一、卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究（论文文献综述）
张婷[1]（2019）在《双氢青蒿素对感染弓形虫及疟原虫小鼠免疫调节作用的研究》文中指出青蒿（Artemisia annua）是一种古老的退烧草药。从青蒿中提取的青蒿素是治疗疟疾的有效药物。双氢青蒿素（DHA）是在青蒿素原有的结构中引进了羟基,从而提高了其抗疟活性。研究发现DHA还具有抗炎、抗肿瘤作用,而且对红斑狼疮具有一定的治疗作用,但作用机理一直不是很清楚。本实验以DHA为实验药物,对其在感染弓形虫及伯氏疟原虫小鼠的免疫调节作用进行了研究。将小鼠攻虫后,分别在不同时间段进行DHA灌胃治疗,借助流式细胞仪对感染寄生虫小鼠脾脏及血液中B细胞、T辅助细胞（Th）、CD8+T细胞、自然杀伤细胞（NK）、自然杀伤T细胞（NKT）数量的变化进行分析。同时收集血清,利用多因子检测试剂盒对血清中细胞因子进行检测。实验数据显示健康小鼠经DHA灌胃后,脾脏中CD8+T细胞的数量及脾脏指数在一定时期显着增加。感染弓形虫的小鼠经DHA灌胃后脾脏及血液中T辅助细胞（Th）、CD8+T细胞的数量增加,B细胞的数量减少。感染伯氏疟原虫的小鼠经DHA灌胃治疗后,脾脏及血液中的辅助性T细胞（Th）、CD8+T细胞、自然杀伤细胞（NK）及自然杀伤T细胞（NKT）数量增加而促炎性细胞因子的产生降低。本研究表明:DHA对小鼠的免疫系统具有免疫调节作用,主要表现为（1）增加脾脏和血液中辅助性T细胞（Th）、CD8+T细胞、自然杀伤细胞（NK）及自然杀伤T细胞（NKT）的数量;（2）使失调的细胞因子水平趋于正常;（3）抑制B淋巴细胞的产生;（4）维持宿主免疫系统的平衡。
郑玉强,蔡辉,武卫华,叶彬[2]（2012）在《卡氏肺孢子菌肺炎动物模型建立及其病原体的超微结构观察》文中指出目的建立SD大鼠的卡氏肺孢子菌肺炎（PCP）的实验动物模型,观察肺组织病理变化特点和卡氏肺孢子菌（Pc）的超微结构特征,探讨其致病机制。方法地塞米松皮下注射诱导SD大鼠PCP,肺印片吉姆萨染色检测Pc滋养体,GMS染色检测Pc包囊,肺组织切片HE染色观察肺组织病理变化,透射电镜观察Pc超微结构。结果地塞米松诱导6周后,大鼠肺印片可见少许Pc滋养体和少许包囊,第9周肺泡腔内可见大量滋养体和包囊;PCP肺泡腔变小,肺泡上皮增生,间隔增宽,肺间质内有以淋巴细胞、嗜酸性粒细胞为主的细胞浸润并伴炎性物质渗出,并随病程时间延长炎症进行性加重;透射电镜显示,Pc黏附在肺Ⅰ型上皮细胞,滋养体形态多样,表面有管状突出和伪足样结构,内部含有丰富的线粒体、内质网、管状小体、囊内小体、高密度特殊颗粒等超微结构;包囊表面有皱褶但未见管状突起,囊内有数个囊内小体,具有滋养体样特征。结论 Pc对肺Ⅰ型上皮细胞的黏附和过度繁殖增生以及刺激肺间质大量炎性细胞浸润和炎性物质渗出是引发PCP不可逆肺损伤的重要因素。
陈敬捷,何晗,苏凌松,秦松树,唐柳生,李世立,胡宏波,李勇[3]（2011）在《艾滋病合并肺孢子虫肺炎的实验室诊断方法进展》文中认为肺孢子虫肺炎（PCP）是艾滋病常见的一种严重的至死性肺炎。由于其临床表现不具特异性,易被误诊,因此实验室诊断更显重要。该文主要介绍PCP的实验室诊断方法,包括痰液、BALF、肺组织检查形态学诊断、分子学诊断、PC培养以及免疫学诊断等。
冯燕梅[4]（2011）在《卡氏肺孢子菌p55-v3DNA疫苗的构建及其对大鼠免疫保护作用的研究》文中研究表明目的:本研究拟采用分子生物学和分子免疫学的方法构建卡氏肺孢子菌（Pneumocystis carinii, PC） p55-v3 DNA疫苗,同时将p55-v0抗原作为阳性对照,免疫SD大鼠后,对p55-v3 DNA疫苗预防PC的作用进行评定,并进一步对其免疫作用机理进行探讨,为阐明PC与宿主相互作用的分子机制及新型疫苗的研制提供基础,进而为PCP的防治提供一种新的方法和手段。方法:1.建立PCP动物模型并制备PC抗血清。2.提取PC感染鼠肺组织总RNA,运用RT-PCR扩增p55-v3和p55-v0抗原基因。3.运用分子克隆的方法构建p55-v3和p55-v0的真核表达载体。4.运用脂质体2000将鉴定正确的真核表达载体转染COS-7细胞,通过RT-PCR和Western-blot分别在mRNA及蛋白水平对所转染细胞两种抗原蛋白的表达进行检测。5.动物实验:分别将p55-v3、p55-v0 DNA疫苗免疫SD大鼠（以pVAX1空载体及PBS作为对照）后,按常规方法构建PCP模型,于第6周处死大鼠,通过一般情况、肺重/体重、肺印片包囊计数、病理切片及体液免疫、细胞免疫的检测,观察p55-v3和p55-v0 DNA疫苗对大鼠的免疫保护作用并进行比较,从而对p55-v3的免疫保护机制及效应进行评价。