一、干细胞的研究及其在临床上的应用（论文文献综述）
张露文,戴鹏秀,张翊华,陈奕静,王璟璐,李佳锴[1]（2022）在《猴空泡病毒40大T抗原基因诱导人骨髓间充质干细胞的永生化》文中提出背景:细胞永生化是细胞获得持续增殖能力的一种特性,大T抗原基因可使细胞永生化效率提升,并广泛应用于实验中,越来越受到研究者的关注。目的:建立人骨髓间充质干细胞永生化细胞株,为人骨髓间充质干细胞的临床应用奠定基础。方法:使用含有猴空泡病毒40大T抗原基因的重组质粒载体转染人骨髓间充质干细胞,连续传代培养,通过形态学、细胞增殖能力、细胞表面标记、多向分化潜能等方法进行鉴定。结果与结论:（1）该方法构建的永生化细胞株为贴壁生长的梭形细胞,具有人骨髓间充质干细胞特异性表面标志;（2）转染后第50代人骨髓间充质干细胞仍然可表达猴空泡病毒40大T抗原基因;（3）永生化细胞株的增殖能力优于未转染人骨髓间充质干细胞;（4）永生化细胞株具有向成骨、成脂肪、成软骨细胞分化的潜能;（5）由此可见,转染猴空泡病毒40大T抗原基因不影响人骨髓间充质干细胞的生物学特性和分化能力,该方法可以用于建立人骨髓间充质干细胞永生化细胞株。
袁野[2]（2021）在《荧光聚合物点的细胞内吞定量及活体内细胞追踪研究》文中研究指明随着纳米药物的问世以及人们对各类细胞性能逐步清晰的认知,基于细胞的治疗与药物传递体系逐渐被开发利用,由于其生物相容性高、半衰期长、靶向效果明显、毒副作用低等良好的药代动力学特性被视为是实现未来医学突破的重要手段,在生物医学领域得到了广泛的关注。其中的一些细胞体系甚至已经在某些临床试验中取得了阶段性的成功,比如红细胞能够大幅度延长药物的循环寿命;淋巴细胞能够有效提高药物的靶向安全性;干细胞能够对受损组织进行再生修复等等。虽然这项技术有着美好的未来,但如何对被载药物进行实时地、精准地定量与调控,怎样能明确地获悉细胞在宿主体内完整的代谢过程都是阻碍其在临床上实现系统性应用的关键因素,这些问题都急需我们采用一些分子影像技术进行分析。生物荧光技术以其分辨率高、无电离辐射、操作简易、可多通路复用等优势在分子检测、细胞标记、活体成像等生物应用中优势明显,而这些性能的保证都紧紧依赖于荧光探针的选择和开发。在传统的荧光探针中,有机小分子染料吸收截面小、光稳定性差不利于长期监测,荧光蛋白又存在基因转染带来的潜在风险。而在新型的纳米荧光探针中,无机量子点的重金属毒性、上转换材料的低荧光量子效率以及碳点的弱组织穿透能力等问题都有待解决。聚合物点（Pdots）以其吸收截面大、荧光量子效率高、辐射跃迁速率快、稳定性高、生物相容性好以及表面易功能化等特性在生物传感、活体成像以及光治疗等方面应用广泛,是基于细胞的治疗与传递体系中完美的纳米药物及检测试剂。针对基于细胞的治疗与药物传递体系中被载药物的实时定量以及载体细胞在宿主体内的分布监测这两个问题,本文主要取得了如下研究成果:（1）对细胞内吞的聚合物点实现了荧光定量并将定量结果用于生物成像及光动力治疗应用。我们通过与电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）的量化结果进行对比,发现以荧光光谱、荧光显微镜以及流式细胞术中获取的荧光信号对细胞内的聚合物点进行定量也能得到相同的结果,即按照我们的标记手法,每个乳腺癌细胞（MCF-7）大致可以内吞1.3×106个直径约为20 nm的聚合物点,并通过亮度对比,我们可以清楚地获得任意特定细胞的内吞数量。另外,我们可以通过改变标记时间的长度对细胞内吞聚合物点的数量进行调控,并利用聚合物点的光动力特性,获取了在特定光能量密度下,光敏剂聚合物点PFBT@Pt对肿瘤细胞MCF-7的半抑制浓度(IC50)。（2）利用掺杂型近红外荧光聚合物点实现了对活体内细胞追踪的三维成像。我们通过将深红光激发聚合物和近红外荧光染料进行掺杂,利用二者之间的F（?）rster共振能量传递,制备出在670 nm处有强吸收、在775 nm处有强荧光,量子效率约为20%的适用于活体成像的近红外聚合物点NIR1,并通过细胞穿膜肽Tat的介导使聚合物点对细胞的标记效率提升了两个数量级。在后续的活体实验中,我们从二维成像和三维成像两种模式采集的图像中均观察到被移植细胞的荧光强度有明显地从肺部向肝部的迁移。（3）设计制备了混杂型近红外聚合物点并利用其观察干细胞与癌细胞在体内的分布差异。我们通过将深红光激发聚合物和近红外荧光聚合物进行掺杂,利用二者之间的F（?）rster共振能量传递,制备出在670 nm处有强吸收、在800 nm处有强荧光,量子效率约为22%的适用于活体成像的混杂型近红外聚合物点NIR2,较于聚合物点NIR1,聚合物点NIR2不仅光谱更红、量子效率更高,同时也避免了染料泄露和聚集的风险。在将细胞穿膜肽Tat介导标记的细胞尾静脉移植入小鼠体内后,我们明显观察到干细胞与癌细胞在活体内的分布差异,通过进一步内脏及冰冻切片的荧光检测,可以细致地分析出干细胞与癌细胞在活体内不同的代谢轨迹。
孙永花[3]（2021）在《NiTi合金表面有序纳米孔涂层的制备及其腐蚀行为与生物学性能》文中研究指明近等原子比的NiTi合金因其独特的形状记忆效应、超弹性、低弹性模量等优点,已作为骨科植入材料被广泛的应用于临床。然而,NiTi合金是一种生物惰性材料,植入人体后,常因细菌感染、无促骨折修复能力或骨整合能力差等问题而导致植入失败。此外,NiTi合金的耐腐蚀性能较差,是其临床应用的另一重要隐患。诸多研究表明,对NiTi合金进行表面改性能够改善其综合性能,因此已被广大科研和临床工作者一致认为是解决上述问题的有效手段。阳极氧化是对阀金属及其合金进行表面改性的一种经济有效的方法,尤其适用于形状复杂的植入材料。通过调整阳极氧化的工艺参数,可以在植入材料表面制备成分和结构不同的涂层。本文通过阳极氧化技术在NiTi合金表面制备Ni-Ti-O纳米孔涂层,首先研究了电解抛光预处理工艺对Ni-Ti-O纳米孔有序度的影响,随后探索了涂层的在溶液中的稳定性以及纳米孔长度对其性能的影响,最后以Zn为代表,研究了涂层作为药物载体的可行性。具体研究结果如下:（1）阳极氧化前对NiTi合金进行电解抛光预处理,能够有效地抑制阳极氧化过程中Ni-Ti-O纳米孔涂层表面不规则层的生成,促使规则有序Ni-Ti-O纳米孔的充分暴露。电解抛光预处理后,Ni-Ti-O纳米孔涂层的厚度增加,耐腐蚀性能提高。同时,由于涂层释放的Ni2+增加,显着提高了抗菌性能。有序纳米孔的暴露可改变骨髓间质干细胞的形态,使其向成骨细胞分化。另外,通过研究电解抛光预处理对Ni-Ti-O纳米管结构的影响,发现电解抛光预处理后Ni-Ti-O纳米管表面的点蚀坑消失,在宏观和微观上形成了规则有序的纳米管。（2）Ni-Ti-O纳米孔涂层在磷酸盐缓冲液（PBS）和去离子水中浸泡60天后仍能很好地保持其多孔结构和非晶态微结构,且化学组成也没有明显改变。耐腐蚀性能、抗菌性能和生物相容性亦无显着退化。此外,研究发现随着浸泡时间的延长,Ni2+的累积释放量减少,分析发现这种现象是由于溶液中Ni2+浓度过饱和导致部分Ni2+以Ni（OH）2的形式在涂层表面析出。（3）改变阳极氧化时间可制备不同长度（1.30-18.5μm）的Ni-Ti-O纳米孔,且随着纳米孔长度的增加,样品的耐腐蚀性能和抗菌性能均提高。纳米孔的长度与髓间质干细胞的I型胶原分泌和细胞外基质矿化能力正相关。（4）通过在Zn（CH3COO）2溶液中对Ni-Ti-O纳米孔涂层进行水热处理,可将Zn元素以ZnTiO3的形式均匀地负载到Ni-Ti-O纳米孔涂层中。水热处理后样品的腐蚀电流密度降低了1个数量级,Ni2+释放量与未处理的纳米孔相比明显减少,但由于Zn2+的持续释放,赋予Ni-Ti-O纳米孔涂层优异的长效抗菌能力。此外,Zn能够促进骨髓间充质干细胞向成骨分化。
