一、CFU-E和其分化细胞的生物物理特性（论文文献综述）
刘歌[1]（2019）在《基于人单核细胞系U937的抗流感药物筛选模型的建立及其应用》文中指出严重的流感感染每年在全球范围导致290,000至650,000人死亡。这些死亡病例通常与流感诱导的过度炎症以及病理损伤高度相关。单纯的抗病毒治疗策略,只能在感染早期取得一定疗效,并不能缓解感染中后期由病毒诱导的炎性损伤。目前已有文献报道,在动物模型中单独使用免疫调理药物或者与抗病毒剂联合治疗能够有效控制由流感引发的炎性病理损伤。因此,开发具有抗炎症等免疫调理活性的新型抗流感药物是对现有流感治疗策略的有力补充。然而,在抗流感免疫治疗领域,由于流感引发炎症的病理机制非常复杂,尚未被完全揭示,相关药物研发进展缓慢,这也导致目前还未有能够通过临床试验、确认具有治疗效果的抗流感免疫调理药物面世。鉴于上述情况,目前迫切需要找到合适的筛选靶标并建立有效的筛选模型来发现更多具有潜在临床应用价值的抗流感免疫调理药物。因此,本研究的主要目的就是建立一个基于细胞的高通量抗流感药物筛选模型,以便达到既能筛选抗病毒药物又能筛选免疫调理药物的目的。本文的第一章是绪论部分,首先简要地介绍了流感病毒的结构种类、复制周期以及流感相关免疫信号通路等研究背景。随后,综述了流感引发的细胞因子风暴以及其中一些重要促炎因子的研究现状,最后回顾了当前针对流感的治疗策略和代表性药物。本文第二章的主要内容是建立一个基于人源单核细胞系U937的高通量抗流感药物筛选模型。我们筛选了7种与流感肺炎病理相关的人源细胞系,从中选择了支持病毒复制和促炎因子表达、且重要促炎细胞因子信噪比最高的人源单核细胞系U937来建立感染模型。通过测试一组具有已知抗病毒或免疫调节活性的化合物,证明了U937模型可以筛选针对流感的抗病毒药物和抗炎药物。接下来,通过优化条件,我们建立了一个基于U937细胞的高通量抗流感药物筛选模型,并验证了其高通量筛选时的表现。数据说明U937细胞模型是一个高效的抗流感药物筛选模型,可多靶标、高通量地筛选具有抗病毒或抗炎症活性的流感治疗药物。本文第三章的主要内容是通过U937模型筛选一个FDA批准的成药库,鉴定并评价那些具有抗病毒或免疫调理活性的抗流感药物。首先,我们利用促炎因子CCL2和CXCL10作为靶标,筛选没有抗病毒活性的单纯免疫调理药物。通过初筛和复筛,我们得到了6种可同时抑制两种促炎因子的候选药物。随后,我们通过增加抗病毒指标,进一步筛选具有抗病毒活性的免疫调理药物。经过初筛和复筛,我们得到了6种可同时抑制病毒复制以及降低两种促炎因子表达的候选化合物。通过进一步的体外和体内的抗流感活性评价,最终发现安非他酮可有效保护致死剂量H1N1 PR8病毒感染的小鼠、减少体重下降程度、提高存活率。通过检测小鼠肺部病毒滴度和炎症病理变化,我们发现安非他酮不但可以降低肺部病毒的滴度,还能够抑制重要促炎因子的表达,并改善流感病毒感染导致的肺部炎症病理损伤。本文第四章的主要内容是使用U937细胞模型,筛选了宿主因子神经递质受体为靶标的小分子药物的抗病毒活性。通过筛选一个包含8种主要神经递质受体相关拮抗剂和激动剂的药物库,我们发现一些与肾上腺素能受体、组胺受体、多巴胺受体和五羟色胺受体相关的化合物更多被发现具有抗流感病毒活性,表明上述四种受体可能在流感感染中发挥了重要作用。同时,我们以流感神经氨酸酶活性来代表病毒复制水平,用于筛选具有抑制活性的抗病毒药物。我们发现了22种IC50在20μM以下的抗病毒化合物,并对其中具有代表性的4种候选药物进行了体外和体内的抗病毒药效评价和初步机制研究。结果表明,这4种药物可在多细胞系上剂量依赖地抑制H1N1流感病毒,同时,还可有效抑制包括奥司他韦耐药株H1N1 H274Y、季节性流感毒株H3N2和IBV在内的三种不同流感毒株。初步机制研究发现,这些药物主要作用于病毒复制的早期阶段,在病毒RNP入核前发挥其抗病毒作用。在体内研究中,我们发现β2肾上腺素受体激动剂异克舒令,可以有效保护致死性流感感染小鼠,其保护作用主要通过降低感染小鼠肺部病毒滴度来实现。综上所述,以流感神经氨酸酶水平作为抗病毒筛选指标,以促炎因子CCL2和CXCL10水平作为抗炎药物筛选指标,U937高通量细胞筛选模型可以用于高效筛选在体内外针对流感的具有抗病毒或抗炎活性的化合物。这一模型不但可以填补现有细胞模型不能用于流感抗炎症药物筛选以及动物模型不适合高通量筛选流感抗炎症药物的不足,还能为深入了解流感病理机制以及新型抗流感药物的研发提供强有力的支持。