结果:1.模型鼠肺印片（GMS染色）,可见大量被染成棕黑色的PC包囊。免疫组化证实血清中抗PC抗体阳性。2.以总RNA为模板进行RT-PCR后,1 %琼脂糖凝胶电泳分析,在1200 bp、1000 bp左右处见一特异性条带,分别与p55-v0、p55-v3抗原基因大小相符。3.将扩增产物与T载体连接,测序正确后构建重组载体pVAX-p55-v0,pVAX-p55-v3。酶切鉴定表明p55-v3、p55-v0抗原基因片段已成功克隆入pVAX1载体。4.将重组真核表达载体转染COS-7细胞后提取总RNA,以其为模板进行RT-PCR,1 %琼脂糖凝胶电泳观察可见重组质粒转染组有明显的特异性条带,分别位于1200 bp及1000 bp左右,其大小与p55-v0及p55-v3基因片段一致,而空质粒转染组仅见内参（GAPDH）条带,未见特异性条带;Western-blot分析发现重组质粒转染组均可见约55 kDa大小的特异性条带,提示在COS-7细胞中重组质粒从mRNA及蛋白水平均有表达。5.构建的DNA疫苗免疫SD大鼠后发现pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3免疫组肺重/体重、包囊计数较PBS及pVAX1空载体组明显减少,而pVAX-p55-v0与pVAX-p55-v3免疫组之间无显着性差异。病理切片观察发现PBS及pVAX1空载体组（HE染色）肺泡间隔增宽,间质水肿明显,GMS染色下可见肺泡壁及间质中大量被染成棕黑色的PC包囊,而pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3免疫组明显减轻,且pVAX-p55-v0与pVAX-p55-v3之间无显着性差异。与对照组相比,免疫组血清IgG显着增高,脾淋巴细胞显着增殖,血清IFN-γ,IL-2增高明显,pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3免疫组之间无明显差异。各组大鼠血清IL-4水平无显着性差异,结论:1.成功构建PCP模型并制备PC抗血清。2.成功扩增p55-v0及p55-v3基因。3.成功构建重组真核表达载体pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3。4.重组真核表达载体pVAX-p55-v0及pVAX-p55-v3体外转染COS-7细胞,RT-PCR及Western-blot鉴定证实在mRNA及蛋白水平均有表达。5.重组DNA疫苗pVAX-p55-v3可诱导大鼠产生部分保护性免疫应答,其免疫保护效应与p55-v0 DNA疫苗无显着性差异。
李燕[5]（2010）在《卡氏肺孢子虫检测及基因型初步研究》文中进行了进一步梳理卡氏肺孢子虫是一种机会致病病原体,1909年Chagas首次在豚鼠肺中发现。1912年Delanoe夫妇在大鼠肺内检出,并命名为Pneumocystis carinii,即卡氏肺孢子虫。它可感染包括动物和人在内的多种哺乳动物,一般以隐性感染状态寄生于免疫力正常宿主的肺组织内不引起症状,但当宿主免疫功能低下时可大量繁殖引起致命的卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）。由于是艾滋病最常见的机会性感染和最主要的致死原因而受到广泛的关注。随着许多先天或后天免疫机能低下个体和应用免疫抑制剂患者的增多,PCP已成为这些患者较高死亡率的呼吸系统感染性疾病。目的:本论文采用瑞氏-姬姆萨（Giemsa）染色法、六甲基四胺银（GMS）染色法和聚合酶链（PCR）反应检测卡氏肺孢子虫（PC）,探讨化学染色法和PCR方法在卡氏肺孢子虫检测中的价值。为临床诊断卡氏肺孢子虫肺炎建立简便、稳定、敏感性和特异性均高的实验室检测方法。另外,通过对卡氏肺孢子虫（PC）检测和基因分型特异性均高的PC线粒体大亚基（mtLSU rRNA）、基因内转录间隔（ITS1- 5.8SrRNA- ITS2）、二氢叶酸还原酶（DHFR）基因进行序列测定和基因型分析,为进一步了解卡氏肺孢子虫的种属特异性及生物学特性提供分子流行病学资料。方法:实验组为肺癌合并肺部感染患者的痰液30份、支气管肺泡灌洗液（BALF）20例和肺癌手术患者肺组织标本10份。对照组为正常人痰液20份。采用瑞氏-姬姆萨（Giemsa）染色法和六甲基四胺银（GMS）染色法检测痰涂片、BALF涂片和肺印片中的卡氏肺孢子虫;设计mtLSUrRNA、ITS1-5.8SrDNA- ITS2、DHFR基因的引物,对从痰液、BALF和肺组织中提取的卡氏肺孢子虫DNA进行聚合酶链反应。PCR阳性产物回收纯化后进行基因测序,用Blast软件对测序结果进行同源性检索、序列比对和基因型分析。