邱仁娜[4]（2021）在《氯喹协同载阿霉素还原响应性纳米凝胶抗骨肉瘤的作用与机制研究》文中研究指明背景骨肉瘤是一种原发的恶性骨肿瘤,其恶性度高,生长迅速,转移早,预后差,是青少年癌症死亡的主要原因。目前在发病原因、生物学行为、辅助治疗方式以及评价手段等方面仍存在较多尚待解决的问题,药物的副作用和耐药是化学治疗的主要不足,迫切需要改进策略,以提高治疗效果和安全性。与传统化疗药物相比,纳米药物具有血液循环时间长、肿瘤选择性高、对肿瘤微环境敏感、可控释放等特点,其中具有刺激响应性的聚氨基酸纳米凝胶能够在刺激条件（pH、谷胱甘肽、酶等）下发生形貌或性能方面的转变如溶胀或解组装,帮助纳米药物克服体内多重的生物屏障、显着改善纳米药物的靶向输送和释放,从而提高纳米药物的疗效,并减轻对正常组织的副作用。氯喹能够增加溶酶体的pH值并阻止溶酶体与自噬体的融合,理论上可以帮助纳米药物发生溶酶体逃逸,加速纳米药物在细胞内的药物释放。近些年研究发现,细胞内的自噬异常与肿瘤的发生发展密切相关,氯喹作为一种经典的自噬抑制剂,其抗肿瘤作用得到了广泛的研究。在骨肉瘤的发生发展过程中自噬是作为肿瘤抑制机制促进细胞死亡,还是作为肿瘤存活机制介导耐药性的产生,尚存在争议。目的本研究通过合理设计纳米药物载体,用于克服阿霉素在体内循环、肿瘤富集、肿瘤渗透、细胞内吞和细胞内释放过程中的障碍,达到增效、减毒的目的,并阐明氯喹协同抗骨肉瘤作用的机制。方法1.以mPEG113-NH2为大分子引发剂,引发L-Phe NCA和L-Cys NCA开环聚合制备共聚物mPEG113-P（Phe-co-Cys）,核磁共振波谱、动态光散射（dynamic light scattering,DLS）、透射电镜（transmission eletron microscope,TEM）、傅里叶变换红外光谱分析、元素分析和凝胶渗透色谱分析共聚物的化学结构、粒径和形貌特征,验证稳定性和还原响应性,MTT法检测体外生物相容性。2.纳米沉淀法制备载阿霉素还原响应性纳米凝胶（简称NGs/Dox）,测定载药量和载药效率,DLS、TEM进行粒径和粒子形貌分析,体外阿霉素累积释放曲线和激光共聚焦扫描显微镜（confocal laser scanning microscopy,CLSM）、流式细胞术检测体外释放行为,MTT法检测体外细胞毒性,并验证还原响应性。3.MTT法检测氯喹联合NGs/Dox的体外抗骨肉瘤效果,并考察两药联合应用后的作用性质。4.流式细胞术观察氯喹对于骨肉瘤细胞摄取NGs/Dox的影响,CLSM观察氯喹对于NGs/Dox发生溶酶体逃逸的影响。TEM观察氯喹处理前后骨肉瘤细胞内自噬体的数量变化,Western Blot检测LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ和P62蛋白的表达。5.高效液相色谱法检测SD大鼠血清中阿霉素随时间变化的浓度,经PK solver程序处理数据获得NGs/Dox和阿霉素的清除半衰期、时间曲线下面积、清除率。6.Maestro活体荧光成像系统观察阿霉素荧光在骨肉瘤荷瘤小鼠各脏器和肿瘤的分布情况,并进行半定量分析。7.观察骨肉瘤荷瘤小鼠的肿瘤体积与一般情况、体重变化趋势,并在开始治疗的第21天获取血清、肿瘤组织及各主要脏器,进行生化、组织病理学检测及免疫组织化学分析。结果1.成功制备共聚物mPEG113-P（Phe10-co-Cys5）,TEM结果显示共聚物mPEG113-P（Phe10-co-Cys5）在水溶液中可自组装成球形纳米凝胶（简称NGs）,半径为30.56±3.21nm。DLS测定纳米凝胶半径为40.2±22.7nm,0、2、6、12和24小时粒径均未发生明显变化,在含有10.0mM GSH的PBS中,粒径呈现增大趋势。随着纳米凝胶浓度的增加和时间的推移,两种骨肉瘤细胞的生存率始终维持在95%以上。2.TEM显示NGs/Dox仍呈现出规则的球形外貌,半径为41.67±7.17nm,DLS测得的半径为62.4±32.2nm。3.与阿霉素相比,NGs/Dox表现出持续释放的同时,并未出现明显的突释现象。GSH+组测得的阿霉素释放率均高于GSH-组（72小时P<0.001）。CLSM结果显示随着时间的推移,两种骨肉瘤细胞对于NGs/Dox的摄取逐渐增加,并且逐渐向细胞核内集中。与GSH-组相比,GSH+组细胞内,尤其是细胞核内观察到更强的阿霉素荧光。流式细胞术结果显示NGs/Dox与两种骨肉瘤细胞分别共培养2/6小时,GSH+组细胞内阿霉素荧光强度和阿霉素荧光阳性细胞比例均较GSH-组明显增加。4.NGs/Dox在浓度0.04～10.00mg/L范围内,对于两种骨肉瘤细胞的体外增殖均有一定程度的抑制作用,相较于NGs/Dox（GSH-）组、Dox组,NGs/Dox（GSH+）组能够更加高效地抑制两种骨肉瘤细胞的体外增殖。与CQ-组相比,CQ+组所有检测浓度（0.04～10.00mg/L）的NGs/Dox、阿霉素对于两种骨肉瘤细胞,均表现出更强的细胞增殖抑制作用,阿霉素或NGs/Dox与氯喹联合应用的性质为协同作用。5.CLSM结果显示在没有20.0μM氯喹预处理的条件下,NGs/Dox被细胞摄取4小时发生溶酶体逃逸,在20.0μM氯喹预处理的条件下NGs/Dox被细胞摄取2小时即可发生溶酶体逃逸,继而释放出阿霉素进入细胞核发挥作用。TEM示与对照组相比,在高倍镜下可以观察到大量自噬体。Western blot结果显示相对于CQ-组,CQ+组P62、LC3 Ⅱ表达量均升高。6.药代动力学结果显示NGs/Dox、阿霉素的清除半衰期分别为16.15±2.86、5.64±0.7小时（P<0.001）。NGs/Dox的时间曲线下面积是阿霉素的11.54倍（P<0.001）,而阿霉素的清除效率则为NGs/Dox的7.12倍（P<0.01）。7.离体荧光成像结果显示与阿霉素相比,NGs/Dox在尾静脉给药后的1、6和12小时在肿瘤内均具有更高的荧光强度,12小时的荧光强度半定量结果显示,肿瘤中NGs/Dox组的荧光信号强度值较Dox组明显升高（皮下瘤和原位瘤模型分别为P<0.01,P<0.001）。8.对照组肿瘤体积增长最为迅速,其他治疗组的肿瘤生长均受到不同程度的抑制,大小趋势为 NGs/Dox（CQ+）组<NGs/Dox 组<Dox（CQ+）组<Dox 组<CQ组<对照组。两种荷瘤模型各组间相对肿瘤坏死面积趋势的结果:NGs/Dox（CQ+）组>NGs/Dox 组>Dox（CQ+）组>Dox 组>CQ 组>对照组。各组间 cleaved caspase-3荧光强度的趋势为NGs/Dox组>Dox组>对照组,Ki-67的荧光强度趋势与 cleaved caspase-3 正相反,NGs/Dox（CQ+）组<NGs/Dox 组<Dox（CQ+）组<Dox组<CQ组<对照组。9.荷瘤小鼠体重下降最多的为阿霉素组,小鼠同时出现食欲降低、活动减少的情况,体重下降最少的为NGs/Dox（CQ+）组,组织病理学结果示阿霉素组和Dox（CQ+）组的心脏、肝脏、肺脏和肾脏均呈现出更为严重的损伤,NGs/Dox组和NGs/Dox（CQ+）组接近,较对照组和CQ组更轻。结论1.设计并合成了一种共聚物mPEG113-P（Phe10-co-Cys5）,在水溶液中可自组装成球形纳米凝胶,具有合适的粒径大小和形貌特征,能够在生理环境下保持稳定,并具有良好的还原响应性和生物相容性,可以作为纳米药物载体进行下一步的抗骨肉瘤实验研究。2.NGs/Dox粒径均一、大小合适,能够延长阿霉素在血液循环中的时间,避免其被过早地清除,增加其在骨肉瘤组织中的蓄积,并在骨肉瘤细胞内高谷胱甘肽条件下,响应性地释放阿霉素,与小分子阿霉素相比,能够发挥增效、减毒抗骨肉瘤的作用。3.在K7M2细胞构建的骨肉瘤皮下瘤模型和143B细胞构建的骨肉瘤原位瘤模型中,NGs/Dox联合氯喹在抗肿瘤疗效方面优势更为明显,与单独应用NGs/Dox相比,并未观察到更为严重的毒副作用。4.氯喹通过帮助NGs/Dox溶酶体逃逸和抑制自噬发挥协同抗骨肉瘤作用。
李默,韩德强,赵宇,陈志国[5]（2020）在《使细胞治疗成为攻克疾病的新一代技术手段——陈志国教授》文中进行了进一步梳理作为一种全新的治疗手段,细胞治疗已经成为继手术、化学药物治疗、放射治疗之后的第四种临床治疗手段,并被广泛应用于包括再生医学修复、抗肿瘤治疗等多种重大疾病的临床治疗中。作为首都医科大学宣武医院细胞治疗中心的学术带头人,陈志国教授在细胞治疗领域深耕多年,并取得了多项研究突破,为推动细胞治疗技术从基础研发到临床转化应用做出了贡献。
曹韪凡[6]（2020）在《靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究》文中研究指明近年来,嵌合抗原受体（Chimeric antigen receptor,CAR）修饰的T细胞为代表的靶向免疫细胞治疗方案受到广泛关注。该技术通过在T细胞中转染并表达人工CAR,促使T细胞可以特异性靶向结合肿瘤表面抗原。同时,利用人工CAR胞内段结构域提供T细胞活化信号,使其成为具有精准靶向性、并持续维持杀伤活性的新一代细胞治疗技术,在多种肿瘤治疗领域特别是血液系统肿瘤的治疗中表现出良好的治疗效果。目前,大多数关于CAR的研究主要集中在T细胞,然而伴随而来的细胞因子风暴、脱靶效应等副作用已成为限制CAR-T细胞临床应用的重要因素。针对这些副作用或缺陷,促使我们将注意力转移到以自然杀伤（natural killer,NK）细胞与因子诱导杀伤细胞为代表的非特异性免疫细胞的人工CAR的改造研究中。NK细胞属于先天固有免疫系统中的重要组成部分,是机体天然免疫屏障中的主要承担者。NK细胞在肿瘤的免疫治疗中具有特殊优势。首先,NK细胞不受主要组织相容性复合体识别限制,并且无需抗原提呈细胞就可以激活自身免疫应答反应;其次,NK细胞在过继性细胞回输疗法中,体内存活周期短,不会诱发抗移植物宿主反应,相较于T细胞,NK细胞诱发因子风暴反应可控。然而人体肿瘤细胞可以通过多种免疫逃逸机制逃避NK细胞非特异杀伤作用,使得NK细胞在肿瘤免疫治疗中的作用受到了制约。