安治星[2]（2012）在《VEGF对微小凹结构中SH-SY5Y细胞VGCCs功能响应的影响》文中提出目前，三维细胞培养模型已经成为了细胞与组织工程领域中的研究热点之一。但是以往的研究主要集中在细胞的生长行为方面，极少探讨三维培养模型中的细胞钙通道功能响应以及生长因子VEGF的鉴定。因此，本研究将人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞株）接种于不同的微小凹图式上，评价基底形态及VEGF对SH-SY5Y细胞电压依从式钙离子通道（VGCCs）功能响应的影响。目的比较PLLA平面结构与微小凹图式上SH-SY5Y细胞的生长行为、VGCCs功能响应以及VEGF的分泌差异，从而评价在体外细胞培养的方法中，三维培养模型相较于传统平面培养的差异性，为构建三维细胞生物传感器奠定基础。方法以紫外光光刻、硅蚀刻及软光刻技术制备聚乳酸（poly-L-lactide,PLLA）平面基底及微小凹图式，以共聚焦显微技术结合钙离子荧光染料CalciumGreen-1,AM评价SH-SY5Y细胞在PLLA平面基底和微小凹图式上VGCCs的功能响应性。结合ELISA评价微结构中细胞分泌的标志性生长因子（VEGF）的不同，并研究VEGF对细胞VGCCs功能响应的影响。结果研究发现，分布在微小凹顶部的细胞为二维生长方式，凹内侧壁的为三维生长方式，凹内底部的为近似二维生长方式；可以有效形成三维细胞生长的微结构为孔径100μm，通道宽度为0μm和20μm的两种微小凹图式。以50mM高钾溶液去极化刺激发现，三维及近似二维细胞VGCCs阳性响应比率和反应幅度均明显低于传统二维培养的细胞。通过对不同微结构中SH-SY5Y细胞的VEGF表达水平的检测发现，PLLA微小凹图式上细胞的VEGF分泌量明显高于平面基底上的细胞，而且VEGF对SH-SY5Y细胞的VGCCs功能响应有明显的抑制作用。结论PLLA微小凹图式可以有效形成三维生长方式的SH-SY5Y细胞，通过研究微小凹中细胞VGCCs功能响应以及VEGF分泌发现，三维生长的细胞钙通道功能以及VEGF均不同于传统二维培养的细胞，且VEGF对SH-SY5Y细胞VGCCs功能响应具有明显的抑制作用。总之，研究结果表明，PLLA微小凹图式及VEGF是影响SH-SY5Y细胞VGCCs功能响应性的重要因素，微小凹图式是模拟神经细胞三维生长环境进一步构造三维细胞生物传感器的有效方法。
李吉霞[3]（2010）在《牛乳腺上皮细胞永生化及其多能性的研究》文中认为乳腺上皮细胞具有合成和分泌乳汁的功能,在体外培养条件下仍可保持其特性。乳腺细胞的这一特性对于通过核移植生产转基因动物,尤其是制备乳腺生物反应器具有其它细胞无法比拟的优越性。然而,乳腺细胞在体外很难长期培养,因此,通过转染外源基因使乳腺细胞永生化是非常有意义的。细胞永生化的方法很多,比如转染SV40大T抗原、HPV病毒、过表达一些原癌基因等等。但是这些方法都有使细胞特性发生改变的潜在危险。hTERT能够使细胞发生永生化,又不会使细胞的生物学特征发生改变,因此受到了越来越多的关注。本研究以荷斯坦奶牛的乳腺组织为材料,通过转染hTERT,以期获得了永生化的牛乳腺细胞系。在分离培养乳腺细胞的同时,发现了乳腺细胞中有乳腺干细胞（Mammary stem cells, MSCs）的存在。参照小鼠和人乳腺干细胞分离和培养的方法,分离了牛的乳腺干细胞（Bovine Mammary stem cells, BMSCs）,并对其表面抗原标记特征和分化特征进行了研究;另外,本试验还以乳腺上皮细胞（Bovine mammary epithelial cells, BMECs）和转染了端粒酶的乳腺上皮细胞（hTERT-BMECs）作为供核细胞进行核移植,研究了端粒酶对核移植重构胚发育率的影响。本研究主要获得以下结论:（1）试验分离得到了牛乳腺上皮细胞,对细胞进行鉴定,结果表明乳腺上皮细胞表达细胞角蛋白;通过体外诱导,牛乳腺上皮细胞可以分泌β-酪蛋白。