结果:1瑞氏-姬姆萨（Giemsa）染色法和六甲基四胺银（GMS）染色法敏感性低。在80份标本中,PC的检出率为0（0/80）。2 60份实验组标本中,ITS1-5.8SrRNA-ITS2基因对痰液、BALF、肺组织阳性检出率分别为10%（1/10）、0（0/30）、30%（6/20）,mtLSUrRNA、DHFR基因对BALF阳性检出率分别为10%（2/20）和5%（1/20）,痰液、肺组织均未扩增出阳性条带。3 20份正常对照组和临床常见细菌和真菌（如大肠埃希菌DNA、鲍曼不动杆菌DNA、铜绿假单胞菌DNA、金黄色葡萄球菌DNA、结核杆菌DNA、酵母样真菌DNA等）对mtLSUrRNA、ITS1- 5.8SrRNA-ITS2、DHFR基因进行特异性检测,均无非特异性条带出现。4对ITS1- 5.8SrRNA-ITS2基因进行巢氏PCR,从1:1×101至1:1×105各稀释度的DNA模板,均能扩增出相同长度的片断（约550bp）。而相同条件下单一PCR仅能扩增出1:1×103的稀释度。5本研究共扩增出10例阳性产物,mtLSUrRNA基因2例,ITS1- 5.8SrRNA -ITS2基因7例,DHFR基因1例。6 10例PCR阳性产物回收、纯化、测序后,进行序列比对,序列间存在碱基的缺失、置换和插入。结论:1瑞氏-姬姆萨（Giemsa）染色法,操作简便,敏感性低。六甲基四胺银（GMS）染色法操作复杂,要求检验者有一定操作经验,且敏感性低。2 PCR检测卡氏肺孢子虫敏感性高于化学染色法。3卡氏肺孢子虫mtLSUrRNA、ITS1- 5.8SrRNA-ITS2、DHFR基因PCR检测特异性高。4巢氏PCR检测卡氏肺孢子虫敏感性优于普通的单一引物PCR。5 10例PCR阳性标本PC基因型与基因库中Eg型同源性较高。6不同人源宿主卡氏肺孢子虫序列间存在位点差异,表明肺孢子虫的遗传多样性。7本研究首次在石家庄地区采用PCR检出卡氏肺孢子虫,所用引物对卡氏肺孢子虫高度敏感,适用于临床病人的检测。
杨霞霞[6]（2009）在《大鼠卡氏肺孢子虫DHFR和DHPS基因序列的测定与分析》文中指出目的分析我国卡氏肺孢子虫遵义分离株的二氢叶酸还原酶（DHFR）和二氢叶酸合成酶（DHPS）基因的序列特性,应用PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术分析DHPS基因的变异。方法（1）用地塞米松磷酸钠注射液腹股沟皮下注射的方法,用SD大鼠建立肺孢子虫肺炎动物模型。（2）实验分组:正常对照组（正常大鼠）,阴性对照组（给磺胺药的正常大鼠）,阳性对照组（建立Pc模型未给磺胺药的大鼠）和实验组（建立Pc模型并用磺胺药治疗的大鼠）。（3）肺组织印片六亚甲基四胺银染色观察卡氏肺孢子虫（Pneumocystis carinii,Pc）包囊,肺组织切片苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察其病理变化。（4）收集大鼠的肺组织,提取DNA,用PCR方法扩增卡氏肺孢子虫的DHFR和DHPS基因,纯化扩增产物后测序。检索基因文库（Gene bank,gb）,进行同源性分析。（5）用AccⅠ和HaeⅢ两种酶对DHPS基因的PCR扩增产物进行酶切,并应用PCR-RFLP技术对其进行分析。结果（1）实验组和阳性对照组大鼠全部感染Pc,正常对照组和阴性对照组未发现Pc。（2）实验组和阳性对照组的Pc DHFR和DHPS基因PCR扩增均呈阳性,阴性对照组和正常对照组无扩增。实验组和阳性对照组Pc DHFR有832个碱基,与gb[M26495]（Pcf.sp.rat）序列比较,同源性均为99%,与gb[AF322061]（Pc f.sp.rat）序列比较,同源性均为100%。实验组大鼠DHPS基因有816个碱基,与gb[U66283]（Pc f.sp.muris）序列比较同源性为94%,与gb[U66282]（Pc f.sp.hominis）相似性为83%。阳性对照组SD大鼠的卡氏肺孢子虫DHPS基因序列有839个碱基,与gb[U66283]序列比较同源性为95%,与gb[U66282]相似性为84%。（3）通过限制性内切酶AccⅠ和HaeⅢ酶切电泳,应用PCR-RFLP技术分析实验组和阳性对照组大鼠Pc DHPS基因并未发现Ala55/Ser57位点的突变。结论（1）地塞米松磷酸钠皮下注射法是一种建立SD大鼠肺孢子虫肺炎动物模型的良好方法。（2）实验组和阳性对照组Pc DHFR和DHPS基因的PCR扩增均呈阳性,两个基因与Gene bank内相应大鼠源肺孢子的基因序列同源性较高。（3）PCR具有灵敏性好、分辨率高、重复性好、操作简便、快速等优点,适用于肺孢子虫肺炎的分子生物学诊断。（4）进行PCR-RFLP分析后发现我国卡氏肺孢子虫遵义分离株的DHPS基因为野生型。