基于以上因素和前期我们在CAR-CIK细胞研究工作中的基础与策略,本次在NK细胞中引入CAR的修饰改造,引导NK细胞对血液肿瘤细胞靶向杀伤,同时利用CAR胞内段细胞活化信号结构域的表达来增强免疫细胞自身的活性。以B淋巴细胞白血病的特异性靶标CD19为靶点,针对不同来源的NK细胞生物学特点,开展了人工CAR胞内段和跨膜区的改造工作。在胞内段优化过程中,将具有NK细胞活化功能的含有IL-15分子、4-1BB细胞共刺激信号分子、CD3 ζ链胞内区分子、CD8引导链和Kozak序列等胞内段活化结构域相关分子序列进行串联整合,融入到CAR结构中,制备特性化针对NK细胞的人工CAR重组质粒,然后通过病毒载体,在体外进行转导,成功构建出带有靶向识别杀伤功能的人工CAR修饰的NK细胞。同时,优化了 NK细胞体外培养与活化体系,为后续大剂量的细胞制备,开展体外、体内试验以及未来临床试验和应用奠定了基础。在此基础上,为了进一步检验人工CAR修饰细胞的靶向杀伤能力,采用乳酸脱氢酶法、杀伤因子检测和流式细胞检测等多种方法,对构建的CAR-CIK、CAR-NK-92、CAR-NK细胞杀伤效果进行了验证与分析评估。利用药效学,研究分析了我们构建的人工CAR修饰细胞在小鼠急性B淋巴细胞白血病模型中的靶向杀伤作用以及安全性。结果表明,构建的人工CAR修饰细胞具有明显的靶向杀伤能力和可靠的生物安全性。此外,利用单细胞转录组测序技术和基因表达水平以及生物信息学分析,研究脐血NK细胞分别在人工CAR载体转导前后以及增殖过程中基因的表达谱变化。结果显示,以CX3CR1为代表的功能成熟的NK细胞基因高表达,而且具有独特的转录特性,探讨了 NK细胞的发育生物学的分子机制,并针对CD19-CAR-NK细胞技术的临床应用研究进行了再设计与评估。本项研究的创新点在于尝试突破人工CAR细胞方法改造非特异性细胞的技术瓶颈,构建出一套创新优化的CAR-NK制备体系,为拓展人工CAR细胞治疗方案提供技术支撑;改造了 CAR胞内段细胞活化信号分子,以及验证了 CD19-CAR-NK细胞的成药性、有效性以及安全性;这将有利于CAR相关技术在免疫治疗过程中发挥更重要的作用,并为进一步的临床应用研究提供新方法和新思路。主要结果:1.构建了基于CAR-T技术的靶向CD19的CAR-CIK细胞、CAR-NK-92细胞制备体系。2.构建了基于脐血来源的NK细胞靶向CD19的新型CAR-NK细胞技术体系。3.体外实验验证了 CD19-CAR-NK具有显着的靶向细胞杀伤功能,并呈现剂量依赖性特点,特异性杀伤效果明显。4.探索了 CAR-NK细胞最佳NK细胞转导方法,可使用慢病毒载体或逆转录病毒载体对NK细胞进行转导。通过优化的培养体系培养的NK细胞可以获得更好的转导效率。5.利用单细胞测序技术,探讨了脐血NK细胞分别在CAR转导前后以及增殖过程中基因表达谱变化,以CX3CR1为代表的功能成熟NK细胞基因高表达转录特性。6.B淋巴细胞白血病小鼠模型研究结果表明,CD19-CAR-NK细胞在回输后第7天抑瘤率为61%,远高于对照组抑瘤率12%。未产生相关毒性以及致瘤致畸等不良情况,验证了 CD19-CAR-NK细胞具有良好的生物安全性及有效性。
杨桃[7]（2020）在《人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究》文中研究表明糖尿病是以慢性高血糖为特征的代谢性疾病,其发病率逐年上升,日益成为威胁人类健康的重大公共卫生问题。以胰岛移植为代表的β细胞替代治疗在糖尿病治疗方面显示出了巨大的应用前景,但是供体的缺乏限制了其在临床上的大规模运用。获得足够数量的细胞是使其走向临床大规模运用的重要前提,而以多能干细胞分化为胰岛β样细胞的技术路径又存在致瘤的安全风险。寻找其他合适的干/前体细胞可能是解决这些问题的较好选择。研究显示,胆囊上皮存在具有胰腺前体细胞特性的干性细胞,而且这些干性细胞具有向胰岛β细胞方向分化的可能性。然而,现有的细胞分离和培养方法所能获得的干性细胞在数量上都是非常少的,这在很大程度上限制了该领域的研究进展,而且也在很大程度上“朦胧”了以胆囊上皮干性细胞制备胰岛β样细胞的科学设想在转化医学中的潜在意义。为了突破基于胆囊上皮干性细胞向胰岛β样细胞诱导分化体系中的“诱导起始细胞数量有限”这一瓶颈因素,本课题旨在深入认识胆囊与胰腺相互联系的基础上,寻找新的“诱导起始细胞”,并在此基础上发展新的、更为理想的诱导体系,为糖尿病的β细胞替代治疗提供新的思路。为了实现这一目标,本课题从以下几个方面开展了研究:1)探索胆囊与胰腺相互联系:分析以胰十二指肠同源盒1（pancreas duodenal homebox-1,PDX1）、性别决定区框17（sex determining region Y-Box 17,SOX17）、性别决定区框9（sex determining region Y-Box 9,SOX9）和叉头盒蛋白A2（forkhead box protein A2,FOXA2）为代表的胰腺前体细胞特征,以及分别以胰岛素和胰腺淀粉酶为代表的胰腺内、外分泌特征在人原位胆囊上皮的表达情况;2)探索三维培养对于扩增胆囊上皮干性细胞的能力:在无菌条件下,刮取人正常胆囊上皮细胞,包埋入基质胶（matrigel）组成的三维环境中,添加表皮生长因子（epidermal growth factor）、成纤维细胞生成因子10（fibroblast growth factor 10）以及R-脊椎蛋白1（roof plate-specific spondin 1）等生长因子进行培养,评价三维培养扩增胆囊上皮干性细胞的能力;3)探索三维培养胆囊上皮细胞获得的球形克隆的细胞来源:对球形克隆以上皮标志物上皮细胞粘附分子（epithelial cell adhesion molecule,Ep CAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin 19）,极性标志物黏蛋白-1（mucin-1）和层黏连蛋白α1（lamininα1）等进行免疫荧光染色和流式分析鉴定,确定球形克隆的细胞起源;4)探索球形克隆细胞干性特征:以包括PDX1、SOX17、FOXA2和SOX9在内的多种胰腺前体细胞标志对球形克隆进行鉴定,了解球形克隆细胞干性表达和分布情况;5)探索球形克隆细胞向胰岛β细胞方向分化的化学诱导方法:基于已有关于胰岛β细胞“胰腺前体细胞—胰腺内分泌前体细胞—胰岛β细胞”发育进程中不同阶段分子表型的认识,将候选的小分子化合物分为对应的三组,分别以PDX1、神经元素3（neurogenin-3,NGN3）和胰岛素的表达高低作为小分子化合物诱导能力的评价指标,筛选出有效的针对不同发育阶段的小分子化合物的组合,为基于球形克隆细胞为“起始细胞”的胰向分化体系的建立准备条件。本课题的研究实现了对胆囊上皮干性细胞基本特性的认识,发现这些干性细胞是比较理想的糖尿病β细胞替代治疗的诱导起始细胞,同时,建立了一个全新的胰向分化的化学诱导体系。在这些进展中,主要的发现有:1)胆囊与胰腺存在紧密的生物学联系,胆囊明显表达胰腺相关特征。在胰腺前体细胞标志物表达方面,胆囊上皮有差异地表达以PDX1、SOX17、FOXA2和SOX9为代表的胰腺前体细胞标志物,且这些标志物在胆囊颈部表达较高,而在胆囊底部表达较少或无表达。而在胰腺内、外分泌相关特征表达方面,胆囊颈部和底部均未见明显胰岛素表达,淀粉酶则见于胆囊底部,胆囊颈部未见明显表达;2)三维培养体系能够支持胆囊上皮细胞生长,并形成大量由较大核质比的单层细胞组成的具有中空结构的球形克隆,这些克隆可以连续传代培养10代以上。而且,三维培养能够获得数量可观的子代细胞,经由连续4周的传代培养可以将细胞数量由起始的104数量级提升到108数量级;3)球形克隆细胞均表达典型的上皮细胞标志,如Ep CAM和CK19,而以Ep CAM为标志进行流式分析,细胞阳性率为99.98%,表明球形克隆仅来源于胆囊上皮成分。同时,球形克隆细胞呈现极性生长方式,具有明显的顶-基底极性,细胞在朝向克隆中心空腔的一面表达顶端极性标志黏蛋白-1（mucin-1）和蛋白激酶C家族ζ异型体（protein kinase Cζ）,而在与基质胶接触的基底面表达层黏连蛋白α1（lamininα1）;4)球形克隆细胞分别经RT-PCR在m RNA水平和免疫荧光染色在蛋白水平进行鉴定,这些细胞除表达胰腺前体细胞标志PDX1、SOX17、SOX9和FOXA2外,还表达其他常见的干性标志物,如LGR5、CD133等。另外,在以经典的胰腺干细胞标志乙醛脱氢酶1（acetaldehyde dehydrogenase 1）催化无色荧光底物发光的荧光示踪实验中,绿色荧光均匀分布在整个克隆中,显示出干性细胞标志在球形克隆分布的均一性;5)分别以胰腺前体细胞标志PDX1,胰腺内分泌前体细胞NGN3和胰岛β细胞特有标志胰岛素的表达为评价指标,筛选出了PDX1诱导剂BRD7552、Notch信号通路抑制剂DBZ和以及甲状腺素T3的小分子化合物组合。以该化合物组合处理球形克隆,在m RNA水平上经q PCR验证,与未分化细胞相比,诱导分化后的细胞主要的胰岛β细胞标志的表达均有明显升高:PDX1升高了47倍,同源盒蛋白NKX6.1（NK homeobox factor 6.1）升高了56倍,神经源分化因子1（neuronal differentiation 1）升高了41倍,胰腺内分泌前体标志NGN3升高了139倍,胰岛素升高了185倍。这些结果也在蛋白层面经免疫荧光染色得到了证实。综上所述,本课题的研究证实了人消化系统内的胆囊与胰腺的生物学背景之间存在一种潜在的联系,胆囊上皮干性细胞具有一定相似于胰腺前体细胞的基本特性,是比较理想的糖尿病β细胞替代治疗的诱导起始细胞,而且,胆囊似乎可以视为胰腺前体细胞的“储备池”;证明了体外三维培养可以支持胆囊上皮干性细胞的生长,并能扩增出足够数量的具有胰腺前体细胞特征的胆囊上皮干性细胞;以这种细胞作为胰向诱导分化的起始细胞,建立了基于“PDX1诱导剂BRD7552、Notch信号通路抑制剂DBZ和甲状腺素T3”小分子化合物组合的新的、有效的胰向诱导分化体系。这些结果的取得,在一定程度上明了了胆囊上皮干性细胞潜在的应用前景,也为临床糖尿病的β细胞替代治疗提供了新的思路。