（2）通过比较不同培养环境对乳腺上皮细胞生长的影响,发现添加生长因子EGF或HGF的培养液对牛乳腺上皮细胞的增殖具有重要作用,17β-E2不能单独促进牛乳腺上皮细胞的增殖,但17β-E2可与EGF协同促进牛乳腺上皮细胞的增殖,而与HGF无协同作用。（3）通过转染外源基因hTERT诱导细胞发生永生化,转染后的细胞形态正常、生长活力旺盛,核型正常,无致瘤性,并且有端粒酶活性。目前牛乳腺上皮细胞已传至68代。在激素刺激下,转染后的细胞仍能表达β-酪蛋白,表明细胞功能正常。（4）通过Real Time PCR检测,发现hTERT-BMECs中抑癌基因p53、p16、p14和p21的表达下调,表明hTERT可能引发牛乳腺细胞的某些抑癌基因的下调,从而促进牛乳腺细胞永生化的发生。（5）通过悬浮培养,从乳腺细胞中分离得到了乳腺干细胞;通过免疫组化、RT-PCR以及western blotting等方法对牛乳腺干细胞进行鉴定,发现细胞表达β1-整合素、α6-整合素,以及Oct4、Nanog、Sox2等干性基因。体外诱导分化试验结果表明,乳腺干细胞可以分化为腺上皮样细胞、肌上皮样细胞和导管样结构。（6）以hTERT-BMECs作为供核细胞,观察核移植重构胚的发育情况,结果表明端粒酶活性的高低对核移植胚胎的发育率无显着影响,说明hTERT-BMECs可以作为体细胞核移植的供体细胞。
王金华,岳黎敏,唐军民,孙大公,文宗曜[4]（2003）在《CFU-E和其分化细胞的生物物理特性》文中指出用可诱发小鼠贫血的病毒（anemia-inducing strain friend’s virus,FVA）感染BALB/c小鼠,13 d后取其脾脏,用Ficoll-Urografin分层液（1.070）分离出红系集落形成单位（colony forming unit-erythroid.CFU-E）细胞,用Wright-Giemsa染液染色并用透射电镜进行形态学观察,在培养液加细胞因子,如促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）、白介素3（interleukin-3,IL-3）、干细胞刺激因子（stem cell factor,SCF）,诱导其分化的情况下培养12、24和36h,分别对0、12、24和36 h的细胞进行电泳率、膜的流动性和变形性的测量及红系特异转录因子GATA-1表达（0、12、24和48 h）的检测,发现CFU-E细胞随着分化培养时间增加,其电泳率不断减少,膜的流动性不断增大,细胞的变形性和取向性逐渐变好;CFU-E在0、12和24 h GATA持续高水平表达,而48 h后,其表达明显降低。
二、CFU-E和其分化细胞的生物物理特性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、CFU-E和其分化细胞的生物物理特性（论文提纲范文）
（1）基于人单核细胞系U937的抗流感药物筛选模型的建立及其应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 流感病毒的生物学特征 |
| 1.1.1 流感病毒的种类及结构 |
| 1.1.2 甲型流感病毒的复制周期 |
| 1.2 流感病毒感染与天然免疫 |
| 1.3 流感病毒诱发的细胞因子风暴 |
| 1.3.1 肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α) |
| 1.3.2 I型干扰素(Interferon type I) |
| 1.3.3 白细胞介素1β(Interleukin1β,IL-1β) |
| 1.3.4 白细胞介素6(Interleukin6,IL-6) |
| 1.3.5 白细胞介素8(Interleukin8,IL-8) |
| 1.3.6 单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein1,MCP-1) |
| 1.3.7 调节激活正常T-细胞表达分泌因子(RANTES) |
| 1.3.8 干扰素-γ诱导蛋白质10(Interferonγ-induced protein10,IP-10) |
| 1.4 与流感肺炎病理相关的重要细胞类型 |
| 1.5 流感的治疗策略及抗流感药物研究现状 |
