/β-catenin通路抗氧化应激防治绝经后骨质疏松的实验研究 |
| 1. 实验材料、实验设备 |
| 1.1 造模动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验设备与器材 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 绝经后骨质疏松模型建立 |
| 2.3 造模是否成功 |
| 2.4 给药方法 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 数据的统计学处理 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 阴道上皮角化实验结果 |
| 3.2 造模术后4周BMD检测结果 |
| 3.3 造模术后8周子宫病理形态学检测结果 |
| 3.4 血清中氧化应激相关指标测定结果 |
| 3.5 Western blot检测骨组织抗氧化应激相关蛋白的表达 |
| 3.6 RT-PCR测定调节目标基因表达的相关因子表达 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 蒙医学对骨骼的认识 |
| 4.2 蒙医学对骨质疏松的认识 |
| 4.3 传统蒙医学“骨枯症”与现代医学“骨质疏松”理论契合点分析 |
| 4.4 蒙医药传统疗法防治“骨枯症”的理论探讨 |
| 4.5 蒙药蓝刺头的选药依据 |
| 4.6 去卵巢骨质疏松模鼠模型选择依据 |
| 4.7 实验中药对照和阳性对照药选择依据 |
| 4.8 实验相关检测指标分析 |
| 5. 结论 |
| 6. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三节 全文总结及研究结论 |
| 1. 全文总结 |
| 2. 本研究结果表明 |
| 3. 结论 |
| 4. 研究不足之处 |
| 5. 展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 文献研究 |
| 第一节 抗氧化应激调控Fox O/Wnt/β-catenin通路防治骨质疏松研究进展 |
| 1. 氧化应激反应与骨质疏松症的相关性 |
| 1.1 氧化应激概述 |
| 1.2 氧化应激与骨质疏松发病的相关性 |
| 1.3 抗氧化剂对骨质疏松的治疗作用 |
| 2. FoxO/Wnt/β-catenin通路与骨质疏松 |
| 2.1 叉头框蛋白Fox O与骨质疏松 |
| 2.2 Wnt/β-catenin通路与骨质疏松 |
| 3. 总结 |
| 参考文献 |
| 第二节 探讨蒙医药学对骨质疏松症发病机制影响的研究进展 |
| 1. 骨质疏松症和绝经后骨质疏松症概述 |
| 2. 蒙医学对骨骼的认识 |
| 3. 蒙医学对骨质疏松的认识 |
| 4. 骨枯症发病机制与骨质疏松现代研究中寻找共同点是制定蒙医治疗骨质疏松症的理论依据 |
| 4.1 从蒙医对骨枯症发病机制方面判定 |
| 5. 蒙医治疗骨质疏松的原则 |
| 6. 蒙医传统疗法对“骨枯”病的预防与治疗的基本原则和方法的理论探讨 |
| 7. 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 第三节 蒙药蓝刺头抗骨质疏松研究进展 |
| 1. 蒙药蓝刺头概况 |
| 2. 蒙药蓝刺头化学成分研究现状 |
| 3. 蒙药蓝刺头药理作用实验研究 |
| 3.1 毒性试验 |
| 3.2 镇痛作用 |
| 3.3 保肝作用 |
| 3.4 抗炎作用 |
| 3.5 抗氧化作用 |
| 3.6 骨科疾病的预防和治疗 |
| 4. 蒙药蓝刺头防治绝经后骨质疏松研究进展 |
| 4.1 蒙药蓝刺头防治绝经后骨质疏松的研究内容 |
| 4.2 蒙药蓝刺头预防和治疗绝经后骨质疏松临床研究进展 |
| 4.3 蒙药蓝刺头防治绝经后骨质疏松的实验研究 |
| 5. 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略语对照表 |
| 攻读博士期间取得的学术成就 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）西青果抗炎活性成分的分离鉴定及体内外抗炎作用研究（论文提纲范文）
| 英文缩写索引 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 西青果抗炎活性成分的提取分离及结构鉴定 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 西青果提取物柯子宁抑制LPS对单核/巨噬细胞炎症信号通路及细胞因子的作用研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 柯子宁抗关节炎模型小鼠药效及机制探讨 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 文献综述 天然药物化学成分抗炎作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 博士研究生期间发表的论文 |
| 致谢 |
（3）安宫牛黄散中朱砂、雄黄对HSP70、iNOS及细胞因子的影响（论文提纲范文）
| 前言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一章 朱砂及雄黄的研究概况 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 朱砂及雄黄的组成及炮制 |
| 第三节 朱砂及雄黄的临床应用 |
| 第四节 朱砂及雄黄的药理作用 |
| 第五节 复方中朱砂、雄黄作用的研究 |
| 第六节 朱砂及雄黄的毒副作用 |
| 参考文献 |
| 第二章 安宫牛黄丸研究概况 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 安宫牛黄丸中汞、砷在大鼠体内的吸收与分布研究 |
| 第三节 安宫牛黄丸的药理学研究 |
| 第四节 安宫牛黄丸的临床应用 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 脑组织中HSP70mRNA的测定 |
| 第二章 脑组织中iNOS的测定 |
| 第三章 血清中TNF-α、IL-1β的测定 |
| 第四章 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 结论与展望 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）光度法测蒙药铜灰清除超氧负离子自由基机理的探讨（论文提纲范文）
| 1 仪器与试剂 |
| 1.1 仪器: |
| 1.2 试剂: |
| 2 实验方法 |
| 2.1 (·O-2) 的生成: |
| 2.2 (·O-2) 的检测: |
| 2.3 蒙药铜灰清除作用的测定: |
| 3 结果与讨论 |
四、光度法测蒙药铜灰清除超氧负离子自由基机理的探讨（论文参考文献）
- [1]蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin通路防治绝经后骨质疏松症的实验研究[D]. 董重阳. 南京中医药大学, 2019(06)
- [2]西青果抗炎活性成分的分离鉴定及体内外抗炎作用研究[D]. 赵映兰. 第三军医大学, 2016(02)
- [3]安宫牛黄散中朱砂、雄黄对HSP70、iNOS及细胞因子的影响[D]. 林璞粤. 广州中医药大学, 2005(06)
- [4]光度法测蒙药铜灰清除超氧负离子自由基机理的探讨[J]. 刘明洁,贺锋嘎,白洪涛,张冬丽,哈森其木格. 中国民族医药杂志, 2000(S1)