吕艳杭,吴姗姗,王振常,温智稀,叶学劲[8]（2020）在《中医药调控干细胞移植治疗肝硬化的研究进展》文中指出肝硬化是严重危害人民健康的重大疾病,其高发病率、高复发率及高致死率的特点,是目前医学界治疗肝硬化的难题。原位肝移植虽然是终末期肝病较理想的治疗方法,但肝脏供体的缺乏、术后高免疫排斥反应及高医疗费用等因素限制了其在临床上的广泛应用。干细胞是一类具有高度分化潜能及自我更新能力极强的细胞,干细胞的移植是目前生命科学及细胞生物学领域的研究热点之一,给肝硬化患者带来了希望,打破了肝硬化后肝细胞不可再生的传统理念。最新研究表明中医药可诱导干细胞迁移、增殖,本文通过论述干细胞移植治疗肝硬化已有的研究成果及中药复方或中药单体协同干细胞移植治疗肝硬化存在的机制,为中医药干预干细胞移植治疗肝硬化提供理论基础。
杨焜[9]（2020）在《沙利度胺治疗β地中海贫血的临床观察与基因多态性对其疗效的影响》文中认为目的:多中心研究沙利度胺治疗β地中海贫血患者的有效性和安全性;探讨HBG2、BCL11A和HBS1L-MYB基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）对其疗效的影响。方法:在中国南方三个临床研究中心招募无法进行常规输血和螯合治疗的β地中海贫血患者。我们评估了使用沙利度胺治疗的短期（3个月）和长期随访（12个月和24个月）的疗效和安全性。对本研究中心因无法进行常规输血和螯合治疗而使用沙利度胺治疗的β地中海贫血患者的疗效反应进行回顾性研究,应用聚合酶连式反应（polymerase chain reaction,PCR）及DNA测序技术对HBG2（rs7482144）、BCL11A（rs11886868、rs4671393、rs766432、rs1427407）和HBS1L-MYB（rs9399137、rs4895440、rs4895441）8个位点多态性分型,分析其与沙利度胺临床反应的关系。结果:患者的总体有效率（overall response rate,ORR）为93.5%,短期随访的主要反应者（main responder,Ma R）和次要反应者（minor responder,Mi R）率分别为62.9%和30.6%。在非输血依赖性地中海贫血（non-transfusion-dependent thalassemia,NTDT）患者中,治疗后血红蛋白（hemoglobin,Hb）水平从基线平均6.8±1.1g/dl增加到9.7±1.9g/dl（P<0.001）。Hb升高主要归因于胎儿血红蛋白（fetal hemoglobin,Hb F）水平的升高。在输血依赖型地中海贫血（non-transfusion-dependent thalassemia,TDT）患者中,在平均Hb水平增加的同时,观察到43.5%（10/23）的患者脱离输血,52.2%（12/23）的患者输血减少50%以上。平均每年输血量从20.7±7.7个单位显着下降到5.8±6.8个单位（P<0.001）。在平均随访14.6±9.6个月（3-37个月）后,这两组患者的反应仍然可以维持。除了一名患者出现周围神经毒性,未观察到其他严重药物相关不良反应的发生。Logistic回归分析表明基线Hb F比率（P=0.038,OR=1.111,95%CI:1.006-1.226）是沙利度胺主要反应的独立危险因素。在Ma R组中HBG2 rs7482144（P=0.015）,HBS1L-MYB rs9399137（P=0.029）、rs4895440（P=0.040）和rs4895441（P=0.040）次要等位基因频率明显高于Mi R+NR组。同样在高Hb组中,这4个SNPs的次要等位基因频率明显高于低Hb组（P值分别为0.001、0.027、0.045和0.045）。在NTDT患者中,随着rs7482144（P=0.011）、rs9399137（P=0.013）、rs4895440（P=0.011）和rs4895441（P=0.011）相关次要等位基因数量的增加,治疗后Hb增量显着升高。这些贡献等位基因对沙利度胺反应有着累积效应。与没有贡献等位基因的患者相比,携带1或3个次要等位基因的患者的沙利度胺主要反应比率逐渐增加（P=0.040-0.018,OR=8.556-11.000）。此外,当评估NTDT患者中4个贡献SNPs的次要等位基因的累积数量时,Hb增量会随着次要等位基因数量的增加而增加（P=0.001）。结论:沙利度胺对β地中海贫血患者具有显着的治疗效果,且疗效反应可以长期维持。周围神经毒性是令人担心的。虽然这些初步结果支持沙利度胺作为β地中海贫血治疗药物具有长期疗效,但在临床应用前仍有一些问题需要解决。HBG2和HBS1L-MYB的SNPs与中国南方β地中海贫血患者的沙利度胺反应密切相关,并且这些SNPs上的次要等位基因的累积数目可以作为该人群中疗效反应的更好的预测指标。
蒋亮[10]（2020）在《基于PROTAC原理的Bcr-AblT315I小分子降解剂的设计合成及活性研究》文中研究表明慢性粒细胞白血病（CML）是骨髓造血干细胞（HSCs）克隆性增殖形成的恶性肿瘤,全球成人年发病率约为1.6/10万,异常的Bcr-Abl融合蛋白是其发病的主要分子机制。第一代Abl激酶抑制剂伊马替尼明显提高了CML患者的存活时间,但靶蛋白突变耐药的快速出现限制了其临床疗效。二代Abl抑制剂如尼罗替尼和达沙替尼等,虽然可以克服大部分Abl突变耐药,但对守门氨基酸T315I突变无效,并且有潜在的心脏毒性。三代Abl抑制剂帕纳替尼（ponatinib）对T315I突变耐药有效,但由于其“致命性血栓和严重血管狭窄性疾病”等副作用被FDA黑框警告,限制了其在临床上的应用。此外,ponatinib对Bcr-AblE255K/V等P-Loop区突变的效果不佳。同时,随着ponatinib在临床的使用,部分CML-BP和Ph+ALL患者易产生含T315I的复合突变（E255K/T315I等）,该类复合突变对包括ponatinib在内所有Abl抑制剂均耐药,治疗预后较差。因此,CML临床耐药仍是尚未完全解决的医学难题,迫切需要安全、高效且有效克服耐药的新药。蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs）是近年发展起来的一项利用双功能小分子来实现靶蛋白选择性降解的新技术。目前已经有基于该技术的靶向AR和ER的分子进入临床研究。PROATC可以实现在低剂量下瞬时结合至靶蛋白并诱导其降解,所以它不太容易受到靶标表达增加和靶蛋白突变的影响,具有克服了对小分子抑制剂的潜在耐药性的优点。科学家已经报道了一些Bcr-Abl PROTAC小分子降解剂,但目前尚无针对Bcr-AblT315I突变体蛋白有效的PROTAC分子的报道。因此,本课题利用新兴PROTAC技术,基于课题组前期研究的ABl T315I抑制剂GZD824设计合成了一系列PROTAC分子,研究其对Bcr-AblT315I蛋白的降解活性和体内外抗肿瘤活性。我们首先合成了一系列连接不同E3连接酶配体的PROTACs分子7a-7f,并研究对不同CML细胞系的抗增殖活性和对Bcr-AblT315I蛋白降解活性。结果表明只有连接泊马度胺（一种CRBN E3配体）的化合物7a才具有中等的降解活性(DR300n M=39.01%)及较强的抗增殖活性(IC50=83.2 n M)。随后固定E3连接酶配体为泊马度胺,通过改变7a的连接链（PEG和直链烷基链）设计合成了两类PROTACs分子7k-7g和7l-7s,并进行构效关系的探讨和活性研究。代表化合物7o（linker为6个碳原子）对Ba F3细胞中Bcr-AblT315I表现出最强的降解效应(D100n M=69.89%,D300n M=94.23%),并对Ba F3-Bcr-AblT315I细胞表现出较好的体外抗增殖活性(IC50=26.8 n M)。作用机制研究显示化合物7o是通过E3泛素-蛋白酶体途径诱导Bcr-AblT315I蛋白降解的,并呈现时间依赖性。且化合物7o对携带Bcr-AblT315I的Ba/F3细胞和携带Bcr-AblWT的K562细胞的降解时效不同,对Bcr-AblT315I在24h时观察到最大程度的降解,而在36h时才观察到对Bcr-AblWT的显着降解。化合物7o腹腔（IP）给药的药代动力学结果证明了其血药浓度远远高于体内诱导Bcr-AblT315I降解起效的浓度。体内活性显示,化合物7o明显抑制了Ba/F3-Bcr-Abl-T315I异种移植瘤的生长（TGI=55.6%）,并显着延长小鼠的中位生存期。本课题的研究为克服CML的临床耐药提供一定的研究基础。