谭燕[7]（2008）在《RNAi沉默卡氏肺孢子MSG-UCS基因表达的研究》文中提出目的:本研究旨在应用RNA干扰（RNA interference, RNAi）技术,构建卡氏肺孢子（Pneumocystis carinii,PC）主要表面糖蛋白（Major surface glycoprotein,MSG）表达调控基因上游保守序列（Upstream conserved sequence,UCS）的小干扰RNA（short interfering RNA,siRNA）表达载体,并将其转染到PC中有效表达后,研究其对PC的抑制作用。方法:设计并人工合成针对PC MSG-UCS基因的短发夹状（Short hairpin RNA,shRNA）序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切与测序法进行鉴定;将构建成功的主要表面糖蛋白UCS基因siRNA表达载体pPC-UCS体外转染到PC中,用RT-PCR检测转染48小时后UCS基因的表达,在扫描电镜下观察PC的超微结构变化;将表达载体pPC-UCS用水动力法注射到PCP大鼠体内,48小时后进行以下检查:大鼠肺印片记数包囊、观察肺组织病理改变、电镜检测PC的超微结构改变。结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致;体外转染pPC-UCS的PC中UCSmRNA表达水平降低,与对照组相比,结果具有显着性差异,UCSmRNA的抑制率为77.47%;转染pPC-UCS48小时后,在扫描电镜中观察PC,可见PC水肿胀大,微绒毛脱落,表膜破裂,出现破损。体内转染pPC-UCS 48h后,包囊减少率为67.88%,与对照组相比,结果具有显着性差异;大鼠肺泡炎减轻,与对照组相比,结果具有显着性差异;扫描电镜观察可见PC水肿胀大,微绒毛脱落,表膜破裂,出现破损。结论:成功构建和鉴定卡氏肺孢子主要表面糖蛋白UCS基因的siRNA表达载体;所构建的PC MSG-UCS siRNA表达质粒能在体外有效抑制PC中UCS基因的表达,导致PC细胞壁的破坏并杀灭PC;所构建的PC MSG-UCS siRNA表达质粒能在体内有效抑制PC增长并杀灭PC,减轻肺部炎症。
韩晶[8]（2008）在《耶氏肺孢子虫肺炎实验及临床诊断研究》文中研究说明目的:采用瑞氏-吉姆萨染色法、巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫,比较这两种方法在耶氏肺孢子虫肺炎诊断中的敏感性和稳定性,并结合病人的临床表现探讨肺孢子虫肺炎的临床诊断方法。方法:收集艾滋病、肾移植、肺癌、支气管炎等患者的痰液、气管分泌物、支气管肺泡灌洗液（BLA）或肺组织标本,采用瑞氏-吉姆萨染色法检测痰、BALF涂片和肺印片等标本中的耶氏肺孢子虫;以Pc-ITS为引物,对肺组织、BALF和痰标本,采用巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫DNA。通过文献检索统计国内PCP发病情况:性别及年龄比例、发病特点、地区分布等,结合本研究发现的PCP病人资料,分析总结耶氏肺孢子虫肺炎的临床诊断方法。结果:瑞氏-吉姆萨染色法对该虫的检出率为32.39%,巢氏PCR法对该虫DNA的检出率为61.97%,二者检出率比较,x2=11.30,p＜0.01,有显着意义。文献检索发现2001～2007年国内PCP病例,以AIDS并发PCP为主（82.10%）;男性多于女性;死亡率13.08%,死亡病人中AIDS并发PCP病人占97.37%;PCP发病地区主要在河南、广西、湖南、广东等地;本研究确诊耶氏肺孢子虫肺炎6例,男5例,女1例,治疗后均好转出院。结论:瑞氏-吉姆萨染色法,操作简便,但敏感性偏低。巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫敏感性高于瑞氏-吉姆萨染色法,其特异性和敏感性也优于普通的单一引物PCR法,本研究首次在青岛地区采用巢氏PCR法检出AIDS病人并发耶氏肺孢子虫,所用引物PC-ITS对耶氏肺孢子虫高度敏感,适用于临床病人的检测,结果准确快捷,值得推广。我国目前PCP发病人群以AIDS并发PCP为主,根据国内外资料综述及我们在本研究中对PCP阳性病人的分析,符合以下标准可诊断为AIDS并发PCP:①HIV感染;②CD4+小于200/μl;③有发热、咳嗽,咳痰,伴呼吸急促、进行性呼吸困难、紫绀,血氧饱和度下降;④胸片示间质性肺炎改变,或/及CT肺部示毛玻璃状改变;⑤复方新诺明治疗有效。