| 1.5.1 抗病毒治疗策略及其研究现状 |
| 1.5.2 抗炎治疗策略以及其研究现状 |
| 1.6 本研究的目的、主要内容和意义 |
| 第2章 人源单核细胞系U937抗流感药物筛选模型的建立 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 七种人源细胞系支持流感病毒复制和诱导炎症因子产生的分析 |
| 2.2.2 U937细胞支持H1N 病毒复制并表达多种促炎细胞因子 |
| 2.2.3 U937细胞支持多种流感病毒复制并表达多种促炎细胞因子 |
| 2.2.4 U937细胞模型对已知抗病毒和抗炎药物的验证性评价 |
| 2.2.5 U937细胞模型条件优化及高通量筛选模型的建立 |
| 2.2.6 利用U937细胞模型进行的高通量筛选 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 对一个FDA成药库的抗流感药物筛选和药效评价 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 药物,试剂和实验动物 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 FDA化合物库初步筛选结果 |
| 3.2.2 复筛具有促炎因子抑制活性的化合物并评价其细胞水平药效 |
| 3.2.3 复筛具有抗病毒活性的候选化合物 |
| 3.2.4 候选化合物体外和体内药效研究 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 利用U937细胞模型筛选针对宿主靶标神经递质受体的抗病毒药物 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 毒株,药物,试剂 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 基于U937模型筛选一个神经递质受体相关的小分子化合物库 |
| 4.2.2 四种候选药物在不同细胞系上毒性与抗流感病毒活性比较 |
| 4.2.3 四种候选药物具有广谱抗病毒活性 |
| 4.2.4 四种候选药物无直接灭活病毒活性 |
| 4.2.5 四种候选药物作用于病毒感染早期 |
| 4.2.6 盐酸异克舒令体内抗病毒、抗炎活性评价 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 论文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（2）VEGF对微小凹结构中SH-SY5Y细胞VGCCs功能响应的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 问题的提出和研究意义 |
| 1.2 国内外目前研究现状 |
| 1.2.1 三维细胞培养的研究现状 |
| 1.2.2 神经细胞电压依从式钙离子通道研究概况 |
| 1.2.3 神经细胞中血管内皮生长因子的研究 |
| 1.3 本文研究目的和研究内容 |
| 1.3.1 研究目的 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.4 技术路线 |
| 1.5 创新之处 |
| 2 SH-SY5Y 细胞与 PLLA 微小凹图式的复合 |
| 引言 |
| 2.1 仪器和材料试剂 |
| 2.1.1 仪器 |
| 2.1.2 主要材料和试剂 |
| 2.2 人神经母细胞瘤细胞与 PLLA 微小凹图式的复合 |
| 2.2.1 人神经母细胞瘤细胞的培养 |
| 2.2.2 PLLA 微小凹图式的制备[4] |
| 2.3 结果及分析 |
| 2.3.1 PLLA 微小凹图式的制备及其与人神经母细胞瘤细胞的复合 |
| 2.3.2 PLLA 微小凹图式上细胞生长行为的评价 |
| 2.4 讨论 |
| 3 SH-SY5Y 细胞在 PLLA 平面基底及微小凹图式里的分化 |
| 引言 |
| 3.1 实验仪器 |
| 3.2 主要材料和试剂 |
| 3.3 方法和步骤 |
| 3.3.1 视黄酸分化液的配制 |