二、干细胞的研究及其在临床上的应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干细胞的研究及其在临床上的应用（论文提纲范文）
（1）猴空泡病毒40大T抗原基因诱导人骨髓间充质干细胞的永生化（论文提纲范文）
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 人骨髓间充质干细胞的培养、传代 |
| 1.4.2 携带猴空泡病毒40大T抗原基因的慢病毒包装 |
| 1.4.3 永生化人骨髓间充质干细胞株的建立 |
| 1.4.4 永生化人骨髓间充质干细胞的鉴定 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 细胞形态学特征 |
| 2.2细胞生长曲线 |
| 2.3 q RT-PCR检测人骨髓间充质干细胞中猴空泡病毒40大T抗原基因的表达 |
| 2.4 Western blot检测人骨髓间充质干细胞中猴空泡病毒40的表达 |
| 2.5 永生化人骨髓间充质干细胞表面标记的表达 |
| 2.6 永生化人骨髓间充质干细胞株的分化潜能 |
| 3 讨论Discussion |
（2）荧光聚合物点的细胞内吞定量及活体内细胞追踪研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 荧光探针 |
| 1.2.1 有机小分子染料 |
| 1.2.2 荧光蛋白 |
| 1.2.3 荧光纳米粒子 |
| 1.3 聚合物点 |
| 1.3.1 共轭聚合物 |
| 1.3.2 共轭聚合物的发光机理 |
| 1.3.3 聚合物点的制备方法 |
| 1.3.4 聚合物点的特性表征 |
| 1.3.5 聚合物点的表面功能化 |
| 1.3.6 荧光聚合物点的生物应用 |
| 1.4 论文选题意义及主要内容 |
| 第2章 细胞内吞聚合物点的荧光定量及其生物应用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验试剂及仪器 |
| 2.2.2 聚合物点的制备及纯化 |
| 2.2.3 聚合物点的荧光稳定性与生物相容性测试 |
| 2.2.4 聚合物点的细胞穿膜肽修饰及其细胞标记 |
| 2.2.5 细胞内吞聚合物点的荧光光谱定量 |
| 2.2.6 细胞内吞聚合物点的电感耦合等离子体质谱定量 |
| 2.2.7 细胞内吞聚合物点的共聚焦显微镜定量和流式细胞术定量 |
| 2.2.8 聚合物点光敏剂对肿瘤细胞半抑制浓度的测定 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 聚合物点PFBT与 PFBT@Pt的制备与表征 |
| 2.3.2 细胞内吞聚合物点的荧光光谱定量和电感耦合等离子体质谱定量 |
| 2.3.3 细胞内吞聚合物点的共聚焦显微镜定量与流式细胞术定量 |
| 2.3.4 聚合物点PFBT@Pt对于肿瘤细胞MCF-7 的半抑制浓度测定 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 掺杂型近红外荧光聚合物点应用于活体内细胞追踪三维成像 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂及仪器 |
| 3.2.2 实验动物 |
| 3.2.3 聚合物点的制备及纯化 |
| 3.2.4 聚合物点生物相容性测试 |
| 3.2.5 聚合物点的细胞穿膜肽修饰及其细胞标记 |
| 3.2.6 细胞体内追踪 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 聚合物点的制备与表征 |
| 3.3.2 细胞穿膜肽介导的聚合物点高效标记 |
| 3.3.3 细胞体内追踪 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 混杂型近红外荧光聚合物点的制备及其活体内多种细胞的追踪应用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验试剂及仪器 |
| 4.2.2 实验动物 |
| 4.2.3 聚合物点的制备及纯化 |
| 4.2.4 聚合物点生物相容性测试及对肿瘤细胞的标记 |
| 4.2.5 人类脐带间充质干细胞的提取 |
| 4.2.6 聚合物点生物相容性测试及对干细胞的标记 |
| 4.2.7 肿瘤细胞与干细胞体内动态追踪 |
| 4.2.8 组织学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 深红光激发、近红外发射聚合物点的制备与表征 |
| 4.3.2 聚合物点的细胞标记与生物相容性测试 |
| 4.3.3 体内肿瘤细胞与干细胞的动态追踪 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（3）NiTi合金表面有序纳米孔涂层的制备及其腐蚀行为与生物学性能（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 生物医用NiTi合金 |
| 1.1.1 NiTi合金的物理特性 |
| 1.1.2 NiTi合金的形状记忆效性 |
| 1.1.3 NiTi合金的超弹性 |
| 1.1.4 NiTi合金的生物相容性 |
| 1.1.5 NiTi合金的耐腐蚀性能 |
| 1.1.6 NiTi合金的抗菌性能 |
| 1.2 生物医用NiTi合金的应用 |
| 1.3 NiTi合金存在的问题 |
| 1.3.1 耐腐蚀性能较差 |
| 1.3.2 抗菌性能无法满足临床需求 |
| 1.3.3 生物活性与骨整合能力不足 |
| 1.4 医用NiTi合金的表面改性方法 |
| 1.4.1 机械表面改性 |
| 1.4.2 物理表面改性 |
| 1.4.3 化学表面改性 |
| 1.5 纳米级形貌的生物学效应 |
| 1.6 本课题的选题背景及研究内容 |
| 1.6.1 选题背景 |
| 1.6.2 主要研究内容 |
| 第2章 实验材料、设备以及检测方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要的实验试剂 |
| 2.3 主要实验设备 |
| 2.4 涂层结构、物相组成、表面化学元素及润湿性分析 |
| 2.4.1 涂层表面、截面形貌及元素分布 |
| 2.4.2 涂层表面的物相组成 |
| 2.4.3 涂层表面元素组成及化学价态分析 |
| 2.4.4 样品表面润湿性分析 |
| 2.5 电化学性能分析 |
| 2.6 Ni~(2+)和Zn~(2+)析出行为 |
| 2.7 抗菌性能分析 |
| 2.7.1 细菌培养基的配制 |
| 2.7.2 细菌的复苏与培养 |
| 2.7.3 平板计数法 |
| 2.7.4 细菌形貌分析 |
| 2.8 细胞相容性分析 |
| 2.8.1 细胞培养基的配制 |
| 2.8.2 骨髓间充质干细胞的提取与培养 |
| 2.8.3 细胞骨架组装 |
| 2.8.4 细胞形貌分析 |
| 2.8.5 细胞毒性分析 |
| 2.8.6 细胞增殖 |
| 2.8.7 碱性磷酸酶(ALP)活性分析 |
| 2.8.8 胶原分泌 |
| 2.8.9 细胞外基质矿化 |
| 2.9 统计学分析 |
| 第3章 NiTi合金表面有序Ni-Ti-O纳米孔/管涂层的制备及其性能评价 |
| 3.1 有序Ni-Ti-O纳米孔涂层的制备及其耐腐蚀性能与生物学性能 |
| 3.1.1 引言 |
| 3.1.2 样品制备 |
| 3.1.3 涂层表面及截面形貌分析 |
| 3.1.4 涂层的物相组成分析 |
| 3.1.5 涂层表面化学元素组成及价态分析 |
| 3.1.6 涂层表面润湿性分析 |