常志尚[9]（2006）在《卡氏肺孢子虫肺炎动物模型实验诊断的研究》文中研究指明卡氏肺孢子虫是一种机会性致病的病原体,该虫可在免疫功能低下的人群中诱发致命性的卡氏肺孢子虫肺炎,尤其是CD4+ T细胞功能缺陷者。随着艾滋病病人在我国不断的增加,以及为数众多的恶性肿瘤化疗、器官移植及接受免疫抑制剂治疗的患者,而我国目前对卡氏肺孢子虫实验室诊断大都依赖病原学常规染色,其敏感性和特异性易受不同的操作人员影响波动较大,并且其敏感性总体偏低,因此,急需建立一套简便、稳定、敏感性和特异性均高的诊断体系。本研究拟探讨改良的常规染色法和分子生物学方法在卡氏肺孢子虫实验诊断中的应用。 目的:采用瑞氏-吉姆萨染色法、寡核苷酸探针RNA原位杂交（RNA in situ hybridization）技术和巢式PCR法检测卡氏肺孢子虫,并探讨这三种方法在卡氏肺孢子虫诊断中的应用。 方法:Wistar雌性大鼠皮下注射地塞米松建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型。采用改进的病原学染色法瑞氏-吉姆萨染色法检测肺印片和BALF涂片。采用小亚单位RNA位点来源的寡核苷酸探针一条,地高辛加尾标记,对肺组织制备石蜡标本进行RNA原位杂交。采用Pc-ITS-PCR引物,对肺组织、BALF和血清标本进行巢式PCR法检测。 结果:共检测了43只实验组大鼠,经瑞氏-吉姆萨染色后,在肺组织中查到的滋养体和/或包囊的阳性率为74.42%（32/43）,BALF涂片阳性率为67.44%（29/43）。寡核苷酸探针RNA原位杂交法成功检测到肺组织内的虫体,实验组大鼠在第3周即检测到虫体,7～8周时检测到大量包囊,9～10周时滋养体大量出现,而空包囊多出现在8～9周,虫体分布于肺泡腔、肺泡壁及血管壁。大鼠实验组肺组织切片阳性率为88.37%（38/43）。巢式PCR方法电泳结果出现550bp条带清晰,无非特异条带出现,实验组肺组织、BALF和血阳性率分别为86.05%（37/43）、83.72%（36/43）和76.74%（33/43）。上述三种方法,对照组阳性率均为0%（0/16）。经统计学分析处理,原位杂交对该虫的检出率高于瑞氏-吉姆萨染色法,差别有显着统计学意义（p<0.01）,原位杂交法与PCR法比较差别无统计学意义（p>0.05）,PCR法对该虫的检出率高于瑞氏-吉姆萨染色法,差别有显着统计学意义（p<0.01）。 结论:寡核苷酸探针RNA原位杂交法显示组织内虫体清晰,准确,在形态学
佟小莺,纪伟华,吴增强,杨秀珍[10]（2004）在《SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究》文中认为目的 探讨SPAK-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原对诊断卡氏肺孢子虫肺炎的价值。 方法 采用SPA-ELISA检测免疫抑制大鼠模型在不同时期肺泡灌洗液（BALF）和血清中肺孢子虫（PC）抗原,以及造血干细胞移植并发肺炎患者痰液和血清抗原,并与病原学检查结果比较。 结果 感染大鼠于用药后第4周,BALF中PC抗原,以及肺组织印片和BALF涂片包囊检查开始出现阳性,但前者阳性率（60％）高于后者（20％和40％）,而且全部阳性达到的时间（8周）也早于后者（10周）。第10周有2只鼠血清抗原阳性,但此后又转阴。30例肺炎患者痰液抗原阳性8例,阳性率为26.67％,8例抗原阳性患者中只有3例发现包囊,符合率为37.5％。血清抗原检测全部阴性。 结论 SPA-ELISA检测痰液和肺泡灌洗液抗原比病原学检查敏感性高,而检测血清抗原不适用于诊断卡氏肺孢子虫肺炎。
二、卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究（论文提纲范文）
（1）双氢青蒿素对感染弓形虫及疟原虫小鼠免疫调节作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 青蒿素及其衍生物的历史渊源 |
| 1.1.1 青蒿素 |
| 1.1.2 青蒿素衍生物 |
| 1.1.3 青蒿素的抗疟历史渊源 |
| 1.2 青蒿素及其衍生物抗寄生虫方面的研究进展 |
| 1.2.1 抗日本血吸虫的作用 |
| 1.2.2 抗弓形虫作用 |
| 1.2.3 抗肺孢子虫作用 |
| 1.2.4 抗利什曼原虫作用 |
| 1.2.5 抗球虫作用 |
| 1.2.6 抗锥虫作用 |
| 1.3 青蒿素及其衍生物的抗炎作用 |
| 1.4 青蒿素及其衍生物的抗肿瘤作用 |
| 1.5 青蒿素及其衍生物的免疫调节作用 |
| 1.6 脾脏的结构与功能 |
| 1.6.1 脾脏的结构 |
| 1.6.2 脾脏与寄生虫 |
| 1.7 寄生虫感染后细胞因子的变化 |
| 1.7.1 细胞因子与弓形虫感染 |
| 1.7.2 细胞因子与疟原虫感染 |