| 3.3.2 细胞形态学观察 |
| 3.4 统计学处理 |
| 3.5 结果及分析 |
| 3.5.1 细胞形态学观察 |
| 3.6 讨论 |
| 4 PLLA 平面基底及微小凹图式下 SH-SY5Y 细胞的 VGCCs 功能响应性 |
| 引言 |
| 4.1 仪器 |
| 4.2 主要材料和试剂 |
| 4.3 方法和步骤 |
| 4.3.1 溶液的配制 |
| 4.3.2 激光共聚焦检测 |
| 4.3.3 统计学处理 |
| 4.4 结果分析 |
| 4.4.1 不同微图式上 SH-SY5Y 细胞分化前的 VGCCs 响应特性 |
| 4.4.2 不同微图式上 SH-SY5Y 细胞分化 5 天后 VGCCs 响应特性 |
| 4.5 讨论 |
| 5 PLLA 二维及微小凹图式上 SH-SY5 Y 细胞 VEGF 分泌及 VEGF 对细胞 VGCCs 功能的影响 |
| 引言 |
| 5.1 仪器 |
| 5.2 材料和试剂 |
| 5.3 实验方法和步骤 |
| 5.3.1 溶液配制 |
| 5.3.2 MTT 检测 |
| 5.3.3 VEGF 分泌的 ELISA 检测 |
| 5.3.4 VEGF 对 SH-SY5Y 细胞 VGCCs 功能响应的影响 |
| 5.3.5 统计学处理 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 MTT 法测细胞数目 |
| 5.4.2 PLLA 平面基底及微小凹图式中 VEGF 的分泌情况 |
| 5.4.3 二维平面基底上 VEGF 对 SH-SY5Y 细胞 VGCCs 功能响应的影响 |
| 5.5 讨论 |
| 6 结论及后续工作展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 后续工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A. 作者在攻读硕士期间科研成果 |
| B. 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目情况 |
（3）牛乳腺上皮细胞永生化及其多能性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 综述部分 |
| 第一章 乳腺的发育 |
| 1.1 乳腺的发育 |
| 1.2 乳腺的细胞组成及其结构 |
| 1.3 激素对乳腺发育的调控 |
| 1.3.1 卵巢激素与乳腺发育 |
| 1.3.2 催乳素与乳腺发育 |
| 1.3.3 生长素与乳腺发育 |
| 1.3.4 其他激素对乳腺发育的影响 |
| 第二章 乳腺上皮细胞研究进展 |
| 2.1 牛乳腺上皮细胞系的建立 |
| 2.2 乳腺上皮细胞的生长特性与形态学特征 |
| 2.3 乳腺上皮细胞分离培养方法 |
| 2.4 乳腺上皮细胞纯化方法 |
| 2.5 激素和细胞因子对乳腺上皮细胞的增殖调控 |
| 2.6 细胞外基质对乳腺上皮细胞的影响 |
| 第三章 乳腺干细胞 |
| 3.1 乳腺干细胞的生物学特征 |
| 3.1.1 乳腺干细胞的基本特征 |
| 3.1.2 乳腺干细胞的自我更新 |
| 3.1.2.1 Wnt 信号通路 |
| 3.1.2.2 Notch 信号通路 |
| 3.1.2.3 Hedgehog 信号通路 |
| 3.1.3 乳腺干细胞的分化 |
| 3.2 乳腺干细胞的分离、培养和鉴定 |
| 3.2.1 乳腺干细胞的分离和纯化 |
| 3.2.2 乳腺干细胞的培养 |
| 3.2.3 乳腺干细胞的鉴定 |
| 3.3 乳腺干细胞的应用前景及存在的问题 |
| 3.3.1 乳腺干细胞的应用前景 |
| 3.3.2 乳腺干细胞研究存在的问题 |
| 试验研究 |
| 第四章 乳腺上皮细胞的分离与培养 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要仪器 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要溶液的配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 乳腺上皮细胞的分离与培养 |