| 3.1.7 电解抛光对涂层耐腐蚀性能的影响 |
| 3.1.8 Ni~(2+)释放行为 |
| 3.1.9 电解抛光对Ni-Ti-O纳米孔抗菌性能的影响 |
| 3.1.10 电解抛光对细胞相容性的影响 |
| 3.1.11 细胞骨架组装 |
| 3.1.12 ALP活性分析 |
| 3.1.13 Ⅰ型胶原的分泌 |
| 3.1.14 细胞外基质矿化 |
| 3.1.15 电解抛光对Ni-Ti-O纳米孔结构及功能影响的讨论 |
| 3.2 有序Ni-Ti-O纳米管涂层的制备及其耐腐蚀性能与生物学性能 |
| 3.2.1 引言 |
| 3.2.2 样品的制备 |
| 3.2.3 电解抛光对Ni-Ti-O纳米管形貌的影响 |
| 3.2.4 电解抛光对Ni-Ti-O纳米管的耐腐蚀性能的影响 |
| 3.2.5 电解抛光对Ni-Ti-O纳米管涂层抗菌性能的影响 |
| 3.2.6 电解抛光对Ni-Ti-O纳米管涂层生物相容性的影响 |
| 3.2.7 讨论 |
| 3.3 本章小结 |
| 第4章 Ni-Ti-O纳米孔涂层在溶液中稳定性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 样品制备 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 浸泡时间及介质对Ni-Ti-O纳米孔表面及截面结构的影响 |
| 4.3.2 浸泡时间及介质对Ni-Ti-O纳米孔涂层的物相组成的影响 |
| 4.3.3 浸泡时间及介质对Ni-Ti-O纳米孔化学组成的影响 |
| 4.3.4 浸泡不同时间后Ni-Ti-O纳米孔涂层的TEM结果 |
| 4.4 浸泡时间及介质对Ni-Ti-O纳米孔涂层耐腐蚀性能的影响 |
| 4.4.1 动电位极化曲线分析 |
| 4.4.2 阻抗分析 |
| 4.5 Ni~(2+)释放 |
| 4.6 抗菌性能分析 |
| 4.7 细胞相容性分析 |
| 4.8 讨论 |
| 4.9 本章小结 |
| 第5章 Ni-Ti-O纳米孔长度对NiTi合金耐腐蚀性、抗菌性能及成骨活性的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 样品制备 |
| 5.3 涂层的形貌、物相组成、表面元素组成及润湿性分析 |
| 5.3.1 涂层的表面及截面形貌分析 |
| 5.3.2 涂层的物相组成分析 |
| 5.3.3 涂层表面元素组成及化学价态分析 |
| 5.3.4 涂层表面润湿性分析 |
| 5.4 Ni-Ti-O纳米孔涂层耐腐蚀性能分析 |
| 5.4.1 动电位极化曲线 |
| 5.4.2 阻抗谱分析 |
| 5.5 Ni~(2+)释放行为 |
| 5.6 不同长度的Ni-Ti-O纳米孔对样品表面生物性能的影响 |
| 5.6.1 样品表面抗菌性能分析 |
| 5.6.2 样品表面细胞的黏附行为分析 |
| 5.6.3 细胞形貌分析 |
| 5.6.4 细胞活性分析 |
| 5.6.5 细胞分化能力评估 |
| 5.7 样品的浸提液对生物性能的影响 |
| 5.7.1 抗菌性能分析 |
| 5.7.2 细胞形貌分析 |
| 5.7.3 细胞活性分析 |
| 5.7.4 细胞的分化能力分析 |
| 5.7.5 讨论 |
| 5.8 本章小结 |
| 第6章 负载Zn的Ni-Ti-O纳米孔涂层的制备及其腐蚀性、抗菌性能和成骨活性 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 样品的制备 |
| 6.3 涂层的形貌、物相组成、表面成分及润湿性分析 |
| 6.3.1 涂层的表面、截面形貌及截面元素分布 |
| 6.3.2 涂层的物相组成 |
| 6.3.3 涂层表面化学元素组成及价态分析 |
| 6.4 涂层的耐腐蚀性能分析 |
| 6.4.1 动电位极化曲线分析 |
| 6.4.2 阻抗分析 |
| 6.5 Ni~(2+)和Zn~(2+)离子析出 |
| 6.6 Zn负载Ni-Ti-O纳米孔涂层表面对生物学性能的影响 |
| 6.6.1 涂层表面抗菌性能分析 |
| 6.6.2 细胞活性分析 |
| 6.6.3 细胞骨架与形貌分析 |
| 6.6.4 骨髓间充质干细胞分化结果 |
| 6.7 Zn负载Ni-Ti-O纳米孔涂层的浸提液对生物性能的影响 |
| 6.7.1 抗菌性能分析 |
| 6.7.2 细胞骨架染色 |
| 6.7.3 细胞活性分析 |
| 6.7.4 细胞分化 |
| 6.8 讨论 |
| 6.9 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间取得的科研成果 |
| 攻读博士期间参与的专利 |
| 致谢 |
（4）氯喹协同载阿霉素还原响应性纳米凝胶抗骨肉瘤的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 骨肉瘤概述 |
| 2.2 骨肉瘤的治疗 |
| 2.2.1 化疗 |
| 2.2.2 手术治疗 |
| 2.2.3 放疗 |
| 2.2.4 免疫治疗 |
| 2.2.5 分子靶向治疗 |
| 2.2.6 其他治疗 |
| 2.2.7 骨肉瘤治疗中存在的问题 |
| 2.3 抗肿瘤纳米药物 |
| 2.3.1 纳米药物概述 |
| 2.3.2 用于肿瘤诊断与治疗的常见纳米药物载体 |
| 2.3.3 纳米药物体内输送所面临的多重关键挑战 |
| 2.3.4 CAPIR级联 |
| 2.4 氯喹的抗肿瘤机制研究 |
| 2.4.1 自噬抑制作用 |
| 2.4.2 肿瘤血管正常化作用 |
| 2.4.3 降低纳米药物的肝脏清除作用 |
| 2.4.4 其他抗肿瘤机制 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验药品及仪器 |
| 3.1.1 主要试剂与药品 |
| 3.1.2 主要仪器与器材 |
| 3.2 共聚物mPEG_(113)-P(Phe-co-Cys)的制备与表征 |
| 3.2.1 聚乙二醇单甲醚端氨基化 |
| 3.2.2 NCA的合成与纯化 |
| 3.2.3 共聚物mPEG_(113)-P(Phe-co-Cys)的合成 |
| 3.2.4 基本表征 |
| 3.2.5 NGs的体外生物相容性分析 |
| 3.3 载阿霉素还原响应性纳米凝胶的制备与表征 |
| 3.3.1 载阿霉素还原响应性纳米凝胶的制备 |
| 3.3.2 NGs/Dox的基本表征 |
| 3.4 NGs/Dox的体外释放 |
| 3.4.1 体外阿霉素累积释放曲线 |
| 3.4.2 细胞内的释放过程 |
| 3.5 氯喹联合NGs/Dox抗骨肉瘤的体外效果评价 |
| 3.5.1 NGs/Dox的体外细胞毒性 |
| 3.5.2 氯喹的体外细胞毒性 |
| 3.5.3 氯喹联合NGs/Dox的体外细胞毒性分析 |
| 3.6 氯喹发挥协同抗骨肉瘤作用的机制 |
| 3.6.1 氯喹对于肿瘤细胞摄取NGs/Dox的作用 |
| 3.6.2 NGs/Dox的溶酶体逃逸 |
| 3.6.3 氯喹自噬抑制作用的表征 |
| 3.7 NGs/Dox体内药物代谢动力学测定 |
| 3.8 骨肉瘤荷瘤动物模型的建立 |
| 3.8.1 K7M2 皮下肿瘤模型 |
| 3.8.2 143B原位瘤模型 |
| 3.9 NGs/Dox的组织分布 |
| 3.10 氯喹协同NGs/Dox的抑瘤效果评价及体内生物安全性分析 |
| 3.10.1 血清学检测 |
| 3.10.2 组织病理学 |
| 3.10.3 免疫组织化学分析 |
| 3.11 统计学分析 |
| 第4章 结果 |
| 4.1 共聚物mPEG_(113)-P(Phe-co-Cys)的表征 |
| 4.2 NGs的稳定性、还原响应性和体外生物相容性评价 |
| 4.3 NGs/Dox的基本表征 |
| 4.4 NGs/Dox的体外阿霉素释放 |
| 4.5 氯喹联合NGs/Dox抗骨肉瘤的体外细胞毒性分析 |
| 4.5.1 NGs/Dox的体外细胞毒性 |
| 4.5.2 氯喹的体外细胞毒性 |
| 4.5.3 氯喹联合NGs/Dox抗骨肉瘤的体外细胞毒性分析 |
| 4.6 氯喹发挥协同抗骨肉瘤作用的机制 |
| 4.6.1 NGs/Dox的肿瘤细胞摄取 |
| 4.6.2 NGs/Dox的溶酶体逃逸 |
| 4.6.3 氯喹的自噬抑制作用 |
| 4.7 NGs/Dox的药物代谢动力学测定 |
| 4.8 NGs/Dox的组织分布 |
| 4.9 氯喹协同NGs/Dox抗骨肉瘤的效果评价 |
| 4.10 氯喹协同NGs/Dox的体内生物安全性分析 |
| 第5章 讨论 |
| 5.1 mPEG_(113)-P(Phe_(10)-co-Cys_5)的制备 |