| 第二章 双氢青蒿素对健康小鼠的免疫调节作用 |
| 2.1 双氢青蒿素对健康小鼠免疫细胞的调节作用 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 主要试验试剂 |
| 2.1.3 试验用主要仪器与耗材 |
| 2.1.4 试验方法 |
| 2.1.5 样品的采集 |
| 2.1.6 外周血单细胞的获得 |
| 2.1.7 脾脏单细胞的获得 |
| 2.1.8 结果与分析 |
| 2.1.9 讨论 |
| 2.2 双氢青蒿素对健康小鼠血清中细胞因子的调节作用 |
| 2.2.1 试验材料 |
| 2.2.2 主要试验试剂 |
| 2.2.3 试验用主要仪器与耗材 |
| 2.2.4 试验方法 |
| 2.2.5 血清的采集与分离 |
| 2.2.6 细胞因子的检测 |
| 2.2.7 结果与分析 |
| 2.2.8 讨论 |
| 第三章 双氢青蒿素对感染弓形虫小鼠的免疫调节作用 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 试验所用药物 |
| 3.1.3 DHA的准备和药物的施用 |
| 3.1.4 主要试验试剂 |
| 3.1.5 试验用主要仪器与耗材 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 DHA对感染弓形虫小鼠免疫调节作用试验设计 |
| 3.2.2 样品的采集 |
| 3.2.3 外周血单细胞的获得 |
| 3.2.4 脾脏单细胞的获得 |
| 3.2.5 细胞因子的检测 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 DHA抑制了感染弓形虫小鼠的脾脏指数,下调了脾脏中B细胞的数量,并且上调了脾脏中Th细胞及CD8~+T细胞的数量 |
| 3.3.2 DHA促进了血液中Th细胞及CD8~+T 细胞的产生,但抑制了感染弓形虫小鼠血液中的B细胞数量 |
| 3.3.3 DHA抑制了感染弓形虫小鼠血清中的促炎细胞因子的数量 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 双氢青蒿素对感染疟原虫小鼠的免疫调节作用 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 试验所用药物 |
| 4.1.3 DHA的准备和药物的施用 |
| 4.1.4 主要试验试剂 |
| 4.1.5 试验用主要仪器与耗材 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 DHA对感染疟原虫小鼠的免疫调节作用试验设计 |
| 4.2.2 样品的采集 |
| 4.2.3 外周血单细胞的获得 |
| 4.2.4 脾脏单细胞的获得 |
| 4.2.5 细胞因子的检测 |
| 4.2.6 生物软件和分析工具 |
| 4.2.7 统计学处理 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 DHA抑制了感染伯氏疟原虫小鼠的脾脏过度肿大,上调了脾脏中的CD8~+T细胞,NK细胞和NKT细胞的数量 |
| 4.3.2 DHA促进了伯氏疟原虫感染小鼠中血液Th,NK和 NKT细胞的产生 |
| 4.3.3 DHA抑制了感染伯氏疟原虫小鼠血清中的促炎细胞因子的数量 |
| 4.4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 |
（2）卡氏肺孢子菌肺炎动物模型建立及其病原体的超微结构观察（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 诱导方法 |
| 1.3 观察内容 |
| 1.3.1 一般情况观察 |
| 1.3.2 肺组织病原学检查 |
| 1.3.3 肺组织病理学检查 |
| 1.3.4 肺组织透射电镜观察 |
| 2 结 果 |
| 2.1 一般情况观察 |
| 2.2 病原学检查 |
| 2.3 病理学检查 |
| 2.4 透射电镜观察 |
| 3 讨 论 |
（4）卡氏肺孢子菌p55-v3DNA疫苗的构建及其对大鼠免疫保护作用的研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 卡氏肺孢子菌动物模型的建立及抗血清制备 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 卡氏肺孢子菌DNA疫苗pVAX-p55-v3及pVAX-p55-v0的构建及体外表达的研究 |