| 4.2.2 乳腺上皮细胞的纯化 |
| 4.2.3 乳腺上皮细胞的传代培养 |
| 4.2.4 乳腺上皮细胞生长曲线的绘制 |
| 4.2.5 乳腺上皮细胞的免疫荧光染色 |
| 4.2.6 乳腺上皮细胞的体外诱导 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 乳腺上皮细胞的形态学特征 |
| 4.3.2 乳腺上皮细胞的生长曲线 |
| 4.3.3 不同生长因子对牛乳腺上皮细胞增殖的影响 |
| 4.3.4 乳腺上皮细胞免疫组织化学染色 |
| 4.3.5 RT-PCR 检测β-酪蛋白的表达 |
| 4.3.7 Western Blotting 检测β-酪蛋白的表达 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 乳腺上皮细胞的分离和纯化 |
| 4.4.2 乳腺上皮细胞的体外培养 |
| 4.4.3 乳腺上皮细胞的鉴定 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 牛乳腺上皮细胞永生化研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 质粒与菌株 |
| 5.1.2 工具酶和试剂 |
| 5.1.3 主要试剂的配制 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 pCI-neo-hTERT 质粒的提取及纯化 |
| 5.2.2 pCI-neo-hTERT 质粒的酶切鉴定 |
| 5.2.3 pCI-neo-hTERT 质粒的大量提取 |
| 5.2.4 新霉素（G418）筛选浓度的确定 |
| 5.2.5 pCI-neo-hTERT 质粒转染乳腺上皮细胞 |
| 5.2.6 G418 筛选及阳性细胞群的获得 |
| 5.2.7 生长曲线的测定 |
| 5.2.8 RT-PCR 检测转染细胞hTERT 的表达 |
| 5.2.9 乳腺上皮细胞免疫组化染色 |
| 5.2.10 RT-PCR 检测β-酪蛋白的表达 |
| 5.2.11 Western blotting 检测β-酪蛋白的表达 |
| 5.2.12 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 5.2.13 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 5.2.14 染色体核型分析 |
| 5.2.15 透射电镜的观察 |
| 5.2.16 端粒酶活性检测 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 pCI-neo-hTERT 质粒扩增和酶切鉴定 |
| 5.3.2 pCI-neo-hTERT 质粒纯度和浓度的检测 |
| 5.3.3 G418 对牛乳腺上皮细胞最佳筛选浓度的确定 |
| 5.3.4 转染后阳性细胞的获得 |
| 5.3.5 hTERT-BMECs 的形态和特征 |
| 5.3.6 生长曲线的绘制 |
| 5.3.7 RT-PCR 检测hTERT 基因的表达 |
| 5.3.8 免疫荧光染色检测hTERT 基因的表达 |
| 5.3.9 RT-PCR 检测β-酪蛋白的表达 |
| 5.3.10 Western blotting 检测β-酪蛋白的表达 |
| 5.3.11 hTERT-BMECs 与BMECs 的细胞周期的比较 |
| 5.3.12 细胞凋亡的检测 |
| 5.3.13 透射电镜观察 |
| 5.3.14 染色体核型分析 |
| 5.3.15 软琼脂实验 |
| 5.3.16 裸鼠实验 |
| 5.3.17 端粒酶活性检测 |
| 5.3.18 hTERT-BMECs p14~(ARF)-p53 通路的变化 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 牛永生化乳腺上皮细胞系的建立 |
| 5.4.2 转染端粒酶基因对牛乳腺上皮细胞的影响 |