| 5.2 mPEG_(113)-P(Phe_(10)-co-Cys_5)的表征 |
| 5.2.1 NGs的稳定性 |
| 5.2.2 NGs的还原响应性 |
| 5.2.3 NGs的体外生物相容性 |
| 5.3 体外阿霉素的包装、释放与细胞摄取 |
| 5.3.1 体外阿霉素的包装 |
| 5.3.2 NGs/Dox的体外阿霉素释放与细胞摄取 |
| 5.4 NGs/Dox的药物代谢动力学和组织分布 |
| 5.5 氯喹协同NGs/Dox对骨肉瘤的抑制作用 |
| 5.6 氯喹协同NGs/Dox抗骨肉瘤的减毒效果和体内安全性 |
| 5.7 氯喹的抗骨肉瘤机制研究 |
| 第6章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）使细胞治疗成为攻克疾病的新一代技术手段——陈志国教授（论文提纲范文）
| 1 个人简介 |
| 2 主要学术贡献 |
| 2.1 帕金森病细胞治疗基础和临床转化研究 |
| 2.2 异基因神经干细胞移植引发宿主免疫识别的机制研究 |
| 2.3 干细胞移植治疗帕金森病在小动物和大动物模型上的应用 |
| 2.4 具有体外定向扩增功能的人源化嵌合抗原受体修饰性T细胞(CD19 hsCAR-T)治疗技术 |
| 2.5 以iNSC为药物递送载体的新型抗肿瘤细胞制剂的研发 |
（6）靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 CAR-T的抗肿瘤研究和构建策略 |
| 1.2 人工CAR的结构 |
| 1.2.1 胞外抗原结合区 |
| 1.2.2 胞内细胞信号传导区与跨膜链接区 |
| 1.2.3 CAR-T的抗肿瘤机制及进展 |
| 1.3 CAR-T技术研究和临床应用的瓶颈 |
| 1.3.1 细胞因子风暴 |
| 1.3.2 脱靶效应 |
| 1.3.3 实体瘤应用瓶颈 |
| 1.3.4 转染载体的缺陷 |
| 1.3.5 移植物抗宿主反应与免疫细胞活性维持 |
| 1.3.6 免疫抑制作用 |
| 1.3.7 CAR-T细胞来源的限制 |
| 1.4 NK细胞为代表的非特异性免疫细胞研究 |
| 1.4.1 NK细胞的生物学特性研究 |
| 1.4.2 NK细胞对肿瘤的杀伤机理 |
| 1.5 NK细胞在治疗中的研究进展 |
| 1.5.1 针对血液肿瘤的NK细胞过继性免疫治疗研究 |
| 1.5.2 针对实体瘤的NK细胞相关免疫研究 |
| 1.6 人工CAR修饰的NK细胞构建与研究进展 |
| 1.6.1 CAR-NK分子靶点 |
| 1.6.2 CAR改造NK细胞的临床应用 |
| 1.7 CAR-NK相关的细胞因子介导的内源性NK细胞活化 |
| 1.8 非特异性免疫细胞的选择 |
| 1.8.1 CIK细胞的生物学特性和抗瘤特点研究 |
| 1.8.2 NK细胞来源与筛选 |
| 1.9 特异性分子靶点的研究与选择 |
| 1.10 本研究的目的和意义 |
| 2 CIK细胞人工CAR改造研究 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 实验细胞株与质粒 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 |
| 2.1.3 主要实验试剂及耗材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 外周血单个核细胞的分离和培养 |
| 2.2.2 CAR-T细胞与CAR-CIK细胞的体外制备和体外扩增培养 |
| 2.2.3 CAR表达载体的构建及转化 |
| 2.2.4 病毒转导与检测 |
| 2.2.5 CAR-T细胞体外扩增 |
| 2.2.6 CAR-CIK细胞体外扩增 |
| 2.2.7 细胞计数及细胞形态增殖情况观察 |
| 2.2.8 CAR-CIK和CAR-T细胞免疫表型的检测 |
| 2.2.9 CAR-CIK和CAR-T细胞体外抗肿瘤活性的研究 |
| 2.2.10 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 CAR-T细胞和CAR-CIK细胞体外制备和扩大培养 |
| 2.3.2 设计并构建Psb1576-CD19-CAR重组载体 |
| 2.3.3 扩增CD19片段重组质粒构建和慢病毒的制备 |
| 2.3.4 CD19抗原过表达靶细胞稳定株构建 |
| 2.3.5 CD19-CAR在T细胞中的转导效率和免疫表型 |
| 2.3.6 CD19-CAR在CIK细胞中的转导效率和免疫表型 |
| 2.3.7 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 2.3.8 CIK和CAR-T细胞体外靶向细胞杀伤能力分析比较 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 NK细胞系的人工CAR改造研究 |
| 3.1 实验细胞株与材料试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 目的片段的PCR扩增和胶回收 |
| 3.2.3 表达GFP、IL-15和4-1BB基因的重组载体的构建及转化 |
| 3.2.4 病毒转导 |
| 3.2.5 流式细胞技术检测CAR阳性细胞比例以及表型分析 |
| 3.2.6 乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测CAR-NK-92细胞杀伤活性 |
| 3.2.7 细胞因子释放能力检测 |
| 3.2.8 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 CAR-NK-92重组质粒的设计 |
| 3.3.2 CAR-NK-92重组质粒的载体构建 |
| 3.3.3 CAR-NK-92重组质粒的筛选验证与载体包装和滴度测定 |
| 3.3.4 CAR-NK-92细胞的构建与免疫表型检测 |
| 3.3.5 不同浓度条件培养基对NK细胞扩增倍数的影响 |
| 3.3.6 不同浓度的条件培养基对NK细胞扩增以及活化表型的影响 |
| 3.3.7 CD19-CAR-NK-92细胞体外靶向识别杀伤能力检测 |
| 3.3.8 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 脐血来源的NK细胞人工CAR改造研究 |
| 4.1 实验用细胞材料及试剂配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 脐血单个核细胞分离方法 |
| 4.2.2 脐血NK细胞分离方法 |
| 4.2.3 脐血NK细胞体外扩增培养 |
| 4.2.4 CAR表达载体的改造 |
| 4.2.5 针对NK细胞改良的CD19-CAR载体转导 |
| 4.2.6 CAR-NK细胞体外优化培养 |
| 4.2.7 脐血CAR-NK细胞免疫表型及重要功能性分子表达检测 |
| 4.2.8 脐血CAR-NK细胞对靶细胞的细胞毒作用检测 |
| 4.2.9 细胞因子释放能力检测 |
| 4.2.10 体内动物实验 |
| 4.2.11 过氧化物酶染色法 |
| 4.2.12 细胞总RNA提取与qRT-PCR检测基因表达水平 |
| 4.2.13 免疫印迹实验 |
| 4.2.14 细胞单基因测序与生信分析 |
| 4.2.15 临床研究试验前期方案设计 |
| 4.2.16 统计学数据处理分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 CAR-NK重组质粒的构建 |
| 4.3.2 脐血来源的NK细胞筛选与扩增培养 |
| 4.3.3 重组CD19-CAR载体的转导及转导效率检测 |
| 4.3.4 CD19-CAR-NK细胞分子表达 |
| 4.3.5 NK细胞对靶细胞杀伤作用的测定 |
| 4.3.6 杀伤后细胞因子释放能力检测 |
| 4.3.7 CD19-CAR-NK细胞的动物体内药效检测 |
| 4.3.8 CD19-CAR-NK细胞的动物体内安全性检测 |
| 4.3.9 CD19-CAR-NK细胞的动物模型中药代动力学 |
| 4.3.10 CD19-CAR-NK细胞的高通量测序分析 |
| 4.3.11 CD19-CAR-NK细胞的基因功能分类分析 |
| 4.3.12 CD19-CAR-NK细胞的细胞生物学调控 |
| 4.3.13 临床试验样本病理学分析 |
| 4.3.14 CD19-CAR-NK细胞临床预实验研究 |
| 4.3.15 CD19-CAR-NK细胞临床研究前患者样本分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 讨论 |