| 第一节 卡氏肺孢子菌p55-v3 及p55-v0 基因的扩增 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二节 卡氏肺孢子菌重组真核表达载体pVAX-p55-v3 及pVAX-p55-v0 的构建 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三节 卡氏肺孢子菌DNA 疫苗pVAX-p55-v3 及pVAX-p55-v0 在COS-7 细胞中表达效率的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 卡氏肺孢子菌DNA 疫苗pVAX-p55-v3 免疫保护作用的研究 |
| 第一节 卡氏肺孢子菌 DNA 疫苗pVAX-p55-v3 免疫保护力的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二节 卡氏肺孢子菌DNA 疫苗pVAX-p55-v3 诱导 SD 大鼠脾T 细胞增殖 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三节 卡氏肺孢子菌DNA 疫苗pVAX-p55-v3 诱导SD 大鼠血清细胞因子的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四节 卡氏肺孢子菌DNA 疫苗pVAX-p55-v3 诱导SD 大鼠血清抗体水平的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述一：卡氏肺孢子虫肺炎治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二：卡氏肺孢子菌肺炎免疫治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文题目 |
| 参编专着情况 |
（5）卡氏肺孢子虫检测及基因型初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 研究论文 卡氏肺孢子虫检测及基因型初步研究 |
| 引言 |
| 第一部分 卡氏肺孢子虫的病原学检测 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 卡氏肺孢子虫基因型初步研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 卡氏肺孢子虫基因分型方法的研究进展 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）大鼠卡氏肺孢子虫DHFR和DHPS基因序列的测定与分析（论文提纲范文）
| 1 大鼠卡氏肺孢子虫DHFR和DHPS基因序列的测定与分析 |
| 1.1 主要英汉缩略词对照表 |
| 1.2 中文摘要 |
| 1.3 英文摘要 |
| 1.4 前言 |
| 1.5 材料与方法 |
| 1.6 结果 |
| 1.7 讨论 |
| 1.8 结论 |
| 附图 |
| 1.9 参考文献 |
| 2 肺孢子虫肺炎的分子生物学研究现状(综述) |
| 3 致谢 |
（7）RNAi沉默卡氏肺孢子MSG-UCS基因表达的研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| RNAi 沉默卡氏肺孢子MSG-UCS 基因表达的研究 |
| 前言 |
| 第一部分 卡氏肺孢子MSG-UCS 基因siRNA 表达载体的构建和鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 RNA 干扰抑制卡氏肺孢子MSG-UCS 基因表达的体外实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 RNA 干扰抑制卡氏肺孢子MSG-UCS 基因表达的体内实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 |
| 核酸疫苗技术及其抗卡氏肺孢子虫肺炎研究进展 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表的论文 |
（8）耶氏肺孢子虫肺炎实验及临床诊断研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 材料和方法 |
| 1.1 临床标本的采集 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.2 病原学检测 |
| 1.2.1 瑞氏—吉姆萨染色法 |
| 1.2.2 苏木素—伊红染色法 |
| 1.3 巢氏PCR法检测 |