| 5.4.3 hTERT-BMECs p14~(ARF)-p53 通路的变化 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 乳腺干细胞的分离、培养及鉴定 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 主要仪器 |
| 6.1.2 主要试剂和溶液的配制 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 BMSCs 的分离与培养 |
| 6.2.2 BMSCs 的诱导分化试验 |
| 6.2.3 乳腺细胞球的免疫荧光染色 |
| 6.2.4 分化细胞的免疫组化染色 |
| 6.2.5 RT-PCR 分析 |
| 6.2.6 Western blot 分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 牛乳腺上皮细胞的生长特性 |
| 6.3.2 牛乳腺干细胞的生长特性 |
| 6.3.3 牛乳腺干细胞体外分化能力鉴定 |
| 6.3.4 牛乳腺干细胞标记物的鉴定 |
| 6.3.5 RT-PCR 检测干性基因 |
| 6.4 讨论 |
| 6.4.1 乳腺干细胞的特征 |
| 6.4.2 乳腺干细胞的自我更新 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 hTERT-BMECs 核移植 |
| 7.1 材料 |
| 7.1.1 卵巢来源 |
| 7.1.2 试剂仪器 |
| 7.2 方法 |
| 7.2.1 卵母细胞的采集和成熟培养 |
| 7.2.2 卵母细胞的去核操作 |
| 7.2.3 供体细胞的准备及注核 |
| 7.2.4 核质复合体的电融合 |
| 7.2.5 核移植胚胎的激活 |
| 7.2.6 核移植胚胎的体外培养 |
| 7.2.7 囊胚差异染色 |
| 7.2.8 统计分析 |
| 7.3 结果 |
| 7.3.1 乳腺上皮细胞永生化对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 7.3.2 乳腺上皮细胞永生化对克隆胚细胞数的影响 |
| 7.4 讨论 |
| 7.4.1 供核细胞端粒酶活性与核移植胚胎的发育 |
| 7.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究的课题 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）CFU-E和其分化细胞的生物物理特性（论文提纲范文）
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 形态学上的观察 |
| 2.1.1 小鼠脾造血祖细胞CFU-E的培养[2] |
| 2.1.2 瑞氏姬姆萨染色 |
| 2.1.3 透射电镜观察小鼠CFU-E |
| 2.2 Western-Blot法[3]检测细胞内GATA-1表达 |
| 2.3 细胞电泳率的测定[4] |
| 2.4 荧光偏振测膜的流动性[5] |
| 2.5 细胞的变形指数和取向指数的测定[7] |
| 3 结果 |
| 3.1 瑞氏姬姆萨染色 |
| 3.2 透射电镜观察 |
| 3.3 Western-Blot法检测GATA-1表达检测 |
| 3.4细胞电泳率 |
| 3.5 膜的流动性 |
| 3.6 变形指数 |
| 3.7 取向指数 |
| 4 讨论 |
四、CFU-E和其分化细胞的生物物理特性（论文参考文献）
- [1]基于人单核细胞系U937的抗流感药物筛选模型的建立及其应用[D]. 刘歌. 中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所), 2019(08)
- [2]VEGF对微小凹结构中SH-SY5Y细胞VGCCs功能响应的影响[D]. 安治星. 重庆大学, 2012(03)
- [3]牛乳腺上皮细胞永生化及其多能性的研究[D]. 李吉霞. 西北农林科技大学, 2010(10)
- [4]CFU-E和其分化细胞的生物物理特性[J]. 王金华,岳黎敏,唐军民,孙大公,文宗曜. 生物物理学报, 2003(04)