| 5.1 非特异性免疫细胞人工CAR的构建及细胞生物学研究 |
| 5.2 体外非特异性细胞扩增活化体系的优化 |
| 5.3 非特异性免疫细胞的选择与理论依据 |
| 5.3.1 CIK细胞方案 |
| 5.3.2 NK-92细胞方案 |
| 5.3.3 脐血NK细胞方案 |
| 5.4 CAR-NK的体内药效和基因表达谱分析 |
| 5.5 超越CAR-T的新型CAR-NK的优势与发展 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
| 博士学位论文修改情况确认表 |
（7）人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 实验结果 |
| 一、人胆囊组织上皮细胞分子特性的鉴定 |
| 二、人胆囊上皮细胞体外三维培养体系的建立 |
| 三、培养的球形克隆上皮特性及极性分析 |
| 四、球形克隆胰腺前体细胞相关特性分析 |
| 五、球形克隆细胞向胰岛β细胞方向的诱导分化 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 类器官的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（8）中医药调控干细胞移植治疗肝硬化的研究进展（论文提纲范文）
| 1 干细胞移植对肝硬化的影响 |
| 1.1 干细胞诱导转分化为肝样细胞 |
| 1.2 干细胞促进肝星状细胞凋亡 |
| 2 干细胞移植治疗肝硬化的实验研究 |
| 2.1 基础实验研究 |
| 2.2 国内外的临床研究 |
| 3 中医药调控干细胞移植治疗肝硬化的机制 |
| 3.1 中药复方调控干细胞移植治疗肝硬化机制 |
| 3.2 中药单体调控干细胞移植治疗肝硬化机制 |
| 4 讨论 |
（9）沙利度胺治疗β地中海贫血的临床观察与基因多态性对其疗效的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 沙利度胺治疗β地中海贫血的临床观察 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 诊断标准 |
| 1.1.2 纳入标准 |
| 1.1.3 排除标准 |
| 1.2 实验试剂、药物与仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 临床观察项目及检测方法 |
| 1.3.2 药物使用与剂量调整 |
| 1.3.3 合并用药 |
| 1.3.4 疗效评估 |
| 1.3.5 病例随访 |
| 1.3.6 异常实验指标评价 |
| 1.3.7 药物不良反应及处理方案 |
| 1.3.8 试验中止与退出 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.2 总体疗效 |
| 2.3 短期随访疗效情况 |
| 2.4 长期随访疗效情况 |
| 2.5 剂量调整对Hb的影响 |
| 2.6 停药对Hb的影响 |
| 2.7 药物反应的预测因素 |
| 2.8 药物安全性 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 中国南方β地中海贫血患者HBG2、BCL11A和HBS1L-MYB多态性与沙利度胺反应的关系 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验试剂、药物与仪器 |
| 1.3 治疗方法及疗程 |
| 1.4 疗效判定及队列设计 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.5.1 临床检测项目及方法 |
| 1.5.2 基因组DNA提取 |
| 1.5.3 DNA纯度与浓度测定 |
| 1.5.4 PCR扩增目的基因片段 |
| 1.5.5 目的基因片段测序 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 基本资料 |
| 2.2 患者地贫基因型分布 |
| 2.3 8个SNPs的等位基因分布和基因型频率 |
| 2.4 8个SNPs次要等位基因对血液学的影响 |
| 2.5 4个贡献SNPs的累积效应 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词表 |
| 综述 沙利度胺治疗β地中海贫血研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（10）基于PROTAC原理的Bcr-AblT315I小分子降解剂的设计合成及活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 慢性粒细胞白血病 |
| 1.2 慢性粒细胞白血病的治疗 |
| 1.2.1 传统治疗法 |
| 1.2.2 靶向治疗法 |
| 1.3 蛋白水解靶向嵌合体技术(Proteolysis Target Chimeras,PROTACs)的研究进展 |
| 1.3.1 泛素-蛋白酶体系统(UPS)及PROTACs的作用机制 |
| 1.3.2 PROTACs的优势 |
| 1.3.3 肽类PROTACs的研究进展 |
| 1.3.4 小分子类PROTACs的研究进展 |
| 1.4 疏水标签技术(Hydrophobic tagging,Hy T) |
| 1.5 靶向Bcr-Abl PROATC降解分子的研究进展 |
| 1.6 本课题研究的目的与意义 |
| 第二章 靶向Bcr-Abl~(T315I) PROTAC降解小分子的设计、合成及相关生物活性研究 |
| 2.1 Bcr-Abl~(T315I) PROTAC降解小分子的设计与合成 |
| 2.1.1 设计思路 |
| 2.1.2 合成路线 |
| 2.2 Bcr-Abl~(T315I) PROTAC降解小分子的测活结果与讨论 |
| 2.2.1 Bcr-Abl~(T315I) PROTAC对 Abl和 AblT315I激酶的抑制活性 |
| 2.2.2 不同E3 配体类Bcr-Abl~(T315I) PROTAC小分子降解活性的构效关系讨论 |
| 2.2.3 CRBN E3 配体类Bcr-Abl~(T315I) PROTAC小分子降解活性的构效关系讨论 |
| 2.2.4 优选化合物7o降解时效及降解机制的研究 |
| 2.2.5 优选化合物7o药代动力学及体内活性的研究 |
| 第三章 全文总结与展望 |
| 第四章 实验部分 |
| 4.1 化学实验 |
| 4.1.1 试剂与仪器 |
| 4.1.2 产物合成与结构表征 |
| 4.2 生物实验 |
| 4.2.1 体外激酶活性的测定 |
| 4.2.2 药代动力学研究 |
| 4.2.3 动物实验 |
| 4.2.4 体外细胞的抑制活性测定 |
| 4.2.5 Western Blot(免疫印迹法)实验 |
| 参考文献 |
| 附录 化合物谱图 |
| 已(待)发表的论文与专利 |
| 致谢 |
四、干细胞的研究及其在临床上的应用（论文参考文献）
- [1]猴空泡病毒40大T抗原基因诱导人骨髓间充质干细胞的永生化[J]. 张露文,戴鹏秀,张翊华,陈奕静,王璟璐,李佳锴. 中国组织工程研究, 2022(13)
- [2]荧光聚合物点的细胞内吞定量及活体内细胞追踪研究[D]. 袁野. 吉林大学, 2021(01)
- [3]NiTi合金表面有序纳米孔涂层的制备及其腐蚀行为与生物学性能[D]. 孙永花. 太原理工大学, 2021(01)
- [4]氯喹协同载阿霉素还原响应性纳米凝胶抗骨肉瘤的作用与机制研究[D]. 邱仁娜. 吉林大学, 2021(01)
- [5]使细胞治疗成为攻克疾病的新一代技术手段——陈志国教授[J]. 李默,韩德强,赵宇,陈志国. 首都医科大学学报, 2020(05)
- [6]靶向CD19抗原的新型嵌合抗原受体NK细胞的优化构建和功能研究[D]. 曹韪凡. 东北林业大学, 2020
- [7]人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究[D]. 杨桃. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [8]中医药调控干细胞移植治疗肝硬化的研究进展[J]. 吕艳杭,吴姗姗,王振常,温智稀,叶学劲. 世界科学技术-中医药现代化, 2020(06)
- [9]沙利度胺治疗β地中海贫血的临床观察与基因多态性对其疗效的影响[D]. 杨焜. 广西中医药大学, 2020(02)
- [10]基于PROTAC原理的Bcr-AblT315I小分子降解剂的设计合成及活性研究[D]. 蒋亮. 暨南大学, 2020(03)