| 1.3.1 引物合成 |
| 1.3.2 模板DNA的制备 |
| 1.3.3 巢氏PCR反应 |
| 1.3.4 琼脂糖凝胶电泳 |
| 1.4 临床资料的采集 |
| 1.4.1 一般资料 |
| 1.4.2 实验室检查 |
| 1.4.3 影像学检查 |
| 1.5 统计学处理 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 病原学检测 |
| 2.1.1 瑞氏—吉姆萨染色法 |
| 2.1.2 苏木素—伊红染色法 |
| 2.2 巢氏PCR检测 |
| 2.3 两种方法检测结果比较 |
| 2.4 两种标本巢氏PCR检测结果比较 |
| 2.5 结合临床表现诊断肺孢子虫肺炎 |
| 2.5.1 国内PCP发病情况 |
| 2.5.2 本次研究的情况 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 瑞氏—吉姆萨染色法对耶氏肺孢子虫的检测 |
| 3.2 巢氏PCR法对耶氏肺孢子虫的检测 |
| 3.3 耶氏肺孢子虫肺炎的临床诊断及治疗 |
| 3.4 标本采集的注意事项 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 综述的参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（9）卡氏肺孢子虫肺炎动物模型实验诊断的研究（论文提纲范文）
| 引言 |
| 第一章 材料和方法 |
| 第一部分 卡氏肺孢子虫感染动物模型的建立与病原学检查 |
| 第二部分 核酸原位杂交法检测组织内卡氏肺孢子虫 |
| 1. 病理切片的制备 |
| 2. 原位杂交检测 |
| 第三部分 PCR方法检测卡氏肺孢子虫 |
| 1 模板 DNA的制备 |
| 2 PCR反应 |
| 第四部分 初步临床应用 |
| 第五部分 统计学处理 |
| 第二章 结果 |
| 第三章 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 致谢 |
| 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明 |
（10）SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究（论文提纲范文）
| 材料和方法 |
| 1 卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的建立 |
| 2 大鼠血清和BALF的收集 |
| 3 病人痰液和血清的收集 |
| 4 病人痰液和大鼠BALF的处理 |
| 5 病原学检查 |
| 6 肺孢子虫包囊抗原的制备 |
| 7 兔抗肺孢子虫IgG的制备 |
| 8 SPA-ELISA检测 |
| 9 SPA-ELISA法的敏感性、特异性和稳定性 |
| 结果 |
| 1病原学检查结果 |
| 2感染大鼠BALF及血清PC抗原检测结果 |
| 3病人痰液和血清抗原的检测 |
| 讨论 |
四、卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究（论文参考文献）
- [1]双氢青蒿素对感染弓形虫及疟原虫小鼠免疫调节作用的研究[D]. 张婷. 沈阳农业大学, 2019(03)
- [2]卡氏肺孢子菌肺炎动物模型建立及其病原体的超微结构观察[J]. 郑玉强,蔡辉,武卫华,叶彬. 重庆医学, 2012(28)
- [3]艾滋病合并肺孢子虫肺炎的实验室诊断方法进展[J]. 陈敬捷,何晗,苏凌松,秦松树,唐柳生,李世立,胡宏波,李勇. 中国临床新医学, 2011(06)
- [4]卡氏肺孢子菌p55-v3DNA疫苗的构建及其对大鼠免疫保护作用的研究[D]. 冯燕梅. 重庆医科大学, 2011(11)
- [5]卡氏肺孢子虫检测及基因型初步研究[D]. 李燕. 河北医科大学, 2010(04)
- [6]大鼠卡氏肺孢子虫DHFR和DHPS基因序列的测定与分析[D]. 杨霞霞. 遵义医学院, 2009(07)
- [7]RNAi沉默卡氏肺孢子MSG-UCS基因表达的研究[D]. 谭燕. 重庆医科大学, 2008(01)
- [8]耶氏肺孢子虫肺炎实验及临床诊断研究[D]. 韩晶. 青岛大学, 2008(07)
- [9]卡氏肺孢子虫肺炎动物模型实验诊断的研究[D]. 常志尚. 青岛大学, 2006(09)
- [10]SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究[J]. 佟小莺,纪伟华,吴增强,杨秀珍. 中国寄生虫病防治杂志, 2004(04)